This work was supported by National Institutes of Health grants HL105947-01 (YL), HL07829-16 (AM), HL090152 (AM).

在动物实验中批准了伊利诺伊大学芝加哥分校的动物护理委员会和机构生物安全委员会。 注意：口罩，保护眼睛，礼服或连身衣，和双层手套：所有涉及假单胞菌程序应与生物安全2级（BSL2）的做法，其中包括但不限于执行。在认证的生物安全柜的工作。与细菌漂白粉或二氧化氯基消毒剂接触治疗手段。用密封箱运输样品。 1. P.铜绿假单胞菌培养与成长<ol><li>商店P.绿脓杆菌 PA103作为细菌的库存在螺旋盖冷冻管在-80℃下。 </li><li>放置在一个架子的小瓶中，用70％乙醇润湿的纸巾的盒子，并采取生物安全等级2（BSL2）实验室。 </li><li>条纹的细菌到绵羊血琼脂平板上并生长在37℃〜15小时，在培养箱中。 </li&gt; <li>在一个BSL2罩，从刮片细菌环和悬浮的细菌，5毫升的PBS。 </li><li>存储库存在4℃下进行长达3个月。然而，确定的效价，每2个星期。 </li><li>串行（1:10 4，通常1:10 7）稀释细菌在PBS和板出来羊血琼脂平板上已知的稀释。 </li><li>孵育板为〜15小时。菌落计数并计算菌落形成单位（CFU），以确定细菌浓度。 </li><li>重悬在合适的浓度（〜5×10 3 CFU /微升）在0.5ml PBS中于1.5ml无菌螺旋盖离心管。密封冷冻管，并放置在消毒上载货纸巾在瞬间盖盒一离心管架。 </li><li>运输箱，以BSL2动物设施。一旦出现，打开了BSL2柜箱。 </li></ol> 2. P.铜绿假单胞菌灌输<ol><li>进行生存无菌手术（无菌手套，无菌器械和无菌技术）。使用无菌的悬垂性，为无菌（蒸压）手术器械提供了工作面。使用消毒每气管滴入程序之间的热珠灭菌仪器。 </li><li>前麻醉小鼠的体重。麻醉小鼠用氯胺酮（100毫克/千克），甲苯噻嗪（5毫克/千克），在0.1 - 0.2毫升的PBS腹膜内（IP）的 。非响应性脚趾捏确定麻醉剂的效力。使用对眼睛的兽医药膏，以防止在麻醉下干燥。 </li><li>抑制小鼠在BSL2柜外科板。 </li><li>识别切割下来的区域。剃此区域，并准备利用交替醇和聚维酮碘拭子3倍的皮肤。 </li><li>治疗与局部麻醉剂（利多卡因），为这个麻醉足以进行小手术如皮肤切口进入气管切口的区域。 </li><li>作一个小切口（约5mm），在颈部的中线，并用钝˚Forceps轻轻移动肌肉访问气管。暴露气管通过手术剥离。 </li><li>吸取菌液到1毫升一次性注射器用27G的针头。对于每个小鼠，给药20-30微升的细菌在适当的浓度（高达10 5 CFU每只小鼠）。 </li><li>将针头插入气管。慢慢注入溶液到气管。 </li><li>确保动物喘气，这通常表示该解决方案已经达到了进入肺部。 </li><li>关闭无菌条件下无菌缝合线（6-0单丝）的伤口。 </li><li>用0.1毫克/千克丁丙诺啡皮下注射作为术后镇痛控制手术后疼痛。 </li><li>确保从初始麻醉诱导至切口闭合所需的时间小于15分钟。 </li><li>注射后，在适当的生物危害的尖锐物容器处置注射器和针头。 </li><li>治疗与二氧化氯基消毒药剂的外科手术器械nfectant 15分钟，冲洗，并返回到实验室进行灭菌，并根据需要重新使用。 </li><li>房子小鼠单独在清洁笼子里的温暖的环境。 </li><li>检查动物每隔30分钟，直到它恢复意识，并开始移动;后来，在12小时的时间间隔为第3天手术后。 </li><li>保持在整个实验动物BSL2设施的小鼠。确保只有包含在密封的盒子组织离开动物BSL2设施。如果小鼠表达任何垂死的行为（定义为呼吸困难，嗜睡，故障响应温柔的刺 ​​激走动），在该研究中的任何一点，从颈椎脱位瓶装源安乐死的小鼠通过CO 2吸入。 </li><li>安乐死放血在麻醉状态下的实验对象。 <ol><li>从安乐死的小鼠收集肺组织。进行在一个BSL2引擎盖这些过程。如果需要，可以使用密封管放入外消旋转移样品钾对载货消毒纸巾在进一步处理易如反掌盖盒。 </li></ol></li></ol>

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T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+immunomodulation+of+the+nf-kappab+pathway+in+airway+epithelium+impacts+host+defense+against+pseudomonas+aeruginosa.">Targeted immunomodulation of the nf-kappab pathway in airway epithelium impacts host defense against pseudomonas aeruginosa.</a> J Immunol. 176, 4923-4930 (2006).</li><li>Pinto, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+experimental+model+of+neutrophilic+pulmonary+response+induction+in+mice.">Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice.</a> J Pneumologia. 29, 213-214 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

我们在这里描述的假小鼠肺损伤模型模拟炎症，肺损伤，修复和解决发生的急性肺损伤或肺炎的全过程。它具有与其他几个损伤模型中，这是临床相关的和相对安全的和易于处理的比较独特的优势。 在该过程的关键步骤是，在注射细菌溶液必须是很慢的。如果注射过快，老鼠有可能被噎到死。一个成功的注射后，老鼠通常会显示几个深呼吸和喘息，这将有助于微粒进入肺部?...

