يعترف FM بتمويل من وكالة المخابرات الوطنية من خلال CHAIRE دي التميز آيدكس جامعة السوربون باريس سيتي، وINSU من خلال منحة PNP، المعهد الجامعي فرنسا فضلا عن برنامج Labex UniverEarth في جامعة السوربون باريس سيتي (ANR-10-LABX-0023 وكالة الاستخبارات الوطنية -11-آيدكس-0005-02). نشكر أيضا بتمويل من مجلس البحوث الأوروبي في إطار الجماعة الأوروبية H2020 البرنامج الإطاري / ERC اتفاقية المنحة # 637503 (البكر).

وقد تمت الموافقة على الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة باريس ديدرو: ملاحظة. 1. إعداد المواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغلي الفرعي تقطير 1 L من الأحماض (HNO 3، دورية هارفارد) من أجل تنقيتها من الشوائب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الأكواب ومحول طرف في الساخن (~ 100 ° C) تتركز HNO 3 حمام حمض لمدة يومين على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل نصائح ماصة في البرد 3 N HNO 3 حمام لعدة أيام وشطف بشكل فردي ثلاث مرات مع دي المتأينة المياه. </li></ol> إعداد 2. عينة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من الكيتامين وزيلازين. تقييم التخدير من خلال طريقة قرصة أخمص قدميه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم عن طريق ثقب في القلب في حضور الهيبارين في 1.5 مل أنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل البلازما من خلايا الدم عن طريق الطرد المركزي (10 دقيقة، 1500 x ج) ونقل البلازما إلى البولي بروبلين جقارورة ryogenic باستخدام نصائح البولي بروبلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدم المتبقية من الأجهزة عن طريق قطع الوريد الكبدي وحقن DPBS من خلال القلب. تقييم فاة الماوس عن طريق خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد الأجهزة العقيمة مع أدوات الفولاذ المقاوم للصدأ، تحريرهم من الدهون المحيطة بها إن وجدت، والمفاجئة تجميدها في البولي بروبلين قارورة المبردة. </li></ol> 3. الكيميائية تنقية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأول مرة، ويحل العينات في مزيج من ~ 1 مل من مركز (30٪) H 2 O 2 و ~ 1 مل من المركز (~ 15 M) HNO 3. هل كل هذه الخطوات داخل غطاء الدخان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الجهاز كله من الفائدة إلى 15 مل تفلون الكأس. ثم، إضافة H 2 O 2 / HNO 3 إلى 5 كوب. الحفاظ على الكأس مفتوحة لبضع دقائق وذلك لتجنب البقع الناجمة عن رد فعل أكسدة المواد العضوية والإفراج عن CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخيرا، وضع الكأس على طبق ساخن في أبوالتحرير 100 درجة مئوية لمدة بضع ساعات أو حتى حل واضح تماما. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الكأس وتجفيف الحل على طبق ساخن في حوالي 100 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة العينة الجافة، إضافة 1 مل من 1.5 N دورية هارفارد للعينات. إغلاق الكأس والسماح لها حل على طبق ساخن عند 100 درجة مئوية لمدة بضع ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي الوقت نفسه إعداد الأعمدة ميكرولتر 500. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكرولتر من الراتنج شبكة AG1X8 200-400 إلى العمود ووضعها على الرف العمود مع كوب القمامة تحتها. غسل الراتنج بالتناوب: 5 مل من 18.2 MΩ ⋅ سم ماء، 5 مل من 0،5 N HNO 3، 5 مل من الماء و 5 مل من 0،5 N HNO 3 ثم 5 مل من الماء. حالة الراتنج مع 5 مل من 1،5 N دورية هارفارد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أكواب من صفيحة ساخنة ووضعها في حمام بالموجات فوق الصوتية لمدة 30 دقيقة، ومن ثم السماح للالأكواب باردة وصولا الى RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تبريد كوب ويتم غسلها والراتنج، وفتح الكأس. وضع محول طرف لرانه الحقنة، إضافة طرف ماصة. ماصة 1 مل من العينة وتحميله على الراتنج (ببطء شديد حتى لا تستنهض الهمم الراتنج). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يمر كل السائل من خلال العمود، إضافة 5 مل من 1،5 N دورية هارفارد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة في 5 مل من 1،5 N دورية هارفارد تمر عبر العمود، استبدال كوب القمامة مع نظيفة 15 مل دورق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 مل من 0،5 N HNO 3 2.5 مل في كل مرة. في هذه المرحلة هو مزال على الزنك من الراتنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة 5 مل من HNO 3 يمر خلال العمود، وإزالة الكأس ووضعها على طبق ساخن عند 100 درجة مئوية حتى المجففة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عمود من صاحب عمود؛ القمامة الراتنج (استخدام الراتنج جديد لكل عينة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة العينة جافة، كرر بروتوكول مع نفس الحجم من الأحماض على عمود أصغر (100 ميكرولتر) ومن ثم وضعه على طبق ساخن حتى يجف. العينة هي الآن جاهزة للمطياف الكتلة. </li></ol> 4. مطياف الكتلة القياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل كومبو النظائر الزنكsition على عدة إلى جانب جامع بالحث البلازما مطياف الكتلة (MC-ICP-MS). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المعلمات آلة تلخيصها في الجدول 1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أكواب فاراداي لجمع في الكتلة (م / ض) من 62 النيكل، النحاس 63، 64 الزنك، النحاس 65، 66 الزنك، الزنك 67 و 68 الزنك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير محلول يحتوي على 500 جزء في البليون الزنك في 0.1 M HNO 3 لتحليل النظائر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل حل 500 جزء في البليون من الزنك باستخدام غرفة رذاذ جنبا إلى جنب مع 100 ميكرولتر / دقيقة تفلون البخاخات. لكل عينة، قياس 30 بالاشعة (1 كتلة من 30 دورات) في الوقت الذي دمج كل التفحص 8.389 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصحيح الخلفية من خلال طرح الصفر شدة وعلى الذروة من حل فارغة (0.1 M HNO 3 حل تستخدم لإعادة بحل-العينات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرقابة والصحيح الممكن 64 ني تدخل إسوي الضغط عن طريق قياس شدة ني الذروة 62.نفترض أن 64 ني / 62 نسبة ني أمر طبيعي (0.2548)، صحيح هذه القيمة من التحيز كتلة فعال، ومن ثم إزالة ني 64 عن كتلة 64 على النحو التالي: 64 الزنك الحقيقي = 64 الزنك قياس - 64 ني = 64 الزنك قياس - (64 ني / 62 ني) الطبيعي × 62 ني قياسها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصحيح التحيز الشامل فعال من قبل بين أقواس كل من العينات مع 500 جزء في البليون حل معيار من المعايير JMC ليون الزنك (أو معيار متاح أخرى مثل IRMM-3702). أداء بين أقواس القياسية بقسمة نسبة الزنك 66 الزنك / 64 من العينة متوسط ​​نسبة الزنك 66 الزنك / 64 من معيارين تقاس قبل وبعد العينة ناقص 1 ومضروبا 1000 (انظر المعادلة 1). الدقة الخارجية نموذجية على مستوى JMC ليون الزنك هو 0.05 permil / اتحاد المغرب العربي (2 الانحراف المعياري، 2 SD). </li></ol>

