Nous tenons à souligner le soutien de l&#39;Université de Chicago Section d&#39;urologie dirigée par le Dr Arieh Shalhav, et le directeur de la recherche urologique Dr Carrie Rinker-Schaeffer. Nous tenons également à souligner l&#39;appui de l&#39;Université de Chicago Comprehensive Cancer Center (UCCCC) dirigée par le Dr Michelle Le Beau. Nous avons également à remercier l&#39;assistance technique d&#39;experts de l&#39;installation Human Tissue Resource Center de base dirigée par le Dr Mark Lingen, et l&#39;aide de Leslie Martin et Mary Jo Fekete. Nous remercions également le Core Facility immunohistochimie dirigée par Terri Li. Ce travail a été financé par l&#39;Université de Chicago Département de chirurgie, la Section d&#39;urologie, un American Cancer Society subvention de recherche institutionnelle (ACS-IRG, # IRG-58-004), un Cancer Center Subvention d&#39;appui (P30 CA14599); La Brinson Foundation, le Fonds Alvin Baum de la famille, de l&#39;Université du conseil de Chicago Cancer Research Foundation femmes; S. Kregel est soutenu par un HHMI: Med-en-Grad Fellowshanche (56006772) et une biologie Subvention de formation sur le cancer (T32-CA09594). Enfin, nous tenons à remercier Robert Clark, Dr. VenkateshKrishnan, et Nathan Stadick pour leur évaluation critique du manuscrit.

