Name: pseudomonas aeruginosa induced lung injury model
Uploaded: 2014-10-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model at JoVE.com

This work was supported by National Institutes of Health grants HL105947-01 (YL), HL07829-16 (AM), HL090152 (AM).

تمت الموافقة على التجارب على الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوان واللجان المؤسسية للسلامة الأحيائية في جامعة إلينوي في شيكاغو. ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي الزائفة مع السلامة الأحيائية المستوى 2 (BSL2) الممارسات، والتي تشمل ولكن لا تقتصر على: قناع، حماية العين، ثوب أو بذلة، وقفازات مزدوجة. العمل في شهادة السلامة الأحيائية مجلس الوزراء. علاج الأدوات في اتصال مع البكتيريا مع التبييض أو ثاني أكسيد الكلور المطهرة القائم. استخدام مربع مختومة لعينات النقل. 1. P. الزنجارية الثقافة والنمو <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر P. الزنجارية PA103 باعتباره الأسهم البكتيري في كاب المسمار cryovial في -80 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القارورة في رفوف في مربع مع 70٪ من الإيثانول المناشف الورقية المبللة واتخاذ لغرفة المستوى 2 (BSL2) المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خط البكتيريا على لوحات أجار الدم الأغنام وتنمو عند 37 درجة مئوية لمدة 15 ساعة ~ في حاضنة. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غطاء BSL2، خدش البكتيريا من البكتيريا لوحة مع حلقة وresuspend في 5 مل PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين السهم عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر. ومع ذلك، وتحديد عيار كل 2 أسابيع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متسلسل تمييع البكتيريا في برنامج تلفزيوني (عادة من 4 إلى 1:10 1:10 7) لوحة والتخفيف من المعروف على لوحات أجار الدم الأغنام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات ل~ 15 ساعة. عد المستعمرات وحساب مستعمرة تشكيل وحدة (كفو) لتحديد تركيز البكتيريا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend وتركيزات مناسبة (~ 5 × 10 3 خلية / ميكرولتر) في 0.5 مل PBS في 1.5 مل العقيمة cryovials سقف المسمار. ختم cryovials ووضعها في رف cryovial على مطهر المناشف الورقية لادن في مربع المفاجئة غطاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل مربع إلى منشأة الحيوان BSL2. مرة واحدة هناك، افتح مربع في مجلس الوزراء BSL2. </li></ol> 2. P. الزنجارية تقطير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء عملية جراحية بقاء جو معقم و مطهر (قفازات معقمة، والأدوات المعقمة، وتقنيات العقيم). استخدام ثنى العقيمة لتوفير سطح العمل لمعقمة (تعقيمها) الأدوات الجراحية. تعقيم الأدوات باستخدام حبة تعقيم الساخن بين كل إجراء تقطير القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الفئران قبل التخدير. تخدير الفئران مع الكيتامين (100 ملغ / كلغ)، زيلازين (5 ملغ / كلغ)، في 0،1-0،2 مل PBS البريتونى (IP). تحديد فعالية مخدر من غير استجابة لقرصة أخمص قدميه. استخدام مرهم البيطرية على العينين لمنع جفاف تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كبح الفئران على لوحة العمليات الجراحية في BSL2 مجلس الوزراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد المنطقة لقطعها. يحلق هذا المجال وإعداد الجلد باستخدام بالتناوب الكحول ومسحات اليود البوفيدون 3 مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج منطقة شق مع مخدر موضعي (ليدوكائين)، وهذا التخدير كافية لجراحة بسيطة مثل شق الجلد للوصول إلى القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (حوالي 5 ملم) في خط الوسط من الرقبة، واستخدام و حادةorceps للتحرك برفق العضلات للوصول إلى القصبة الهوائية. فضح القصبة الهوائية عن طريق تشريح الجراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم البكتيريا الحل في 1 مل حقنة واحدة مع إبرة 27 G. لكل الماوس، إدارة 20-30 ميكرولتر من البكتيريا في التركيز المناسب (تصل إلى 10 5 كفو كل الماوس). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال الإبرة في القصبة الهوائية. حقن محلول ببطء في القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن صيحات الحيوان، والتي عادة ما يشير هذا الحل قد وصلت إلى الرئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجرح مع الغرز معقمة (6-0 حيدة) تحت ظروف معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 0.1 ملغ / كغ عن طريق الحقن تحت الجلد البوبرينورفين كما تسكين بعد العملية للسيطرة على الألم بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن الوقت اللازم من تحريض التخدير الأولي لإغلاق الجرح هو أقل من 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحقن، والتخلص من المحاقن والإبر في وعاء واقية الأدوات الحادة المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معالجة الأدوات الجراحية مع ثاني أكسيد الكلور الديسي مقرهاnfectant لمدة 15 دقيقة، شطف والعودة إلى المختبر للتعقيم وإعادة استخدامها عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيت الفئران منفردة في أقفاص نظيفة في بيئة دافئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اطمئنان على الحيوانات كل 30 دقيقة حتى يستعيد وعيه ويبدأ في التحرك. وبعد ذلك في فترات زمنية 12 ساعة لمدة 3 أيام بعد الجراحة الأولى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إبقاء الفئران في المنشأة BSL2 الحيوان في كافة مراحل التجربة. تأكد من أن الأنسجة الوحيدة الواردة في صندوق مغلق يترك منشأة BSL2 الحيوان. إذا كانت الفئران تبدي أي من السلوكيات المحتضرة (الذي يعرف بأنه ضيق التنفس والخمول، وعدم ambulate ردا على التحفيز لطيف) في أي نقطة في الدراسة، الموت ببطء الفئران عن طريق الاستنشاق CO 2 من مصدر المعبأة تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء موضوع التجريبي استنزاف تحت التخدير. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع أنسجة الرئة من الفئران الموت الرحيم. تنفيذ هذه الإجراءات في غطاء BSL2. إذا لزم الأمر، ونقل العينة باستخدام أنابيب مختومة وضعت في راكك مطهر على مناشف ورقية لادن في مربع غطاء المفاجئة لمزيد من العملية. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+respiratory+distress+syndrome.">The acute respiratory distress syndrome.</a> N Engl J Med. 342, 1334-1349 (2000).</li><li>Matthay, M. A., Ware, L. B., Zimmerman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+respiratory+distress+syndrome.">The acute respiratory distress syndrome.</a> J Clin Invest. 122, 2731-2740 (2012).</li><li>Shimabukuro, D. W., Sawa, T., Gropper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+and+repair+in+lung+and+airways.">Injury and repair in lung and airways.</a> Crit Care Med. 31 (8), 524-531 (2003).</li><li>Wansleeben, C., Barkauskas, C. E., Rock, J. R., Hogan, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+of+the+adult+lung:+Their+development+and+role+in+homeostasis,+regeneration,+and+disease.">Stem cells of the adult lung: Their development and role in homeostasis, regeneration, and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 131-148 (2013).</li><li>Singleton, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin+2+and+c-abl+are+novel+regulators+of+hyperoxia-mediated+nadph+oxidase+activation+and+reactive+oxygen+species+production+in+caveolin-enriched+microdomains+of+the+endothelium.">Dynamin 2 and c-abl are novel regulators of hyperoxia-mediated nadph oxidase activation and reactive oxygen species production in caveolin-enriched microdomains of the endothelium.</a> J Biol Chem. 284, 34964-34975 (2009).</li><li>Sadikot, R. T., Blackwell, T. S., Christman, J. W., Prince, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen-host+interactions+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia.">Pathogen-host interactions in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1209-1223 (2005).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxm1+mediates+the+progenitor+function+of+type+ii+epithelial+cells+in+repairing+alveolar+injury+induced+by+pseudomonas+aeruginosa.">Foxm1 mediates the progenitor function of type ii epithelial cells in repairing alveolar injury induced by pseudomonas aeruginosa.</a> J Exp Med. 208, 1473-1484 (2011).</li><li>Kurahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+septic+shock+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia.">Pathogenesis of septic shock in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> J Clin Invest. 104, 743-750 (1999).</li><li>Kumar, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+airway+stem+cells+yield+alveoli+in+vitro+and+during+lung+regeneration+following+h1n1+influenza+infection.">Distal airway stem cells yield alveoli in vitro and during lung regeneration following h1n1 influenza infection.</a> Cell. 147, 525-538 (2011).</li><li>Delano, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis+induces+early+alterations+in+innate+immunity+that+impact+mortality+to+secondary+infection.">Sepsis induces early alterations in innate immunity that impact mortality to secondary infection.</a> J Immunology. 186, 195-202 (2011).</li><li>Lange, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+sepsis+following+smoke+inhalation+injury.">A murine model of sepsis following smoke inhalation injury.</a> Biochem Biophys Res Commun. 391 (3), 1555-1560 (2010).</li><li>Kobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+chemokines+in+neutrophil+biology.">The role of chemokines in neutrophil biology.</a> Front Biosci. 13, 2400-2407 (2008).</li><li>Matute-Bello, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+lung+injury.">Animal models of acute lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, L379-L399 (2008).</li><li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+immunomodulation+of+the+nf-kappab+pathway+in+airway+epithelium+impacts+host+defense+against+pseudomonas+aeruginosa.">Targeted immunomodulation of the nf-kappab pathway in airway epithelium impacts host defense against pseudomonas aeruginosa.</a> J Immunol. 176, 4923-4930 (2006).</li><li>Pinto, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+experimental+model+of+neutrophilic+pulmonary+response+induction+in+mice.">Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice.</a> J Pneumologia. 29, 213-214 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