<ol>
	<li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry.">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li><li>Marechal, C. N., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion-exchange+fractionation+of+copper+and+zinc+isotopes.">Ion-exchange fractionation of copper and zinc isotopes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 66 (9), 1499-1509 (2001).</li><li>Weiss, D. J., Mason, T. F. D., Zhao, F. J., Kirk, G. J. D., Coles, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isotopic+discrimination+of+zinc+in+higher+plants.">Isotopic discrimination of zinc in higher plants.</a> New Phytologist. 165 (3), 703-710 (2005).</li><li>Jouvin, D., Louvat, P., N, M. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+isotopic+fractionation:+why+organic+matters.">Zinc isotopic fractionation: why organic matters.</a> Environ Sci Technol. 43 (15), 5747-5754 (2009).</li><li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isotopic+fractionation+and+transport+mechanisms+of+Zn+in+plants.">Isotopic fractionation and transport mechanisms of Zn in plants.</a> Chemical Geology. 267 (3-4), 125-130 (2009).</li><li>Moynier, F., Herzog, G., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isotopic+composition+of+zinc,+copper,+and+iron+in+lunar+samples.">Isotopic composition of zinc, copper, and iron in lunar samples.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 70 (24), 6103-6117 (2006).</li><li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isotopic+fractionation+of+zinc+in+tektites.">Isotopic fractionation of zinc in tektites.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 277 (3-4), 482-489 (2009).</li><li>Chen, H., Savage, P., Teng, F. Z., Helz, R., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+isotope+fractionation+during+magmatic+differentiation+and+the+isotopic+composition+of+the+bulk+Earth.">Zinc isotope fractionation during magmatic differentiation and the isotopic composition of the bulk Earth.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 369-370, 34-42 (2013).</li><li>Moeller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calibration+of+the+new+certified+materials+ERM-AE633+and+ERM-AE6447+for+copper+and+IRMM+3702+for+zinc+isotope+amount+ratio+determination.">Calibration of the new certified materials ERM-AE633 and ERM-AE6447 for copper and IRMM 3702 for zinc isotope amount ratio determination.</a> Geostd. Geoan. Res. 36 (2), 177-199 (2012).</li><li>Bigeleisen, J., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+equilibrium+constants+for+isotopic+exchange+reactions.">Calculation of equilibrium constants for isotopic exchange reactions.</a> J. Chem. Phys. 15, 261-267 (1947).</li><li>Luck, J. M., Ben Othman, D., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zn+and+Cu+isotopic+variations+in+chondrites+and+iron+meteorites:+Early+solar+nebula+reservoirs+and+parent-body+processes.">Zn and Cu isotopic variations in chondrites and iron meteorites: Early solar nebula reservoirs and parent-body processes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 69 (22), 5351-5363 (2005).</li><li>Moynier, F., Dauphas, N., Podosek, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Search+for+70Zn+Anomalies+in+Meteorites.">A Search for 70Zn Anomalies in Meteorites.</a> Astrophys. J. 700 (2), L92-L95 (2009).</li><li>Paniello, R., Day, J., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zn+isotope+evidence+for+the+origin+of+the+Moon.">Zn isotope evidence for the origin of the Moon.</a> Nature. 490 (7420), 376-380 (2012).</li><li>Pichat, S., Douchet, C., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+isotope+variations+in+deep-sea+carbonates+from+the+eastern+equatorial+Pacific+over+the+last+175+ka.">Zinc isotope variations in deep-sea carbonates from the eastern equatorial Pacific over the last 175 ka.</a> Earth and Planetary Science Letters. 210 (1-2), 167-178 (2003).</li><li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice.">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li><li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bodily+variability+of+zinc+natural+isotope+abundance+in+sheep.">Bodily variability of zinc natural isotope abundance in sheep.</a> Rapid Com. Mass. Spec. 24, 605-612 (2010).</li><li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+Cu,+Fe,+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep,+with+emphasis+on+cellular+fractionation.">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li><li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS.">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li><li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS:+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert.">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li><li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material.">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

يتم تقييم استنساخ القياسات من خلال التحليلات تكرارها من نفس العينات التي نفذت خلال جلسات تحليلية مختلفة. على سبيل المثال 6، ونحن قد تتكرر نفس الصخور الأرضية 7 مرات وحصلنا على النتائج المدرجة في الجدول 2. كما هو متوق?...