Cette étude a été réalisée en stricte conformité avec les recommandations du Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire du National Institutes of Health. Le protocole a été approuvé par l&#39;Université de Chicago Institutional Animal Care et le Comité d&#39;utilisation (IACUC, numéros protocole 72066 et 72231). Tout chirurgie a été effectuée sous anesthésie, et tous les efforts ont été faits pour minimiser la souffrance. L&#39;cellules souches embryonnaires humaines ligne WA01 (H1; NIH-enregistrement # 0043) a été acquis auprès WiCell (Madison, WI) et cultivées en utilisant le protocole d&#39;alimentation indépendante en utilisant mTeSR1 médias (technologies des cellules souches, Vancouver, BC). Les cellules ES ont été utilisés dans les dix passages de décongélation. 1. Isolation du sinus urogénital de souris ou rat embryons <ol><li> Euthanasier une souris timed-enceinte (jour 17.5) ou rat (18,5 jours) par inhalation de CO 2 pendant 5 min. La mort a été confirmée par l&#39;arrêt des signes vitaux chez le rat. Puis casser le cou humanité. Le rà se euthanasiés à ce point. Vaporiser l&#39;éthanol à 70% pour stériliser la peau et les flancs abdominale. Coupez la peau de l&#39;abdomen et les couches musculaires, puis couper l&#39;utérus, séparez les embryons de rat du sac amniotique, et couper le cordon ombilical. Transférer les embryons dans un tube Falcon de 50 ml contenant une solution saline équilibrée de Hank glacée (HBSS) et garder sur la glace. Les foetus sont euthanasiés par décapitation avec des ciseaux chirurgicaux. </li><li> Placez l&#39;embryon en 100 mm boîte de Petri. Bissecter l&#39;embryon avec des ciseaux au niveau de l&#39;ombilic (figure 1A). Retirer l&#39;estomac et l&#39;intestin grêle. Révéler les ovaires et les testicules de l&#39;embryon femelle chez l&#39;embryon mâle (figure 1B et 1C). (Les ovaires sont situés au niveau des pôles caudal des reins. Les testicules sont à peu près au niveau de la vessie). A ce stade de développement, UGSM isolé de deux embryons mâles et femelles sont capables d&#39;induire une lignée épithéliale prostatique en présence de l&#39;hôtela testostérone. 4 Après ce point de temps de développement, cependant, les bourgeons prostatiques commencent à se former dans le UGSM, et l&#39;isolement de UGSM pur est très difficile. 4 </li><li> Sous le microscope de dissection, couper la paroi abdominale dans la ligne médiane avec Vannas ciseaux pour exposer la vessie et la paroi postérieure de l&#39;abdomen. Libérer le tractus génital supérieur de pièces jointes (dans les embryons mâles, couper l&#39;uretère, Wolff conduit et conduit Müllerian; dans les embryons femelles, couper l&#39;uretère et Müllerian conduit). Libérer la vessie du cordon ombilical. Couper os pubien et carrément séparée de la paroi antérieure du sinus urogénital avec Dumont pince fine de pointe. Enfin, séparer la paroi postérieure du sinus urogénital du rectum. Couper le sinus urogénital avec la vessie à l&#39;extrémité inférieure (à partir de l&#39;urètre) et stocker le sinus urogénital en bloc (avec la vessie) dans du HBSS froid glace. </li></ol> 2. La séparation de la Mesenchyme des sinus urogénital <ol><li&gt; Retirez la vessie du sinus urogénital sous le microscope de dissection (figure 1D). </li><li> Transférer le sinus urogénital dans un tube Falcon contenant 1% de trypsine en calcium (Ca2 +) et magnésium (Mg 2 +) de HBSS libres. Placer le tube dans un réfrigérateur à 4 ° C pendant 75 min. </li><li> Retirez la trypsine et de neutraliser la trypsine avec 10% de sérum bovin foetal (FBS) en milieu DMEM/F12. </li><li> Taquiner soigneusement le manchon mésenchymateuses collant du tube épithélial avec une aiguille ou Dumont pince fine de pointe (maintenir le tube épithélial intact réduit les risques de contamination des cellules épithéliales du mésenchyme, ce qui peut entraîner des glandes de rongeurs formant avec votre cellule souche dérivée de l&#39;homme épithélium glandulaire) (figure 1D). 12 </li><li> Transfert UGSM dans un nouveau tube Falcon contenant du milieu DMEM/F12 + 10% de FBS + 1% pénicilline / streptomycine (Pen / Strep; 0,5 mg / ml) + 1% d&#39;acides aminés non essentiels (NEAA) plus 1 nM R1881. Place le tube dans un incubateur à 37 ° C avec 5% de CO 2 pendant la nuit. </li><li> Centrifuger le tissu à 200 xg et jeter le surnageant. Laver avec tampon phosphate salin (PBS) (ne pas perturber le culot tissulaire). </li><li> Ajouter 0,2% de collagénase (en DMEM/F12) pour remettre en suspension les tissus. Incuber à 37 ° C avec doux balancement pendant 1 heure. </li><li> Vigoureusement vortex du tissu digestion trois fois jusqu&#39;à ce qu&#39;il devienne mélange unique cellule homogène et ajouter du milieu DMEM/F12 + 10% de FBS + 1% P / S + 1% NEAA + 1 nM R1881 pour neutraliser la collagénase. </li><li> Centrifuger à 200 xg, puis lavez en re-suspension des cellules de UGSM dans HBSS, et répéter trois fois pour se laver entièrement le UGSM. Enfin suspendre cellules mésenchymateuses en DMEM/F12 et compter les cellules en utilisant un hématimètre ou dispositif de comptage cellulaire. </li><li> Dissocier les cellules hES culture protocole utilisant des liaisons de libre avec mTeSR1 médias (Stem Cell