والزائفة الماوس الرئة نموذج الإصابة التي وصفنا هنا يحاكي العملية برمتها من التهاب أو إصابة الرئة، والإصلاح، والدقة التي تحدث بعد إصابة الرئة الحادة أو التهاب رئوي. لديها مزايا فريدة مقارنة مع العديد من النماذج إصابة أخرى في أنها ذات الصلة سريريا وآمنة نسبيا وسهلة في التعامل معها. في خطوة حاسمة في الإجراء هي أن حقن محلول البكتيريا يحتاج إلى أن تكون بطيئة جدا. إذا حقن سريع جدا، من المحتمل أن يموت قبل خنق الفئران. بعد حقن ناجحة، أظهرت الفئران عادة عدة يتنفس عميقا واللحظات، والتي سوف تساعد البكتيريا الجزيئات الحصول في الرئة. كانت سلالة كنا PA103 6. واحدة من النقاط الهامة لهذا النموذج هو أن من عيار P. الزنجارية يحتاج إلى رقابة مشددة. دفعة من P. الزنجارية من مصدر آخر يمكن أن تظهر درجات مختلفة من الالتهاب والتلف حتى عندماتستخدم في نفس كفو. وبالتالي، فمن المستحسن أن كل دفعة جديدة من البكتيريا يتم اختبار لآثارها المسببة (مثل التهاب، تكاثر الخلايا، الخ)، وبالتالي ضبط عدد من كفو لاستخدامها. إن التناقض في النتائج يحدث باستخدام الأسهم البكتيريا المبردة، يمكن للمرء أن استخدام المخزون جديدة حصلت عليها البكتيريا المتزايد من لوحة جديدة لكل تجربة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن للمرحلة نمو البكتيريا واختيار وسائل الإعلام أيضا أن يكون له تأثير على التأثير على استجابة المضيف. لذا، يجب توخي الحذر لضمان أن التطعيمات البكتيرية تحدث خلال نفس المرحلة من دورة النمو البكتيرية. قد يكون هناك اختلاف في الاستجابة لP. الزنجارية من قبل سلالات مختلفة من الفئران. كانت سلالة كنا خليط من C57BL / 6 و FVB / N. وP. المناسب وينبغي أن تحدد الزنجارية عيار لسلالات الفئران مختلفة. أحد العوامل للنظر لهذا النموذج هوأن الضرر من البكتيريا لا يقتصر على نوع خلية واحدة. على سبيل المثال، الظهارية، البطانية، قد تضررت جميع الخلايا الليفية. وبالتالي، لا يناسب هذا النموذج لدراسة آثار خلية من نوع إصابات الرئة محددة. البكتيريا تسبب موت الخلايا في الرئة من خلال تحفيز الاستجابات الالتهابية وكذلك عن طريق إفراز السموم في الأنسجة 6. عادة يتم مسح بكتيريا حية من الرئة خلال 48 ساعة بعد الإصابة 7،14. وهناك نسبة عالية من البكتيريا الميتة يمكن أيضا أن يسبب الضرر عن طريق حفز الاستجابات الالتهابية 15. آليات إصابة الرئة والإصلاح من المرجح أن تكون مختلفة استجابة لأنواع مختلفة من إصابة الرئة. لذا، من المهم للمقارنة عدة نماذج الاصابة. وP. نموذج الزنجارية الموصوفة هنا هو لطيفة، بالإضافة إلى نماذج أخرى.