قياس درجة عالية من الدقة وكان (أفضل من 100 جزء في المليون / وحدة الكتلة الذرية) الزنك تكوين نظائر مستقرة ممكنا إلا لنحو 15 عاما وذلك بفضل تطور متعددة جامع البلازما المصدر كتلة-الطيف ومنذ ذلك الحين تم تطبيق معظمها في الأرض وعلوم الكواكب. تطبيقات على المجال الطبي هي رواية ولها إمكانات قوية والمؤشرات الحيوية للأمراض التي تعديل التمثيل الغذائي من الزنك (على سبيل المثال، مرض الزهايمر). تقدم هذه الورقة طريقة لقياس بدقة عالية نسب النظائر المستقرة الطبيعية من الزنك في مختلف أجهزة الماوس. والشيء نفسه ينطبق على عينات من الإنسان. يتكون أسلوب حل الأجهزة، وتنقية المواد الكيميائية الزنك من بقية الذرات، ومن ثم تحليل نسبة النظائر على-مطياف الكتلة. جودة القياسات النظائر الزنك تعتمد على نوعية تنقية المواد الكيميائية (نقاء الزنك، وانخفاض شركات فارغةعرب كورب لكمية من الزنك الموجود في العينة، والغلة العالية الكيميائي للإجراءات)، وعلى السيطرة على التحيز فعال. هناك حاجة إلى نقاء عالية من الزنك جزء النهائي لإزالة كل التدخلات إسوي الضغط والتدخل غير إسوي الضغط الذي خلق تأثير المصفوفة. النويدات إسوي الضغط تخلق التدخلات المباشرة (على سبيل المثال، 64 ني). التدخلات غير إسوي الضغط تولد ما يسمى &quot;المصفوفة&quot; تأثير وتغير الدقة التحليلية القياسات عن طريق تغيير حالة التأين مقارنة مع مستوى الزنك النقي الذي يتم مقارنة العينات إلى 1. A منخفض فارغة (&lt;10 نانوغرام) يشير إلى أنه لا يوجد أي تلوث عينات من قبل الزنك الخارجية التي من شأنها أن التحيز تكوين النظائر قياسها. كما النظائر الزنك يمكن مجزأة خلال التبادل الأيوني اللوني 2، وجمع كل ذرات الزنك يضمن أن لا تجزئة النظائر يحدث، وهو ما يعني أنه ينبغي أن يكون الإجراء الكيميائية العائد الكامل. أخيرا، ويتم تصحيح تجزئة النظائر دور فعال خلال قياس مطياف الكتلة عبر برنامج &quot;بين أقواس القياسية&quot; الأسلوب. ولذلك، فإن الصعوبات الرئيسية للحصول على قياسات دقيقة والسيطرة على التلوث الخارجي (أي منخفضة فارغة)، مما ينتج عنه تنقية الكيميائية العائد الكامل الذي هو نظيفة من أي ذرات أو جزيئات أخرى، وتصحيح تجزئة النظائر فعال على-مطياف الكتلة. في هذه الورقة فإننا سوف تصف بروتوكول التحليلي لدينا لفصل الزنك من أجهزة الماوس وكذلك القياسات مطياف الكتلة. ويتم استخراج باستخدام كمية منخفضة من الأحماض المخففة (دورية هارفارد / HNO 3 وسائل الاعلام) على أعمدة صغيرة (0.5 ميكرولتر و 0.1 ميكرولتر) من راتنج أنيون الصرف. أنه يحتوي على العائد الكامل والقياسات لها استنساخ الخارجي أفضل من 50 صفحة في الدقيقة على نسبة الزنك 66 الزنك / 64. ميزة أخرى من المنهجياتالتطوير التنظيمي هو أنه سريع جدا. ولذلك هو الأسلوب تتكيف بشكل جيد للغاية لالعلوم الطبية، في أي واحد يحتاج إلى تحليل عدد كبير من العينات مقارنة مع العلوم الجيولوجية، حيث تم تطوير هذه الأساليب التحليلية.