Technologies, Vancouver, BC) en utilisant une digestion Accutase (Millipore, Billerica, MA). Laver les cellules hESau cours de la phase logarithmique de la croissance de leur chaleureux DMEM/F12 médias, puis ajouter la solution chaude Accutase 1x, et incuber à 37 ° C pendant 15-20 min jusqu&#39;à ce que les cellules individuelles sont uniformément dissociées de colonies. Ajouter une quantité égale de 1x défini trypsine inhibiteur (Invitrogen, Grand Island, NY) pour neutraliser l&#39;Accutase et la pipette doucement de haut en bas pour mélanger et diviser amas de cellules. cellules de pipette dans un tube à centrifuger et centrifuger 3 min à 200 xg, et remettre en suspension le culot cellulaire dans DMEM/F12 médias. Tube à centrifuger 3 min à 200 xg encore et éliminer le surnageant, puis remettre en suspension dans HBSS froid ou DMEM/F12 au volume désiré. </li><li> Ajouter cellules hES avec un ratio 1:2,5 de hES / cellules mésenchymateuses. 3 Ce sera une composition cellulaire de 1E 5 cellules UGSM avec 4E 4 CSEh par 10 ml (injection d&#39;un seul rat UGS généralement des rendements d&#39;environ 6 cellules mésenchymateuses 2E). Centrifuger à 200 g pendant 5 min, puis jeter le surnageant. Re-suspendre avec 75% Matrigel (BD Biosciences,San José, en Californie, mélangé avec 25% HBSS froid pour une manipulation facile) et placer le tube dans la glace pour l&#39;injection de la capsule sous-rénale. </li></ol> 3. La transplantation de tissu recombinant Sous la capsule rénale <ol><li> Préparer une zone chirurgicale stérile. </li><li> Anesthésier la souris nude athymique mâle avec ip kétamine / xylazine, utiliser un mélange frais contenant un rapport de la kétamine 01:01:08: xylazine: saline. Le dosage sera de 100 mg / kg de kétamine et 2,5 mg / kg de xylazine. Les animaux qui ne répondent pas à un orteil-pincement doivent être entièrement sous pendant 20-30 min. </li><li> Préparer chirurgicalement la souris par le rasage du site opératoire (si vous n&#39;utilisez pas une souris nude), le nettoyage avec trois lingettes alternance de 70% d&#39;alcool suivie d&#39;une solution de bétadine et en appliquant un champ opératoire. </li><li> Mettez œil salve d&#39;humidité (Altalube pommade ophtalmique) aux yeux de la souris pour éviter le dessèchement pendant l&#39;anesthésie. </li><li> Au cours de la chirurgie, la vitesse de respiration et la température centrale du corps de la souris sont surveillés. Les taux de respiration shoULD être stable et maintenu à l&#39;intérieur de 40-90 respirations / min. la température du corps de base est contrôlé par l&#39;observation de la couleur des muqueuses et de la plante des pieds roses. </li><li> Faire une incision cm de la peau longitudinal 1,0 longtemps sur le dos. Continuer à couper la paroi abdominale dans une incision longitudinale de 0,5 cm. </li><li> Appuyez doucement sur le rein de l&#39;abdomen et de garder l&#39;humidité de la surface du rein en utilisant des gouttes de solution saline stérile. </li><li> Doucement percer la capsule rénale en utilisant un vide de calibre 27 aiguille de seringue. Une ponction très faible est suffisante. Ce sera le lieu où vous insérez votre aiguille émoussée d&#39;injecter votre mélange cellulaire. </li><li> Remplir une aiguille de seringue émoussée de calibre 28 avec 10 pl de votre mélange de cellules. Insérez délicatement le site de ponction et pénétrer dans le parenchyme rénal pour atteindre une zone en dessous de la capsule rénale. Injecter 10 ul du mélange cellulaire pour former un bolus sur le rein sous la capsule rénale. Retrait de l&#39;aiguille. </li><li> Retour du rein à la abdocavité terminal. Fixez la couche musculaire du péritoine avec des sutures de nylon 4-0. </li><li> Fermez la peau soit avec suture ou des agrafes. </li><li> Nettoyer le sang de la peau en utilisant une solution saline stérile. </li></ol> 4. L&#39;analgésie post-opératoire et suivi <ol><li> Injecter l&#39;animal avec la buprénorphine (0,1 mg / kg toutes les 12 heures) ou le kétoprofène (3-5 mg / kg dans une solution saline chaque 12 h) pour gérer la douleur post-opératoire, et 1 ml de 37 ° C IP saline pour garder l&#39;animal au chaud et de prévenir la déshydratation. </li><li> Placez l&#39;animal dans une cage propre et placez-le sur un coussin chauffant doux. </li><li> Envoyez les animaux dos à la salle des animaux une fois qu&#39;ils reprennent conscience et se déplacent à l&#39;intérieur de la cage. </li><li> Observez l&#39;animal quotidiennement les signes inattendus de maladie et d&#39;infection pour les trois jours suivants. Les souris sont surveillés par l&#39;observation des activités dans des cages dont la nourriture accéder et d&#39;eau 1 jour post-opératoire. Si les souris présentent moins d&#39;activités, kétoprofène est intrapéritonéale annonceson ministère à nouveau une fois par jour. </li><li> Retirez les agrafes de la peau ou des sutures deux semaines post-chirurgie. </li><li> Tissus xénogreffes peuvent être récoltées dès 8 semaines après la chirurgie. Xénogreffes peuvent être imagées in vivo en utilisant des ultrasons pour petits animaux (figure 2A), et des tissus fixés peuvent être sectionnés et colorés pour diverses protéines par immunohistochimie (Figure 3). </li></ol>