ويتعرض الرئتين لمسببات الأمراض البيئية وعرضة للالتهاب وإصابة 1-3. خلال الحالات المرضية مثل الالتهاب الرئوي أو متلازمة الشدة التنفسية للبالغين (ARDS)، مسببات الأمراض، فضلا عن العوامل الالتهابية الصادرة عن الكريات البيض تحفز الإصابة وموت الخلايا السنخية 1-3. من المهم تطوير نماذج حيوانية من إصابة الرئة الحادة لتسهيل دراسة علم الأمراض من الإصابة وكذلك آلية للإصلاح. حاليا، معظم الناس يستخدمون فرط التأكسج وبليوميسين يسببها الماوس نماذج إصابة الرئة 4. ومع ذلك، تسببت آليات فرط التأكسج الإصابة ليست هي نفسها حيث أن معظم إصابات الرئة شيوعا التي تحدث أثناء الالتهاب الرئوي أو ARDS 5. بليوميسين الإصابة الحادة يسببها نادرة في سياق السريرية 4. نحن هنا تقرير ماوس الرئة نموذج اصابة باستخدام الحقن داخل القصبة الهوائية من P. الزنجارية 6،7. هذا النموذج هو ذات الصلة سريريا، ويقلد عrocesses أن يحدث بعد الالتهاب الرئوي 8. على أنه انتهازي، الممرض في المستشفيات الأفراد المناعة، P. الزنجارية عادة يصيب الجهاز الرئوي، والمسالك البولية، والحروق، والجروح، ويسبب أيضا التهابات الدم الأخرى 6. البكتيريا تطلق الفوعة عامل ذيفان خارجي A، تتكاثر وتؤدي الاستجابة المناعية 6. الإدارة داخل trachael من P. الزنجارية يعكس الوضع في تعرض الإنسان للبكتيريا التي تسبب الالتهاب الرئوي، ومن المرجح أن يكون مختلفا عن أفادت مؤخرا فيروس الأنفلونزا H1N1 الرئة الناجم عن نموذج إصابة 9 في علم الأمراض. منذ P. الزنجارية هي العوامل المسببة للأمراض الانتهازية، وأنها آمنة نسبيا للتعامل مع مقارنة لبعض مسببات الأمراض أكثر ضراوة. نحن هنا يستخدم الحقن داخل القصبة الهوائية لإدارة البكتيريا لاحظنا أن هذه الطريقة إدخال المزيد من الجراثيم في المنطقة الأسناخ الرئوية البعيدة للمقارنةبعض الإجراءات الأخرى مثل استخدام القسطرة عن طريق الفم. بالمقارنة مع غيرها من نماذج إصابة الرئة الحادة، وP. نموذج الزنجارية الموصوفة هنا هي مناسبة لدراسة إصابة الرئة الناجمة عن بكتيريا والالتهاب المفرط. على عكس النماذج الحيوانية الأخرى التي تستخدم P. الزنجارية للحث على الإنتان 10،11، وهنا نستخدم الحقن داخل القصبة الهوائية من هذه البكتيريا للحث محلية إصابة الرئة الحادة.

<table><tbody><tr><td>Anesthetic: Ketamin, xylazine, lidocaine, buprenorphine</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical grade</td></tr><tr><td>27 G needle</td><td>Fisher</td><td>1482648</td><td></td></tr><tr><td>syringe</td><td>Fisher</td><td>14823434</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>scissors</td><td>Fine Science tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fine Science tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>suture&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>19-037-526</td><td></td></tr><tr><td>Eye gauge, glove, gown</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biosafety Cabinet</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>chlorine dioxide based disinfectant</td><td></td><td></td><td>Clidox</td></tr><tr><td>sheep blood agar plates&amp;nbsp;</td><td>Medex supply</td><td>HL-1160</td><td></td></tr></tbody></table>