<table><tbody><tr><td>Multi-collection inductively-coupled-plasma mass-spectromter</td><td>Thermo-Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anion-exchange resin AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>Teflon beakers</td><td>Savillex&amp;nbsp;</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>In-house-made teflon colunms made with shrinkable teflon</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

high precision zinc isotopic measurements applied to mouse organs

نقدم إجراء لقياس بدقة عالية نسب الزنك النظائر في أجهزة الماوس. يتكون الزنك من 5 نظائر مستقرة (64 الزنك، الزنك 66، 67 الزنك، الزنك 68 و 70 الزنك) والتي مجزأة بشكل طبيعي بين أجهزة الماوس. وتبين لنا أولا كيفية حل الأجهزة المختلفة من أجل تحرير ذرات الزنك. يتحقق هذه الخطوة من خلال مزيج من HNO 3 و H 2 O 2. نحن بعد ذلك تنقية ذرات الزنك من جميع العناصر الأخرى، ولا سيما من التدخلات إسوي الضغط (على سبيل المثال، ني)، من خلال أنيون تبادل اللوني في تمييع دورية هارفارد / HNO 3 متوسطة. يتم تنفيذ هذه الخطوات الأولى والثانية في مختبر نظيفة استخدام المواد الكيميائية عالية النقاء. وأخيرا، يتم قياس نسب النظائر باستخدام متعدد جامع إضافة بالحث-البلازما كتلة-مطياف، في دقة منخفضة. يتم حقن العينات باستخدام غرفة الرش وتجزئة النظائر الناجمة عن-مطياف الكتلة هو correcتيد بمقارنة نسبة العينات إلى نسبة معيار (تقنية أقواس القياسية). ينتج هذا الإجراء نموذجي كامل نسبة النظائر مع 50 جزء في المليون (2 SD) التكاثر.

في 1.5 N دورية هارفارد، والأنواع الرئيسية الزنك (ZnBr3-) أشكال المجمعات قوية جدا مع أنيون راتنج التبادل، في حين أن معظم عناصر أخرى لا تتفاعل مع الراتنج. ثم يتم استرداد الزنك عن طريق تغيير على المديين المتوسط ​​وHNO 3 المخفف، وتغيير أنواع جديدة من الزنك لزد 2+ الت?...

Watch this Scientific Journal Video about High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs at JoVE.com

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

We present the technique to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs.

عالية الدقة قياس الزنك النظائر تطبق على الماوس هيئات

We present a procedure to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs. Zinc is composed of 5 stable isotopes (64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

high-precision-zinc-isotopic-measurements-applied-to-mouse-organs

Research

JoVE Journal

Chemistry

7.4K Views.  Université Paris Diderot. We present the technique to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs.

Video: High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

Atomic Absorbance Spectroscopy to Measure Intracellular Zinc Pools in Mammalian Cells

Transition metals are essential micronutrients for organisms but can be toxic to cells at high concentrations by competing with physiological metals in proteins and generating redox stress. Pathological conditions that lead to metal depletion or accumulation are causal agents of different human diseases. Some examples include anemia, acrodermatitis enteropathica, and Wilson&#8217;s and Menkes&#8217; diseases. It is therefore important to be able to measure the levels and transport of transition metals in biological samples with high sensitivity and accuracy in order to facilitate research exploring how these elements contribute to normal physiological functions and toxicity. Zinc (Zn), for example, is a cofactor in many mammalian proteins, participates in signaling events, and is a secondary messenger in cells. In excess, Zn is toxic and can inhibit absorption of other metals, while in deficit, it can lead to a variety of potentially lethal conditions.

Graphite furnace atomic absorption spectroscopy (GF-AAS) provides a highly sensitive and effective method for determining Zn and other transition metal concentrations in diverse biological samples. Electrothermal atomization via GF-AAS quantifies metals by atomizing small volumes of samples for subsequent selective absorption analysis using wavelength of excitation of the element of interest. Within the limits of linearity of the Beer-Lambert Law, the absorbance of light by the metal is directly proportional to concentration of the analyte. Compared to other methods of determining Zn content, GF-AAS detects both free and complexed Zn in proteins and possibly in small intracellular molecules with high sensitivity in small sample volumes. Moreover, GF-AAS is also more readily accessible than inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) or synchrotron-based X-ray fluorescence. In this method, the systematic sample preparation of different cultured cell lines for analyses in a GF-AAS is described. Variations in this trace element were compared in both whole cell lysates and subcellular fractions of proliferating and differentiated cells as proof of principle.