<ol>
	<li>Taylor, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+prostate+tissue+from+embryonic+stem+cells.">Formation of human prostate tissue from embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 179-181 (2006).</li><li>Cunha, G. R., Chung, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+interactions--I.+Induction+of+prostatic+phenotype+in+urothelium+of+testicular+feminized+(Tfm/y)+mice.">Stromal-epithelial interactions--I. Induction of prostatic phenotype in urothelium of testicular feminized (Tfm/y) mice.</a> J. Steroid Biochem. 14, 1317-1324 (1981).</li><li>Cunha, G. R., Chung, L. W., Shannon, J. M., Taguchi, O., Fujii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone-induced+morphogenesis+and+growth:+role+of+mesenchymal-epithelial+interactions.">Hormone-induced morphogenesis and growth: role of mesenchymal-epithelial interactions.</a> Recent Prog. Horm. Res. 39, 559-598 (1983).</li><li>Staack, A., Donjacour, A. A., Brody, J., Cunha, G. R., Carroll, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+urogenital+development:+a+practical+approach.">Mouse urogenital development: a practical approach.</a> Differentiation. 71, 402-413 (2003).</li><li>Cunha, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+abnormal+development+of+the+male+urogenital+tract.+Role+of+androgens,+mesenchymal-epithelial+interactions,+and+growth+factors.">Normal and abnormal development of the male urogenital tract. Role of androgens, mesenchymal-epithelial interactions, and growth factors.</a> J. Androl. 13, 465-475 (1992).</li><li>Cunha, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+as+mediators+of+androgen+action+during+the+development+of+the+male+urogenital+tract.">Growth factors as mediators of androgen action during the development of the male urogenital tract.</a> World J. Urol. 13, 264-276 (1995).</li><li>Aboseif, S., El-Sakka, A., Young, P., Cunha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+reprogramming+of+adult+human+epithelial+differentiation.">Mesenchymal reprogramming of adult human epithelial differentiation.</a> Differentiation. 65, 113-118 (1999).</li><li>Marker, P. C., Donjacour, A. A., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal,+cellular,+and+molecular+control+of+prostatic+development.">Hormonal, cellular, and molecular control of prostatic development.</a> Dev. Biol. 253, 165-174 (2003).</li><li>Cunha, G. R., Sekkingstad, M., Meloy, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterospecific+induction+of+prostatic+development+in+tissue+recombinants+prepared+with+mouse,+rat,+rabbit+and+human+tissues.">Heterospecific induction of prostatic development in tissue recombinants prepared with mouse, rat, rabbit and human tissues.</a> Differentiation. 24, 174-180 (1983).</li><li>Van der Griend, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+CD133+in+Normal+Human+Prostate+Stem+Cells+and+Malignant+Cancer+Initiating+Cells.">The Role of CD133 in Normal Human Prostate Stem Cells and Malignant Cancer Initiating Cells.</a> Cancer Res. 68, 9703-9711 (2008).</li><li>Van der Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-label+centromere+and+telomere+FISH+identifies+human,+rat,+and+mouse+cell+contribution+to+Multispecies+recombinant+urogenital+sinus+xenografts.">Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts.</a> Prostate. , (2009).</li><li>Vander Griend, D. J., Konishi, Y., De Marzo, A. M., Isaacs, J. T., Meeker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-label+centromere+and+telomere+FISH+identifies+human,+rat,+and+mouse+cell+contribution+to+Multispecies+recombinant+urogenital+sinus+xenografts.">Dual-label centromere and telomere FISH identifies human, rat, and mouse cell contribution to Multispecies recombinant urogenital sinus xenografts.</a> Prostate. 69, 1557-1564 (2009).</li><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Ludwig, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-independent+culture+of+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-independent culture of human embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 637-646 (2006).</li><li>Prokhorova, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratoma+formation+by+human+embryonic+stem+cells+is+site+dependent+and+enhanced+by+the+presence+of+Matrigel.">Teratoma formation by human embryonic stem cells is site dependent and enhanced by the presence of Matrigel.</a> Stem Cells Dev. 18, 47-54 (2009).</li><li>Hameed, O., Sublett, J., Humphrey, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+stains+for+p63+and+alpha-methylacyl-CoA+racemase,+versus+a+cocktail+comprising+both,+in+the+diagnosis+of+prostatic+carcinoma:+a+comparison+of+the+immunohistochemical+staining+of+430+foci+in+radical+prostatectomy+and+needle+biopsy+tissues.">Immunohistochemical stains for p63 and alpha-methylacyl-CoA racemase, versus a cocktail comprising both, in the diagnosis of prostatic carcinoma: a comparison of the immunohistochemical staining of 430 foci in radical prostatectomy and needle biopsy tissues.</a> Am. J. Surg. Pathol. 29, 579-587 (2005).</li><li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis.">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li><li>Yao, V., Parwani, A., Maier, C., Heston, W. D., Bacich, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+expression+of+prostate-specific+membrane+antigen,+a+tissue+differentiation+antigen+and+folate+hydrolase,+facilitates+prostate+carcinogenesis.">Moderate expression of prostate-specific membrane antigen, a tissue differentiation antigen and folate hydrolase, facilitates prostate carcinogenesis.</a> Cancer Res. 68, 9070-9077 (2008).</li><li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+stromal-epithelial+interactions+in+hormonal+responses.">Role of stromal-epithelial interactions in hormonal responses.</a> Arch. Histol. Cytol. 67, 417-434 (2004).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Yu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+with+two+independent+internal+promoters+transfer+high-level+expression+of+multiple+transgenes+to+human+hematopoietic+stem-progenitor+cells.">Lentiviral vectors with two independent internal promoters transfer high-level expression of multiple transgenes to human hematopoietic stem-progenitor cells.</a> Mol. Ther. 7, 827-838 (2003).</li><li>Anderson, J. S., Bandi, S., Kaufman, D. S., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+normal+macrophages+from+human+embryonic+stem+(hES)+cells+for+applications+in+HIV+gene+therapy.">Derivation of normal macrophages from human embryonic stem (hES) cells for applications in HIV gene therapy.</a> Retrovirology. 3, 24 (2006).</li><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li><li>Maherali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-efficiency+system+for+the+generation+and+study+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A high-efficiency system for the generation and study of human induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 340-345 (2008).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont aucun conflit d&#39;intérêt avec le travail présenté.