pseudomonas aeruginosa induced lung injury model

من أجل دراسة إصابة الرئة الحادة والالتهاب الرئوي الإنسان، فمن المهم تطوير نماذج حيوانية لتقليد العديد من المظاهر المرضية لهذا المرض. نحن هنا قمنا بتطوير نموذج إصابة الرئة الماوس عن طريق الحقن داخل القصبة الهوائية من البكتيريا الزائفة الزنجارية (P. الزنجارية أو PA). باستخدام هذا النموذج، تمكنا من إظهار التهاب الرئة في مرحلة مبكرة من الإصابة. وبالإضافة إلى ذلك، لوحظ السنخية الظهارية حاجز التسرب من خلال تحليل غسيل القصبات (BAL)؛ وموت الخلايا السنخية لوحظ من قبل تونيل الفحص باستخدام الأنسجة المحضرة من المصابين الرئتين. في مرحلة لاحقة بعد الإصابة، لاحظنا انتشار الخلايا المطلوبة لعملية الإصلاح. تم حل إصابة 7 أيام من بدء P. الزنجارية الحقن. هذا نموذج يحاكي مسار تسلسلي للالتهاب الرئة والإصابة وإصلاح أثناء الالتهاب الرئوي. هذا نموذج حيواني ذات الصلة سريريا هو مناسبة لدراسة علم الأمراض، وآلية للإصلاح، وollowing إصابة الرئة الحادة، ويمكن أيضا أن تستخدم لاختبار وكلاء العلاجية المحتملة لهذا المرض.