肺部暴露于环境中的病原体，并很容易受到炎症和损伤1-3。在病理条件下，如肺炎或成人呼吸窘迫综合征（ARDS），病原体以及由白细胞释放炎性细胞因子诱导损伤的肺泡细胞1-3和死亡。它发展为急性肺损伤的动物模型，以促进损伤的病理修复的研究以及机制是很重要的。 目前，大多数人使用高氧和博来霉素诱导的小鼠肺损伤模型4。然而，氧的机制引起的损伤是不一样的肺炎或急性呼吸窘迫综合征5过程中出现的最常见的肺损伤。博莱霉素诱导的急性损伤是罕见的在临床方面4。在这里，我们报告使用气管内注射P的小鼠肺损伤模型铜绿假单胞菌 6,7。这个模型是临床上相关的，并且模仿在p这种情况发生以下肺炎8 rocesses。 由于免疫功能低下的人的机会，院内病原体，P.假单胞菌通常感染肺部，尿路，烧伤，创伤，并且还引起其他血液感染6。细菌释放出毒力因子外毒素A，乘，引发免疫反应6。 P的内部trachael管理假单胞菌反映到引起肺炎的细菌的情况，人体暴露和病理学可能是从最近报道流感病毒H1N1引起的肺损伤模型9不同。由于P.铜绿假单胞菌是一种条件致病菌，它是相对安全的处理相比，一些更致命的病原体。在这里，我们使用气管内注射给药的细菌，因为我们观察到，该方法引入更多的细菌进入肺的较远端肺泡区一些其他方法，例如通过口用的导管。 与其他急性肺损伤模型相比，P。这里描述绿脓杆菌模型适用于研究肺损伤的细菌和过度炎症反应。与使用P。等的动物模型铜绿假单胞菌诱发败血症10,11，这里我们使用气管内注入这些细菌诱发局部急性肺损伤。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="650">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:215px;">Name</td>
			<td style="width:145px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog number&#160;</td>
			<td style="width:145px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:215px;">Anesthetic: Ketamin, xylazine, lidocaine, buprenorphine</td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:145px;">pharmaceutical grade</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:215px;">27g needle</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">1482648</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:215px;">syringe</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">14823434</td>
			<td style="width:145px;">1 ml</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:215px;">scissors</td>
			<td style="width:145px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:215px;">forceps</td>
			<td style="width:145px;">Fine Science tools</td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:215px;">suture&#160;</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:145px;">NC0147607</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Eye gauge, glove, gown</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Biosafety Cabinet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">chlorine dioxide based sterilant&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Clidox</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">sheep blood agar plates&#160;</td>
			<td>Medex supply</td>
			<td>HL-1160</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pseudomonas aeruginosa induced lung injury model

为了研究人的急性肺损伤和肺炎，它开发的动物模型来模拟这种疾病的各种病理特征是重要的。在这里，我们已经开发出通过气管内注射的细菌绿脓杆菌 （ 铜绿假单胞菌或PA）的小鼠肺损伤模型。利用该模型，我们能够显示肺部炎症损伤的早期阶段。此外，肺泡上皮屏障泄漏观察到通过分析支气管肺泡灌洗液（BAL）;并且观察到通过使用从受伤的肺组织制备TUNEL测定肺泡细胞死亡。在受伤后的稍后阶段，我们观察到所需的修复过程的细胞增殖。伤病得到了解决，从体育的开始7天后铜绿假单胞菌注射液。这个模型模拟的肺部炎症，损伤和修复的连续过程中的肺炎。这与临床相关的动物模型是适用于研究病理，修复机制中，following急性肺损伤，并且还可以用来测试潜在的治疗剂，这种疾病。

72小时后P. -从24日开始假单胞菌注射，增加的细胞结构中观察到的肺切片（ 图1A-D）。肺开始从96小时后的损伤（ 图1E）中恢复。 7天后P.铜绿假单胞菌 ，正常肺泡形态基本恢复（ 图1F）。隧道染色用肺切片在24小时后的第制备假单胞菌表明细胞死亡中的肺泡细胞（ 图1G-1）。为了研究这种损伤模型中的修复过程中?...

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Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

绿脓杆菌引起的肺损伤模型

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

pseudomonas-aeruginosa-induced-lung-injury-model

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

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