recombinaison de tissus à l&#39;aide UGSM est une technique extrêmement utile pour étudier l&#39;évolution de la prostate et les événements moléculaires menant à l&#39;initiation du cancer de la prostate. Le potentiel d&#39;induction de UGSM a été utilisé pour de nombreuses applications dans la recherche de la prostate, il s&#39;agit notamment de renforcer la tumeur prendre des lignes et des tumeurs des cellules de la prostate, l&#39;étude des interactions stroma-épithéliales, et former des recombinants de...

Il ya un énorme besoin de meilleurs systèmes de modèles humains de cancer de la prostate. En particulier, des systèmes modèles pertinents de l&#39;homme, des tissus de la prostate non malignes normales qui peuvent être manipulées génétiquement pour discerner directement le rôle des gènes spécifiques dans le déclenchement du cancer de la prostate serait extrêmement instructif. L&#39;avènement de l&#39;ère de la génomique a identifié de nombreux gènes qui pourraient avoir un rôle dans la formation du cancer. Un manque de systèmes modèles expérimentaux humains, cependant, compromet gravement notre capacité à tester fonctionnellement et caractériser les gènes de susceptibilité au cancer de la prostate candidats. Un système modèle idéal serait de faciliter les analyses fonctionnelles rapides et plus rapide de gènes de susceptibilité au cancer en combinaison avec des systèmes modèles de rongeurs transgéniques appropriés. En outre, un tel système de modèle humain permettrait caractérisation moléculaire des mécanismes de signalisation de la carcinogenèse prostatique vers la découverte et la validation de nouvelles thérapies pourprévenir la formation de cancer de la prostate. Les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sont capables de former des tissus prostatiques humains comme des xénogreffes. En 2006, Taylor, et al. Rapporté que les CSEh peuvent être amenés à former des épithéliums de la prostate in vivo lors d&#39;une nouvelle combiné avec rongeur sinus urogénital mésenchyme (UGSM) dans un délai de 8-12 semaines. 1 Ces études étaient fondées sur les travaux antérieurs de le laboratoire Cunha montrant que les rongeurs UGSM embryonnaire peut favoriser la différenciation de la prostate des cellules souches et des populations de cellules épithéliales embryonnaires in vivo. 2,3 La prostate se développe à partir d&#39;une anlagen embryonnaire appelé le sinus urogénital (UGS), et avant le jour embryonnaire 17 (E17 souris ; jour E18 chez le rat) l&#39;UGS peuvent être enlevés et physiquement divisé en épithélium (UGSE) et le mésenchyme (UGSM) 4 Cette approche de recombinaison de tissu a considérablement amélioré notre compréhension du développement de la prostate et la carcinogenèse, en particulier.facteur de croissance des Ly et des voies de signalisation hormonales et les relations moléculaires entre la prostate stroma et de l&#39;épithélium. 5-8 Cette méthode implique la combinaison ex vivo de UGSM avec la tige ou les cellules épithéliales de même ou d&#39;espèce distincte et ces recombinants cellulaires / tissu sont implantées et développées et xénogreffes au sein souris hôte. 4,9 Après une période de croissance in vivo, l&#39;implant contient la prostate structures glandulaires épithéliales intégrés dans le tissu stromal. En outre coloration peut être effectué afin de déterminer si ces structures sont vraiment de la prostate et d&#39;origine humaine 10,11.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>14170</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM/F12</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>11330</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>R1881</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>965-93-5</td>
 <td>Mix to 1 ug/ml in Ethanol (1,000x stock)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NEAA</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>11140</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pen-Strep Solution</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>15070</td>
 <td>100x stock</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>354230</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>KETASET (ketamine hydrochloride) </td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-2013-01</td>
 <td>100 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed (xylazine) </td>
 <td>VET-A-MIX, Inc.</td>
 <td>NADA 139-236</td>
 <td>20 mg/ml; dilute 1:10 in sterile saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trypsin</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>215240</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>C2014</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen </td>
 <td>Fort Dodge</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>100 mg/ml; dilute 1:1,000 in sterile saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Altalube eye ointment </td>
 <td>Altaire Pharmaceuticals, Inc.</td>
 <td>NLC 56641-19850</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Leica MZ16 F Stereomicroscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td></td>
 <td>Any good dissecting scope can be used.</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vannas spring scissors</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>15001-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>84855</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hamilton Needle, Small RN, 28 gauge, 0.5inches, Point Style #3 (Blunt)</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-02 </td>
 <td>Custom Needle </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethanol Prep Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>06-669-62 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Gauze Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>22-415-469 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethicon Vicryl Suture (4-0 FS-2)</td>
 <td>MedVet International</td>
 <td>J392H </td>
 <td>Needle-in, dissolvable suture </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Autoclip 9 mm Wound Clips</td>
 <td>Becton Dickenson</td>
 <td>427631</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PVP Iodine Prep Pads</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>06-669-98 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissector scissor with blunt end</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14072-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont fine tip forceps</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11252-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle holder with Scissor</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12002-14</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