ابتداء من 24-72 ساعة بعد P. حقن الزنجارية، وقد لوحظ زيادة الخلوية في أقسام الرئة (الشكل 1A-D). بدأت الرئة للتعافي من اصابة في آخر 96 ساعة (الشكل 1E). في 7 أيام إضافة P. الزنجارية، تم استعادة التشكل الحويصلات الهوائية العادية إلى حد كبير (الشكل 1F). نفق تلطيخ أقسام الرئة باستخدام أعدت في 24 ساعة بعد P. أظهر الزنجارية موت الخلية في الخلايا الأسناخ (الشكل 1G-I). من أجل دراسة عملية الإصلاح في هذا النموذج إصابة، تم حقنها في الفئران BrdU في 3 أيام بعد P. الزنجارية. تم عزل الرئتين عند 5 ساعة حقن آخر BrdU ومعالجتها لBrdU تلوين الأجسام المضادة. كما هو مبين في الشكل 1J وK، زيادة كبيرة في عدد الخلايا أدرجت BrdU في 72 ساعة بعد P. إدارة الزنجارية مشيرا المفرط ل. لدراسة التغير في حاجز للmeability والتهاب إصابة آخر، غسيل القصبات تم جمع (بال) السوائل في نقاط زمنية مختلفة إضافة P. الزنجارية الحقن. وقد ازداد تركيز البروتين في BAL بشكل ملحوظ في 48 ساعة بعد P. الزنجارية حقن (الشكل 2A)، مشيرا إلى الظهارية حاجز التسرب. كما زادت أعداد الخلايا بشكل ملحوظ في بال في 48 ساعة بعد P. الزنجارية حقن (الشكل 2B)، مما يشير إلى استجابة التهابية. عند 4 - 5 ايام بعد P. حقن الزنجارية، بدأ كل من مستوى البروتين بال وعدد الخلايا في الانخفاض مما يدل على الانتعاش (الشكل 2A، B). وعلاوة على ذلك، تم جمعها المحللة الرئة عند نقاط مختلفة ظيفة وP. إدارة الزنجارية ومستوى بلعم بروتين التهابات 2 (MIP2)، خلوى تشارك في جذب العدلات 12، وقد تم قياس بواسطة ELISA. متسقة مع نتائج التحليل بال، ومستوى MIP2 increa كبير<html> الحوار الاقتصادي الاستراتيجي في 48 ساعة بعد P. عاد الزنجارية حقن والمستوى القاعدي في 96 ساعة بعد P. الزنجارية حقن (الشكل 2C). وعلاوة على ذلك، تم إصلاح الخلايا من BAL على الشرائح الزجاجية وتعرض لأمراض الدم تلطيخ. دون P. الزنجارية، لم يكن هناك سوى عدد قليل من وحيدات في بال السائل (الشكل 2D). في المقابل، كانت كمية كبيرة من العدلات الحالي في BAL عزل في 48 ساعة بعد P. الزنجارية حقن (الشكل 2E). قبل 96 ساعة آخر P. حقن الزنجارية، وتكوين خلية من BAL عاد إلى مستوى التحكم (الشكل 2F). لتلخيص، أشارت النتائج في الشكل 2 استجابة التهابية حادة عدلة مع زيادة نفاذية جدار الأسناخ وزيادة في تركيزات خلوى، وهي كلها بصمات إصابة الرئة الحادة 13. في كل التجارب، انه كان يستخدم حقن المحلول الملحي عن السيطرة. ve_content &quot;&gt; جزء من البيانات، بما في ذلك H و E تلطيخ، ووضع العلامات BrdU، TUNEL فحص وتحليل BAL وقياس مستوى MIP2، ونشرت في السابق 7. في هذه المقالة، درسنا دور FoxM1، وهو عامل النسخ، في إصلاح الإصابة السنخية باستخدام P. الزنجارية نموذج إصابة الرئة هو موضح هنا 7. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52044/52044fig1highres.jpg" width="600" /> الشكل 1. علم الأنسجة، موت الخلايا وانتشار في P. الزنجارية فأر بوساطة نموذج إصابة الرئة. أجريت العزلة (AF) الرئة، باجتزاء وH / E تلطيخ باستخدام غير P. الزنجارية حقن (غير الفلسطينية) الرئتين السيطرة (A)، وكذلك الرئتين في 24 ساعة (B)، 48 ساعة (C)، 72 ساعة (D)، 96 ساعة (E)، 7 أيام (F) آخر P. الزنجارية فيjection (ما بعد السلطة الفلسطينية). (GI) أعدت أقسام الرئة من الرئتين التحكم (G) و 24 ساعة ما بعد P. حقن الزنجارية الرئتين (H، I) والمضي قدما لTUNEL فحص للكشف عن موت الخلايا. كانت ملطخة أقسام الرئة للعلامة الخلايا الظهارية الرئة SP-C (الأزرق)، T1α (أحمر) لإظهار التشكل وملطخة أيضا عن النفق (الخضراء). سهام في (H) تشير الخلايا إيجابية النفق. (J، K) تم حقن BrdU في عدم P. الزنجارية حقن الفئران (J) و 72 ساعة بعد P. حقن الفئران الزنجارية (K) من خلال الملكية الفكرية، وأعدت الرئتين عند 5 ساعة حقن آخر BrdU ومعالجتها لتلوين الأجسام المضادة ضد BrdU (تلطيخ الخضراء). شريط النطاق = 60 ميكرومتر لAF، 50 ميكرون لG و H، 20 ميكرون لأني، و 100 ميكرومتر لJ و K. تم تعديل هذا الرقم من ليو <eم&gt; وآخرون. 7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52044/52044fig1highres.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 2" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52044/52044fig2highres.jpg" width="600" /> الشكل 2. السنخية حاجز النفاذية والتهاب التالية في P. الزنجارية التي يسببها إصابة الرئة. (A، B) وقد تم جمع BAL من السيطرة وP. تعامل الزنجارية الرئتين. زيادة (A) تركيز البروتين في بال في 48 ساعة بعد P. الزنجارية الحقن وانخفضت في 96 ساعة، 5 آخر أيام P. ارتفعت الزنجارية الحقن. (ب) مجموع أعداد الخلايا في بال في 48 ساعة بعد P. الزنجارية حقن (ب) وعاد مستوى التحكم في 96 ساعة بعد P. الزنجارية الحقن. (C) MIP-2 تم قياس مستويات لنالست] جي الرئة معزولة عن السيطرة على الفئران وكذلك الفئران في 48 ساعة و 96 ساعة بعد P. الزنجارية الحقن. تم عرض البيانات في متوسط ​​± SE، ن تم طرد ≥ 3. (DF) من خلايا BAL وثابتة على الشرائح الزجاجية وتعرض لHEMA3 تلطيخ. وكان عدد قليل من حيدات موجودة في بال من السيطرة على الفئران (D). وكانت كمية كبيرة من العدلات الحالي في BAL معزولة في 48 ساعة بعد P. الزنجارية حقن (E). قبل 96 ساعة آخر P. حقن الزنجارية، كان هناك عدد قليل من وحيدات في بال (F). مقياس شريط = 10 ميكرون، وهذه النتائج هي تمثيلية لا يقل عن 5 تجارب مستقلة. تم تعديل هذا الرقم من ليو وآخرون. 7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52044/52044fig2highres.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model at JoVE.com

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

pseudomonas-aeruginosa-induced-lung-injury-model

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

18.4K Views.  University of Illinois at Chicago. We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant. 