Cultured primary or established cell lines are commonly used to address fundamental biological and mechanistic questions as an initial approach before using animal models. This protocol describes how to prepare whole cell extracts and subcellular fractions for studies of zinc (Zn) and other trace elements with atomic absorbance spectroscopy.

الطيفية الامتصاص الذري لقياس برك الزنك داخل خلايا الثدييات

Transition metals are essential micronutrients for organisms but can be toxic to cells at high concentrations by competing with physiological metals in ...

Biochemistry

Shotgun Lipidomics of Rodent Tissues

Lipids play a vital role as essential components of all prokaryotic and eukaryotic cells. Constant technological improvements in mass spectrometry have made lipidomics a powerful analytical tool for monitoring tissue lipidome compositions in homeostatic as well as disease states. This paper presents a step-by-step protocol for a shotgun lipid analysis method that supports the simultaneous detection and quantification of a few hundred molecular lipid species in different tissue and biofluid samples at high throughput. This method leverages automated nano-flow direct injection of a total lipid extract spiked with labeled internal standards without chromatographic separation into a high-resolution mass spectrometry instrument. Starting from sub-microgram amounts of rodent tissue, the MS analysis takes 10 min per sample and covers up to 400 lipids from 14 lipid classes in mouse lung tissue. The method presented here is well suited for studying disease mechanisms and identifying and quantifying biomarkers that indicate early toxicity or beneficial effects within rodent tissues.

Shotgun mass spectrometry-based lipidomics delivers a sensitive quantitative snapshot of a broad spectrum of lipid classes simultaneously in a single measurement from various rodent tissues.

بندقية الدهون من أنسجة القوارض

Lipids play a vital role as essential components of all prokaryotic and eukaryotic cells. Constant technological improvements in mass spectrometry have ...

Radiosynthesis and PET/CT Imaging of 68Ga-Labelled Nanobody in Xenograft Models

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of 68Ga-Labelled Nano Molecules

Small animal Positron Emission Tomography (PET) and Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) imaging techniques are crucial in preclinical cancer research, necessitating meticulous attention to radiotracer synthesis, quality assurance, and in vivo injection protocols. This study presents a comprehensive workflow tailored to enhance the robustness and reproducibility of small animal PET experiments. The synthesis process in the radiochemistry laboratory using 68Ga is detailed, highlighting stringent quality control and assurance protocols for each radiotracer production. Parameters such as concentration, molar activity, pH, and purity are rigorously monitored, aligning with standards applicable to human studies. This methodology introduces streamlined syringe preparation and a custom-designed 30G cannula for precise intravenous injections into mice. Monitoring of animal health during scanning, including temperature and heart rate, ensures their well-being throughout the procedure. Dosages for PET and SPECT scans are predetermined to balance data acquisition with minimizing radiation exposure to animals and researchers. Similarly, CT scans employ pre-programmed settings to limit radiation exposure, especially pertinent in long-term studies assessing treatment effects. By optimizing these steps, the workflow aims to standardize procedures, reduce variability, and enhance the quality of small animal PET/SPECT/CT imaging. This resource provides valuable insights for researchers seeking to improve the accuracy and reliability of preclinical investigations in molecular imaging, ultimately advancing the field.

This paper describes the radiosynthesis, formulation, quality control of a new radiolabeled probe (i.e., 68Ga-labeled nanobody NM-02), and its use for small animal PET/CT imaging in a xenograft model.

Small animal Positron Emission Tomography (PET) and Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) imaging techniques are crucial in preclinical ...