formation of human prostate epithelium using tissue recombination of rodent urogenital sinus mesenchyme and human stem cells

Progrès dans la recherche du cancer de la prostate est sévèrement limitée par la disponibilité des systèmes modèles d&#39;origine humaine et hormones naïve, qui limitent notre capacité à comprendre les événements génétiques et moléculaires qui sous-tendent l&#39;initiation de la maladie de la prostate. Vers le développement de meilleurs systèmes modèles pour l&#39;étude de la prostate humaine carcinogenèse, nous et d&#39;autres avons profité de l&#39;unique potentiel inductif pro-prostatique embryonnaire rongeur prostate stroma, appelés sinus urogénital mésenchyme (UGSM). Quand recombiné avec certaines populations de cellules pluripotentes comme les cellules souches embryonnaires, UGSM induit la formation de la prostate humaine normale épithéliums d&#39;une manière dépendante de la testostérone. Un tel système de modèle humain peut être utilisée pour étudier expérimentalement et tester la capacité des gènes de susceptibilité au cancer de la prostate candidats à un rythme accéléré par rapport aux études typiques transgéniques de rongeurs. Comme les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) peuvent être génétiquement modifiés dans la culture usinvecteurs knock-down avant recombinaison des tissus expression génique inductible g ou siRNA, un tel modèle facilite tester les conséquences fonctionnelles des gènes ou des combinaisons de gènes, qui sont pensés pour favoriser ou empêcher la cancérogenèse. La technique d&#39;isolement de populations pures de cellules UGSM, cependant, est difficile et l&#39;apprentissage nécessite souvent quelqu&#39;un avec une expertise précédente pour enseigner personnellement. Par ailleurs, l&#39;inoculation de mélanges de cellules sous la capsule rénale d&#39;un hôte immunodéprimé peut être techniquement difficile. Ici, nous décrivons et illustrons bonne isolation de UGSM à partir d&#39;embryons de rongeurs et rénale implantation de la capsule de mélanges de tissus pour former l&#39;épithélium de la prostate humaine. Une telle approche, à son stade actuel, nécessite in vivo de xénogreffes de cellules souches embryonnaires, les applications futures pourraient inclure dans la formation de la glande vitro ou l&#39;utilisation de populations de cellules souches pluripotentes induites (CISP).

S&#39;appuyant sur ​​le rapport passionnant par Taylor, et al., Notre laboratoire a élaboré un protocole greffe utilisant le H1 couramment utilisé (NIH, désignée WA01, génétiquement mâle) lignée de cellules souches embryonnaires humaines. 1 Cette ligne a été rigoureusement testé pour le contrôle de la qualité et est caryotype normale 13 Lorsqu&#39;elle est cultivée de manière appropriée, les cellules hES peuvent être maintenues, élargi, et cryoconservés dans un éta...