Video: Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

على المدى الطويل المزمن<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; عدوى مجرى الهواء في الفئران

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models of ALI are key in enhancing our understanding of disease pathogenesis. Lipopolysaccharide (LPS) derived from gram positive bacteria induces neutrophilic inflammation in the airways and lung parenchyma of mice. Efficient pulmonary delivery of compounds such as LPS is, however, difficult to achieve. In the approach described here, pulmonary delivery in mice is achieved by challenge to aerosolized Pseudomonas aeruginosa LPS. Dissolved LPS was aerosolized by a nebulizer connected to compressed air. Mice were exposed to a continuous flow of LPS aerosol in a Plexiglas box for 10 min, followed by 2 min conditioning after the aerosol was discontinued. Tracheal intubation and subsequent bronchoalveolar lavage, followed by formalin perfusion was next performed, which allows for characterization of the sterile pulmonary inflammation. Aerosolized LPS generates a pulmonary inflammation characterized by alveolar neutrophilia, detected in bronchoalveolar lavage and by histological assessment. This technique can be set up at a small cost with few appliances, and requires minimal training and expertise. The exposure system can thus be routinely performed at any laboratory, with the potential to enhance our understanding of lung pathology.

We describe a method for inducing neutrophilic pulmonary inflammation by challenge to aerosolized lipopolysaccharide by nebulization, to model acute lung injury. In addition, basic surgical techniques for lung isolation, tracheal intubation and bronchoalveolar lavage are also described.

وهناك طريقة لتوليد الرئوي العدلات عن طريق رذاذ lipopolysaccharide في

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

دراسة المجتمعات الميكروبية<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج من التفاعل بوساطة بين المضيف<em&gt; المبيضات البيض</em&gt; و<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في الخطوط الجوية

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, preferably in models which mimic the intended clinical indication. A method for inducing robust lung infections in immunocompetent rats and mice is described which allows for the assessment of treatments in a model of serious pneumonia caused by S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae or A. baumannii. Animals are anesthetized, and an agar-based inoculum is deposited deep into the lung via nonsurgical intratracheal intubation. The resulting infection is consistent, reproducible, and stable for at least 48 h and up to 96 h for most isolates. Studies with marketed antibacterials have demonstrated good correlation between in vivo efficacy and in vitro susceptibility, and concordance between pharmacokinetic/pharmacodynamic targets determined in this model and clinically accepted targets has been observed. Although there is an initial time investment when learning the technique, it can be performed quickly and efficiently once proficiency is achieved. Benefits of the model include elimination of the neutropenic requirement, increased robustness and reproducibility, ability to study more pathogens and isolates, improved flexibility in study design and establishment of a challenging infection in an immunocompetent host.

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

نموذج الالتهاب الرئوي القوي في مناعيا القوارض لتقييم مضاد للبكتيريا فعالية ضد<i&gt; S. الرئوية</i&gt;،<i&gt; H. النزلية</i&gt;،<i&gt; K. الرئوية</i&gt;،<em&gt; P. الزنجارية</em&gt; أو<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the pro-inflammatory capabilities of various factors is challenging and requires terminal procedures, such as bronchoalveolar lavage and the removal of lungs for in situ analysis, precluding longitudinal visualization in the same mouse. Here, lung inflammation is induced through the intratracheal instillation of Pseudomonas aeruginosa culture supernatant (SN) in transiently transgenized mice expressing the luciferase reporter gene under the control of a heterologous IL-8 bovine promoter. Luciferase expression in the lung is monitored by in vivo bioluminescent image (BLI) analysis over a 2.5- to 48-h timeframe following the instillation. The procedure can be repeated multiple times within 2 - 3 months, thus permitting the evaluation of the inflammatory response in the same mice without the need to terminate the animals. This approach permits the monitoring of pro- and anti-inflammatory factors acting in the lung in real time and appears suitable for functional and pharmacological studies.

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

The method described here allows for the visualization of IL-8 promoter-dependent inflammation activation in the lungs of mice through non-invasive bioluminescence imaging (BLI). The same animal can be subjected to BLI multiple times for up to two months from the time of delivery of the luciferase reporter construct.

و إيل-8 عابر نموذج الماوس المعدلة وراثيا ل<em&gt; في فيفو</em&gt; رصد طويل الأمد للردود الالتهابية

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

فتح القصبة الهوائية المعدة حمض الطموح فأري موديل الحاد الرئة إصابة النتائج في القصوى الحاد غير قاتل الرئة الإصابات

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Medicine

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic findings similar to human acute respiratory distress syndrome (ARDS). The resulting alveolar edema, alveolar-capillary barrier damage, and leukocyte infiltration predominantly affect the left lung, preserving the right lung as an uninjured control and allowing animals to survive. This model of self-limited acute lung injury enables investigation of tissue resolution mechanisms, such as macrophage efferocytosis of apoptotic neutrophils and restitution of alveolar-capillary barrier integrity. This model has helped identify important roles for resolution agonists, including specialized pro-resolving mediators (SPMs), providing a foundation for the development of new therapeutic approaches for patients with ARDS.