Cancer Research

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral load. The purpose of the procedure is to quantify viral titers in peripheral and CNS areas of the mouse at different time points post infection or under different experimental conditions to identify virologic and immunological factors that regulate Zika virus infection. The organ isolation procedures demonstrated allow for both focus forming assay quantification and quantitative PCR assessment of viral titers. The rapid organ isolation techniques are designed for the preservation of virus titer. Viral titer quantification by focus forming assay allows for the rapid throughput assessment of Zika virus. The benefit of the focus forming assay is the assessment of infectious virus, the limitation of this assay is the potential for organ toxicity reducing the limit of detection. Viral titer assessment is combined with quantitative PCR, and using a recombinant RNA copy control viral genome copy number within the organ is assessed with low limit of detection. Overall these techniques provide an accurate rapid high throughput method for the analysis of Zika viral titers in the periphery and CNS of Zika virus infected animals and can be applied to the assessment of viral titers in the organs of animals infected with most pathogens, including Dengue virus.

The goal of the protocol is to demonstrate the techniques used to investigate viral disease by isolating and quantifying Zika virus, from multiple organs in a mouse following infection.

عزل وتقدير كمية لفيروس زيكا من أجهزة متعددة في الماوس

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...

Immunology and Infection

Body Composition and Metabolic Caging Analysis in High Fat Fed Mice

Alterations to body composition (fat or lean mass), metabolic parameters such as whole-body oxygen consumption, energy expenditure, and substrate utilization, and behaviors such as food intake and physical activity can provide important information regarding the underlying mechanisms of disease. Given the importance of body composition and metabolism to the development of obesity and its subsequent sequelae, it is necessary to make accurate measures of these parameters in the pre-clinical research setting. Advances in technology over the past few decades have made it possible to derive these measures in rodent models in a non-invasive and longitudinal fashion. Consequently, these metabolic measures have proven useful when assessing the response of genetic manipulations (for example knockout or transgenic mice, viral knock-down or overexpression of genes), experimental drug/compound screening and dietary, behavioral or physical activity interventions. Herein, we describe the protocols used to measure body composition and metabolic parameters using an animal monitoring system in chow-fed and high fat diet-fed mice.

This protocol describes the use of a body composition analyzer and metabolic animal monitoring system to characterize body composition and metabolic parameters in mice. An obesity model induced by high-fat feeding is used as an example for the application of these techniques.

تكوين الجسم والتحليل الأيضي حبس في الفئران بنك الاحتياطي الفيدرالي الدهون عالية

Alterations to body composition (fat or lean mass), metabolic parameters such as whole-body oxygen consumption, energy expenditure, and substrate ...

Medicine

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

التحليل الكمي لتكوينها الخلوي في الآفات تصلب الشرايين المتقدمة للعضلات الملساء خلية تتبع النسب الفئران

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as cholangiocytes, myofibroblasts, progenitors and inflammatory cells also indicate chronic liver damage, tissue remodeling and disease progression. In this protocol, we describe a simple high-throughput approach for calculating changes in the cellular composition of the liver that are associated with injury, chronic disease and cancer. We show how information extracted from two-dimensional (2D) tissue sections can be used to quantify and calibrate hepatocyte nuclear ploidy within a sample and enable the user to locate specific ploidy subsets within the liver in situ. Our method requires access to fixed/frozen liver material, basic immunocytochemistry reagents and any standard high-content imaging platform. It serves as a powerful alternative to standard flow cytometry techniques, which require disruption of freshly collected tissue, loss of spatial information and potential disaggregation bias.

We present a robust, cost-effective, and flexible method for measuring changes in hepatocyte number and nuclear ploidy within fixed/cryopreserved tissue samples that does not require flow cytometry. Our approach provides a powerful sample-wide signature of liver cytology ideal for tracking the progression of liver injury and disease.

طريقة عالية الإنتاجية في الموقع لتقدير البليدي النووي الكبدي في الفئران

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...

Imaging CD19+ B Cells in an Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Mouse Model using Positron Emission Tomography

Multiple sclerosis (MS) is the most common demyelinating central nervous system (CNS) disease affecting young adults, often resulting in neurological deficits and disability as the disease progresses. B lymphocytes play a complex and critical role in MS pathology and are the target of several therapeutics in clinical trials. Currently, there is no way to accurately select patients for specific anti-B cell therapies or to non-invasively quantify the effects of these treatments on B cell load in the CNS and peripheral organs. Positron emission tomography (PET) imaging has enormous potential to provide highly specific, quantitative information regarding the in vivo spatiotemporal distribution and burden of B cells in living subjects.
This paper reports methods to synthesize and employ a PET tracer specific for human CD19+ B cells in a well-established B cell-driven mouse model of MS, experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), which is induced with human recombinant myelin oligodendrocyte glycoprotein 1-125. Described here are optimized techniques to detect and quantify CD19+ B cells in the brain and spinal cord using in vivo PET imaging. Additionally, this paper reports streamlined methods for ex vivo gamma counting of disease-relevant organs, including bone marrow, spinal cord, and spleen, together with high-resolution autoradiography of CD19 tracer binding in CNS tissues.

Imaging CD19+ B Cells in an Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Mouse Model using Positron Emission Tomography

This paper details methodology for radiolabeling a human-specific anti-CD19 monoclonal antibody and how to use it to quantify B cells in the central nervous system and peripheral tissues of a mouse model of multiple sclerosis using in vivo PET imaging, ex vivo gamma counting, and autoradiography approaches.

تصوير خلايا CD19 + B في نموذج فأر تجريبي لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني

Multiple sclerosis (MS) is the most common demyelinating central nervous system (CNS) disease affecting young adults, often resulting in neurological ...

Neuroscience

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the three-dimensional (3D) architecture of the organ at the whole-organ level. Liver architecture is characterized by multiple branching lumenized structures, which can be filled with resin, including vascular and biliary trees, establishing a highly stereotyped pattern in the otherwise hepatocyte-rich parenchyma. This protocol describes the pipeline for performing double resin casting micro-computed tomography, or &#34;DUCT&#34;. DUCT entails injecting the portal vein and common bile duct with two different radiopaque synthetic resins, followed by tissue fixation. Quality control by clearing one lobe, or the entire liver, with an optical clearing agent, allows for pre-screening of suitably injected samples. In the second part of the DUCT pipeline, a lobe or the whole liver can be used for micro-computed tomography (microCT) scanning, (semi-)automated segmentation, and 3D rendering of the portal venous and biliary networks. MicroCT results in 3D coordinate data for the two resins allowing for qualitative as well as quantitative analysis of the two systems and their spatial relationship. DUCT can be applied to postnatal and adult mouse liver and can be further extended to other tubular networks, for example, vascular networks and airways in the lungs.

Double resin casting micro-computed tomography, or DUCT, enables visualization, digitalization, and segmentation of two tubular systems simultaneously to facilitate 3D analysis of organ architecture. DUCT combines ex vivo injection of two radiopaque resins followed by micro-computed tomography scanning and segmentation of the tomographic data.

عالية الدقة قياس الزنك النظائر تطبق على الماوس هيئات

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

إعداد وتقييم

الطيفية الامتصاص الذري لقياس برك الزنك داخل خلايا الثدييات

بندقية الدهون من أنسجة القوارض

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of ⁶⁸Ga-Labelled Nano Molecules

عزل وتقدير كمية لفيروس زيكا من أجهزة متعددة في الماوس

تكوين الجسم والتحليل الأيضي حبس في الفئران بنك الاحتياطي الفيدرالي الدهون عالية

التحليل الكمي لتكوينها الخلوي في الآفات تصلب الشرايين المتقدمة للعضلات الملساء خلية تتبع النسب الفئران

طريقة عالية الإنتاجية في الموقع لتقدير البليدي النووي الكبدي في الفئران

تصوير خلايا CD19 ⁺ B في نموذج فأر تجريبي لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني

DUCT: الصب الراتنج المزدوج تليها التصوير المقطعي المحوسبة الدقيقة لتحليل الكبد 3D