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Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Pour élucider les mécanismes moléculaires qui sous-tendent premiers cancer de la prostate initiation, roman et systèmes de modèles humains et des approches novatrices ont désespérément besoin. Le potentiel de pré-prostatique sinus urogénital mésenchyme (UGSM) pour inciter les populations de cellules souches pluripotentes pour former l&#39;épithélium de la prostate humaine est un outil puissant dans la recherche expérimentale de la prostate.

Formation de l&#39;épithélium de la prostate humaine utilisant la recombinaison des tissus de rongeurs urogénital Mesenchyme des sinus et des cellules souches humaines

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K vues.  University of Chicago. Pour élucider les mécanismes moléculaires qui sous-tendent premiers cancer de la prostate initiation, roman et systèmes de modèles humains et des approches novatrices ont désespérément besoin. Le potentiel de pré-prostatique sinus urogénital mésenchyme (UGSM) pour inciter les populations de cellules souches pluripotentes pour former l'épithélium de la prostate humaine est un outil puissant dans la recherche expérimentale de la prostate.

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Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and finding new sources for implantable cells are the focus of recent research4,5. Investigating the effectiveness of cell therapies is not an easy task and new tools are needed to investigate the mechanisms involved in the treatment process6. We designed an experimental protocol of ischemia/reperfusion in order to allow the observation of cellular connections and even subcellular mechanisms during ischemia/reperfusion injury and after stem cell transplantation and to evaluate the efficacy of cell therapy. H9c2 cardiomyoblast cells were placed onto cell culture plates7,8. Ischemia was simulated with 150 minutes in a glucose free medium with oxygen level below 0.5%. Then, normal media and oxygen levels were reintroduced to simulate reperfusion. After oxygen glucose deprivation, the damaged cells were treated with transplantation of labeled human bone marrow derived mesenchymal stem cells by adding them to the culture. Mesenchymal stem cells are preferred in clinical trials because they are easily accessible with minimal invasive surgery, easily expandable and autologous. After 24 hours of co-cultivation, cells were stained with calcein and ethidium-homodimer to differentiate between live and dead cells. This setup allowed us to investigate the intercellular connections using confocal fluorescent microscopy and to quantify the survival rate of postischemic cells by flow cytometry. Confocal microscopy showed the interactions of the two cell populations such as cell fusion and formation of intercellular nanotubes. Flow cytometry analysis revealed 3 clusters of damaged cells which can be plotted on a graph and analyzed statistically. These populations can be investigated separately and conclusions can be drawn on these data on the effectiveness of the simulated therapeutical approach.

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

We demonstrate how to set up an in vitro ischemia/reperfusion model and how to evaluate the effect of stem cell therapy on postischemic cardiac cells.

Transplantation de cellules souches dans un In vitro Simulation d&#39;ischémie / reperfusion modèle

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Recherche

Médecine

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

Injection sous-rétinien de vecteurs de thérapie génique et les cellules souches dans l&#39;œil de la souris

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human pulp-derived stem cells (hDPSCs) possess high proliferation potential with multi-lineage differentiation capacity compare to the ordinary source of adult stem cells1-8; therefore, hDPSCs could be the good candidates for autologous transplantation in tissue engineering and regenerative medicine. Along with these benefits, possessing the mesenchymal stem cells (MSC) features, such as immunolodulatory effect, make hDPSCs more valuable, even in the case of allograft transplantation6,9,10. Therefore, the primary step for using this source of stem cells is to select the best protocol for isolating hDPSCs from pulp tissue. In order to achieve this goal, it is crucial to investigate the effect of various isolation conditions on different cellular behaviors, such as their common surface markers &amp; also their differentiation capacity.
Thus, here we separate human pulp tissue from impacted third molar teeth, and then used both existing protocols based on literature, for isolating hDPSCs,11-13 i.e. enzymatic dissociation of pulp tissue (DPSC-ED) or outgrowth from tissue explants (DPSC-OG). In this regards, we tried to facilitate the isolation methods by using dental diamond disk. Then, these cells characterized in terms of stromal-associated Markers (CD73, CD90, CD105 &amp; CD44), hematopoietic/endothelial Markers (CD34, CD45 &amp; CD11b), perivascular marker, like CD146 and also STRO-1. Afterwards, these two protocols were compared based on the differentiation potency into odontoblasts by both quantitative polymerase chain reaction (QPCR) &amp; Alizarin Red Staining. QPCR were used for the assessment of the expression of the mineralization-related genes (alkaline phosphatase; ALP, matrix extracellular phosphoglycoprotein; MEPE &amp; dentin sialophosphoprotein; DSPP).14

The method described isolation and characterization of human Dental Pulp Stem Cells (hDPSCs) by using either enzymatic dissociation of pulp (DPSC-ED) or direct outgrowth of stem cells from pulp tissue explants (DPSC-OG). Then followed by in vitro comparative differentiation of both types of hDPSCs into odontoblasts.

Différenciation isolement, caractérisation et comparative de l&#39;homme dentaires cellules souches de pulpe Dérivé de dents permanentes à l&#39;aide de deux méthodes différentes

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

Un modèle murin orthotopique de cancer de la prostate humain métastases

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

Isolement de cellules souches du cancer à partir d&#39;échantillons cancer de la prostate humaine

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem cells&#8221; (CSCs) responsible for tumor initiation, maintenance and relapse following conventional chemotherapies. Identification of ovarian CSCs is therefore an important goal. A commonly used method to assess CSC potential in vitro is the spheres assay in which cells are plated under non-adherent culture conditions in serum-free medium supplemented with growth factors and sphere formation is scored after a few days. Here, we review currently available protocols for human ovarian cancer spheres assays and perform a side-by-side analysis between commonly used multi cell-based assays and a more accurate system based on single cell plating. Our results indicate that both multi cell-based as well as single cell-based spheres assays can be used to investigate sphere formation in vitro. The more laborious and expensive single cell-based assays are more suitable for functional assessment of individual cells and lead to overall more accurate results while multi cell-based assays can be strongly influenced by the density of plated cells and require titration experiments upfront. Methylcellulose supplementation to multi cell-based assays can be effectively used to reduce mechanical artifacts.

In vitro spheres assays are commonly used to identify cancer stem cells. Here we compare single with multi cell-based spheres assays. The more laborious single cell-based assays or methylcellulose supplementation give more accurate results while multi cell-based assays performed in liquid medium can be highly influenced by cell density.

Evaluation des propriétés de cellules souches en cellules humaines de l&#39;ovaire Carcinome utilisant MULTI et simples à base de cellules Sphères dosages

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

Laser-capture Microdissection of Human Prostatic Epithelium for RNA Analysis

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types. Healthy prostate is comprised of fibromuscular stroma surrounding discrete epithelial-lined secretory lumens and a very small population of immune and neuroendocrine cells. In contrast, areas of prostate cancer have increased dysplastic luminal epithelium with greatly reduced or absent stromal population. Given the profound difference between stromal and epithelial cell types, it is imperative to separate the cell types for any type of downstream molecular analysis. Despite this knowledge, the bulk of gene expression studies compare benign prostate to cancer without micro-dissection, leading to stromal bias in the benign samples. Laser-capture micro-dissection (LCM) is an effective method to physically separate different cell types from a specimen section. The goal of this protocol is to show that RNA can be successfully isolated from LCM-collected human prostatic epithelium and used for downstream gene expression studies such as RT-qPCR and RNAseq.

The goal of this protocol is to use laser-capture micro-dissection as an effective method to isolate pure populations of cell types from heterogeneous prostate tissues for downstream RNA analysis.

Laser-microdissection de la prostate humaine épithélium pour l&#39;analyse de l&#39;ARN

The prostate gland contains a heterogeneous milieu of stromal, epithelial, neuroendocrine and immune cell types.  Healthy prostate is comprised of ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Pré-clinique Orthotopique modèle murin de cancer de la prostate humaine

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in which the liver has been repopulated with functional human hepatocytes, could serve as a useful tool for investigating human hepatic cell biology, drug metabolism, and other preclinical applications. One of the key factors required for successful transplantation of human hepatocytes into mice is the elimination of the endogenous hepatocytes to prevent competition with the human cells and provide a suitable space and microenvironment for promoting human donor cell expansion and differentiation. To date, two major liver injury mouse models utilizing fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) and uroplasminogen activator (uPA) mice have been established. However, Fah mice are used mainly with mature hepatocytes and the application of the uPA model is limited by decreased breeding. To overcome these limitations, Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice were used for in vivo differentiation of immature human hepatocytes and humanized liver generation. Human hepatic stem cells (HpSCs) successfully repopulated the livers of Alb-TRECK/SCID mice that had developed lethal fulminant hepatic failure following diphtheria toxin (DT) treatment. This model of a humanized liver in Alb-TRECK/SCID mice will have functional applications in studies involving drug metabolism and drug-drug interactions and will promote other in vivo and in vitro studies.

Here, we present a novel humanized mouse liver model generated in Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice following the transplantation of immature and expandable human hepatic stem cells.

Génération d&#39;un humanisée foie de souris Utilisation hépatique humaine Cellules souches

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

Évaluation de la fonction microvasculaire tissu adipeux humain en utilisant la vidéomicroscopie

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...