Selective intra-bronchial acid instillation to the left lung in mice results in unilateral and self-limited acute lung injury that models human acute respiratory distress syndrome (ARDS) induced by gastric acid aspiration.

نموذج لإصابة الرئة الحادة المحدودة ذاتياً عن طريق الغرس من جانب واحد داخل الشعب الهوائية

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of chronic wound infections in diabetic and hospitalized patients. There is an urgent need for chronic infection models to aid in the investigation of wound pathogenesis and the development of new therapies against this pathogen. Here, we describe a protocol that uses delayed inoculation 24 hours after full-thickness excisional wounding. The infection of the provisional wound matrix present at this time forestalls either rapid clearance or dissemination of infection and instead establishes chronic infection lasting 7&#8211;10 days without the need for implantation of foreign materials or immune suppression. This protocol mimics a typical temporal course of post-operative infection in humans. The use of a luminescent P. aeruginosa strain (PAO1:lux) allows for quantitative daily assessment of bacterial burden for P. aeruginosa wound infections. This novel model may be a useful tool in the investigation of bacterial pathogenesis and the development of new therapies for chronic P. aeruginosa wound infections.

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

We describe a delayed inoculation protocol for generating chronic wound infections in immunocompetent mice.

نموذج التلقيح المتأخر لعدوى الجروح المزمنة الزائفة الجيروجينوسا

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of bacteria in lung models can re-adapt epithelial arrangement, while immune cells coordinate an inflammatory response against the bacteria in the microenvironment. While in vivo models have been the choice for testing new anti-infectives in the context of cystic fibrosis, they still do not accurately mimic the in vivo conditions of such diseases in humans and the treatment outcomes. Complex in vitro models of the infected airways based on human cells (bronchial epithelial and macrophages) and relevant pathogens could bridge this gap and facilitate the translation of new anti-infectives into the clinic. For such purposes, a co-culture model of the human cystic fibrosis bronchial epithelial cell line CFBE41o- and THP-1 monocyte-derived macrophages has been established, mimicking an infection of the human bronchial mucosa by P. aeruginosa at air-liquid interface (ALI) conditions. This model is set up in seven days, and the following parameters are simultaneously assessed: epithelial barrier integrity, macrophage transmigration, bacterial survival, and inflammation. The present protocol describes a robust and reproducible system for evaluating drug efficacy and host responses that could be relevant for discovering new anti-infectives and optimizing their aerosol delivery to the lungs.

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

We describe a protocol for a three-dimensional co-culture model of infected airways, using CFBE41o- cells, THP-1 macrophages, and Pseudomonas aeruginosa, established at the air-liquid interface. This model provides a new platform to simultaneously test antibiotic efficacy, epithelial barrier function, and inflammatory markers.

ب. ايروجينوسا مصابة 3D شارك الثقافة من الخلايا الظهارية القصبي و الضامة في واجهة الهواء السائل لتقييم ما قبل الإكلينيكي من المضادة للعدوى

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

على المدى الطويل المزمن

وهناك طريقة لتوليد الرئوي العدلات عن طريق رذاذ lipopolysaccharide في

دراسة المجتمعات الميكروبية

نموذج الالتهاب الرئوي القوي في مناعيا القوارض لتقييم مضاد للبكتيريا فعالية ضد

و إيل-8 عابر نموذج الماوس المعدلة وراثيا ل

فتح القصبة الهوائية المعدة حمض الطموح فأري موديل الحاد الرئة إصابة النتائج في القصوى الحاد غير قاتل الرئة الإصابات

نموذج لإصابة الرئة الحادة المحدودة ذاتياً عن طريق الغرس من جانب واحد داخل الشعب الهوائية

نموذج التلقيح المتأخر لعدوى الجروح المزمنة الزائفة الجيروجينوسا

ب. ايروجينوسا مصابة 3D شارك الثقافة من الخلايا الظهارية القصبي و الضامة في واجهة الهواء السائل لتقييم ما قبل الإكلينيكي من المضادة للعدوى

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى