ونود أن نشكر أليكس هيتشن وميج بوث لمساعدتهم في محاكمات التزاوج. وأيد هذا العمل من قبل NE منحة NERC / H015604 / 1 إلى TP.

1. إعداد يطير الغذاء مع تلوين الطعام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ ذبابة الفاكهة قارورة القياسية مع ما يقرب من 20 مل من الطعام في القاع (الشكل 1). استخدام الوصفة التالية لمزيج الطعام باستخدام 1 L من الماء المغلي: 10 غرام من أجار، 85 غرام من سكر العنب، و 60 غراما من دقيق الذرة و 40 غرام من الخميرة، ويقلب لمدة 5 دقائق من يجيش. إضافة 25 مل من 10٪ nipagen بمجرد أن يبرد الخليط إلى 75 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الطعام قد بردت وطدت إضافة قطرتين (حوالي 0،5-1 مل) من الأزرق تلوين الطعام إلى الجزء العلوي من المواد الغذائية وتنتشر فوق سطح الأرض كله من القارورة (الشكل 1). استخدام صبغة لون مختلف إذا المفضل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الطعام لمدة يومين في الثلاجة بحيث يتم امتصاص الصبغة من قبل الطبقة العليا من الغذاء؛ هذا يتجنب الرطوبة الزائدة الإضرار الذباب خلال فترة النضج. إضافة قطعة صغيرة من المناديل الورقية إذا الرطوبة الزائدة لا يزال يمثل مشكلة لطخة تصل الرطوبة الزائدة وثم في وقت لاحقأزلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الذباب على الطعام إما بشكل فردي أو في مجموعات. ملاحظة: سوف الذباب كسب تلطيخ الأمعاء في حدود 1 يوم التي توضع على الطعام. بدلا من ذلك، تنضج تماما الذباب على الطعام مصبوغ قبل التجربة (ارتفاع معدلات الوفيات خلال فترة النضج لم يكن لوحظ من التعرض للصبغة الطعام). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن الذباب مصبوغ يمكن تمييزها بسهولة من الذباب غير مصبوغ. إذا كانوا لا يمكن تمييزها، كرر الخطوات من 1،1-1،4 باستخدام إما على تركيز أعلى من الصبغة، أو صبغة مختلفة. </li></ol> 2. اثنان المحاكمات التزاوج ذكر عن طريق الغذاء تلوين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإنتاج ذرية، وإعداد قارورة تحتوي على عدة أزواج من الذباب الإناث والذكور (مجموعات صغيرة من الذكور والإناث هي أيضا مناسبة، على الرغم من أن تحرص على تجنب الازدحام اليرقات). السماح للإناث لوضع البيض ونقل الذباب إلى قارورة جديدة كل 5-7 أيام. متجر قارورة في درجة حرارة مناسبة لنوع من الفائدة (22 ° C وأو D. pseudoobscura وD. subobscura و 25 درجة مئوية لمدة D. البطن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل جمع الذباب التجريبية إزالة كافة الذباب من قارورة جمع في الوقت المحدد قبل جمع الذكور والإناث لضمان أنها ستكون العذارى (D. البطن - 6 ساعة عند 25 ° C، D. pseudoobscura - 18 ساعة عند 22 ° C، و D. subobscura - 24 ساعة عند 22 ° C). ملاحظة: إذا كان الذباب ليست عذراء هذه الإرادة التحيز سلوكهم في محاكمات التزاوج 15. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين والذكور ناضجة بشكل فردي في القياسية 75 × 20 مم قوارير البلاستيك (التي تحتوي على ~ 20 مل من المواد الغذائية). هذا يتجنب الآثار السلبية على سلوك التزاوج من الذكور واللياقة البدنية ينظر في بعض الأنواع عندما يتم الاحتفاظ الذكور في مجموعات 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فضح نصف الذكور للعلاج المطلوب (CO 2 التخدير في هذه الحالة). استخدام CO 2 حصيرة أو الاستفادة لفضح الذباب للفترة الزمنية المطلوبة. مخزن نصف سوءوفاق في كل معاملة على المواد الغذائية الملونة حتى التزاوج يحدث. وهذا سيجعل لهم تمييزها بصريا خلال المحاكمات التزاوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لنقل الذباب استخدام الشافطة 17. تسمية كل قارورة لتحديد كل من العلاج ووضع اللون من الذكور. هنا، استخدم أربعة معالجات (التخدير، وغير الملونة = G-NC، التخدير، ملونة = GC، لا التخدير، وغير الملونة، NG-NC، وليس التخدير، واللون، NG-C). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الإناث ظهرت حديثا في قوارير المواد الغذائية الطازجة حتى تنضج كمجموعات من 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الذباب إلى أن تنضج لسن التزاوج (D. البطن - 3 أيام، D. pseudoobscura - 5 أيام، D. subobscura - 7 أيام 18 الذباب يخزن في درجة حرارة مناسبة للأنواع التي تجري دراستها (على سبيل المثال، 22 ° C D ل. . pseudoobscura وD. subobscura و 25 درجة مئوية لمدة D. البطن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتقال الإناث إلى قارورة الفردية (تابعaining ~ 20 مل من الطعام) قبل المحاكمة التزاوج للتأقلم على القارورة التزاوج 1 يوم. تسمية هذه قارورة بحيث قارورة يمكن التفريق. كن حذرا للتشويش على التجربة باستخدام وسم محايد (أي 1-150) لذلك ليس من الممكن لتخمين هوية الذباب في أي قنينة. ملاحظة: إن الشخص الذي يضع الذباب في كل قارورة أن تعرف هوية الذباب وضعت في كل قارورة لأنها سوف نلاحظ التي كانت ملطخة العلاج. ومع ذلك، ينبغي المراقب الذي يشاهد التزاوج لا يعرف هويتهم. للقيام سوف تكون هناك حاجة إلى هذا اثنين على الأقل المجربون، واحدة لإنشاء واحد لمراقبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء المحاكمات التزاوج بين 10-12 صباحا، أو في الوقت الذي يتزامن مع الضوء القادم على في ضوء دورة / المظلمة يتعرض الذباب إلى (&quot;الفجر&quot; للذباب). إضافة اثنين من الذباب الذكور إلى كل قارورة التزاوج (التي تحتوي على ذبابة أنثى واحدة) باستخدام الشافطة. تأكد من أن الذكور هما من العلاجات المختلفة (التخدير أوالسيطرة) وأن على المرء أن تلطيخ الأمعاء لتجعل من الممكن لتمييزها عن بعضها البعض، والانتباه إلى الذكور اتسخت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا حدث الجماع، تسجيل حالة من الذكور أن الاصحاب (سواء الملونة أو غير - الملونة). إذا التجارب الماضية لمدة 2 ساعة، يفترض أن الأنثى لا تتزاوج. ملاحظة: 2 ساعة مناسبة لهذه الأنواع، ولكن غيرها من ذبابة الفاكهة قد تحتاج أكثر أو أقل وقت. </li></ol> 3. عزباء ذكر المحاكمات التزاوج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للمحاكمات الذكور واحدة، كرر بروتوكول 2 مع اثنين من التغييرات: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوة 2.3 لا تبقي الذكور على المواد الغذائية الملونة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوة 2.7، فقط إضافة ذكرا واحد لكل قارورة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوة 2.8، تسجيل مرة يضاف الطاير إلى القارورة، والوقت يجب أن تسجل يبدأ التزاوج والوقت الانتهاء من التزاوج. من هذه القيم، وحساب التزاوج النجاح، الكمون، ومدتها. </li></ol> 4. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام حزمة إحصاءات مناسبة لآناتحلل. إذا كانت البيانات طبيعية وليس لها سوى اثنين من العلاجات، واستخدام تي الاختبارات أو ما يعادلها المعمم النموذج الخطي (GLM). لتجربتين الذكور، استخدام اختبارات ذات الحدين أو GLM ذي الحدين المتوفرة في أي حزمة الإحصاءات الأساسية. ملاحظة: للحصول على البيانات سبيل المثال، تم تنفيذ جميع التحليلات في R نسخة 3.0.3 19. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من البيانات الكمون التزاوج ومدة التزاوج لطبيعتها، من خلال التآمر رسوم بيانية تردد من الكمون ومدة كل معاملة 20، وباستخدام اختبار لطبيعتها مثل شابيرو-ويلك. إذا كان غير طبيعي، وتحويلها، أو استخدام إحصاءات يعادل غير المعلمية 20. ملاحظة: لتسجيل بيانات سبيل المثال من خلال تجارب ذكر أعزب التقى التحول متطلبات الحياة الطبيعية والفروق متساوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كانت البيانات يمكن أن يكون طبيعيا، واستخدام تي اختبارات لفحص الفروق بين الكمون التزاوج ومدة واحدة في محاكمات التزاوج الذكور عند استخدام اثنين من العلاجات 21. إذا تم استخدام علاجات متعددة،محاولة لتحليل التباين (ANOVA) 20. إذا لا يمكن تطبيع البيانات، حاول الاختبارات غير المعلمية أي ما يعادل 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام اختبارات ذات الحدين لاختبار تأثير إما تلوين الطعام أو CO 2 التخدير على نجاح التزاوج من الذكور المتنافسة 20. إذا تم استخدام علاجات متعددة، كما هو الحال مع البيانات سبيل المثال، استخدام GLM مع هيكل خطأ ذي الحدين 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمدة المحاكمات الذكور في البيانات سبيل المثال، استخدم GLMs مع الهياكل الخطأ ذات الحدين. فحص واحد GLM لون متغير استجابة (ملون = 0 وغير الملون = 1) مع الأنواع، والوضع الغاز ومعالجة الغاز كتجهيز توضيحي variables.One GLM فحص CO 2 كمتغير استجابة (بالغاز = 0 وليس بالغاز- = 1) مع الأنواع، ووضع اللون، ومعالجة الغاز تركيبها. في كل حالة، وإنتاج نموذج القصوى، وتنفيذ نموذج التبسيط على أساس AIC 20. </li></ol>

<ol>
	<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+competition+and+its+consequences+in+insects.">Sperm competition and its consequences in insects.</a> Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).</li><li>Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monogamy+and+the+battle+of+the+sexes.">Monogamy and the battle of the sexes.</a> Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).</li><li>Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+cost+of+mating+caused+by+males+accessory+gland+fluids.">Female cost of mating caused by males accessory gland fluids.</a> Nature. 373, 241-244 (1995).</li><li>Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-based+female+preference+in+the+fruit+fly+Drosophila+pseudoobscura.">Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura.</a> Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).</li><li>Barron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila.+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li><li>Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+selection+and+bottlenecks+on+male+mating+success+in+peripheral+isolates.">The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates.</a> The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).</li><li>Ashburner, M., Thompson, J. N., Ashburner, M., Wright, T. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+culture+of+Drosophila.">The laboratory culture of Drosophila.</a> The Genetics and Biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).</li><li>Powell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. , (1997).</li><li>Moore, A. J., Moore, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+sexual+selection+through+opposing+mate+choice+and+male+competition.">Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).</li><li>Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+speciation+by+sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster.:+Variation+in+Mating+preference+and+Correlation+between+sexes.">Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes.</a> Evolution. 51, 1175-1181 (1997).</li><li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster.">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).</li><li>Wu, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster+:+A+possible+case+of+incipient+speciation.">Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation.</a> Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).</li><li>Melcher, C., Pankratz, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+gustatory+interneurons+modulating+feeding+behaviour+in+the+Drosophila+brain.">Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain.</a> PLoS Biology. 3, e305 (2005).</li><li>Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+food+coloring+on+longevity+and+viability+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster.</a> Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).</li><li>Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+perception+of+female+mating+status:+its+effect+on+copulation+duration,+sperm+defence+and+female+fitness.">Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness.</a> Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).</li><li>Liz&#233;, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extreme+cost+of+rivalry+in+a+monandrous+species+male+&#8722;+male+interactions+result+in+failure+to+acquire+mates+and+reduced+longevity.">Extreme cost of rivalry in a monandrous species male &#8722; male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).</li><li>Yeh, S. -. D., Chan, C., Ranz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+differences+in+sperm+competitive+ability+in+Drosophila.">Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).</li><li>Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+use+is+an+infertile+sperm?+A+comparative+study+of+sperm-heteromorphic+Drosophila.">What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila.</a> Evolution. 62, 374-385 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A Language and Environment for Statistical Computing. , (2011).</li><li>Crawley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statistics: An introduction using R. , (2005).</li><li>Dytham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. , (2010).</li><li>Kaiser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+anaesthesia+by+carbon+dioxide+on+hatching+time+and+weight+at+eclosion+in+Drosophila+melanogaster.">Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster.</a> Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila.+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).</li><li>Crumpacker, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+micronized+fluorescent+dusts+to+mark+adult+Drosophila+pseudoobscura.">The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura.</a> American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).</li><li>Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+few+chemical+words+exchanged+by+Drosophila+during+courtship+and+mating.">A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating.</a> Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).</li><li>Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cuticular+hydrocarbons+and+their+effect+on+courtship+in+Drosophila+virilis+and+D.+lummei.">Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei.</a> Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).</li></ol>

تعلن المؤلفين أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

هذه البيانات تظهر أن تأثير التخدير CO 2 غير متناسقة بين الأنواع، مع اثنين من ثلاثة أنواع تبين تأثير يذكر. وتشير نتائجنا زيارتها وضع العلامات مع صبغة الطعام له تأثير أقل على نجاح التزاوج من الذكور من CO 2 التخدير لD. البطن. وتبين هذه التجارب أن الأصباغ الغذائية يمكن بسهولة وبتكلفة منخفضة استخدامها لالذباب التسمية لفحوصات التزاوج التي تنطوي على الذكور متعددة. من ثلاثة أنواع ذبابة الفاكهة نموذج فحص، إلا D. أظهر البطن تأثير من CO 2 التخدير على أداء التزاوج في وضع تنافسي. في المقابل، فإن أيا من الأنواع أظهر تأثير جمع على الغاز في تجارب التزاوج واحدة من حيث الكمون التزاوج، على عكس النتائج السابقة للD. البطن 5. يمكن بالتالي فإن تأثير المنافسة يتم تسليط الضوء على آثار اللياقة البدنية أكثر دهاء من التخدير CO 2، والتي هي كشف فقطتحت الحالات التي يكون فيها هناك منافسة بين الذكور والذكور. التعرض في جمع المبكر وقبل يوم واحد إلى المحاكمة يكون لها تأثير سلبي على قدرة الذكور من D. البطن للحصول على التزاوج. تعرض قبل يومين من المحاكمة ولكن لم تظهر أي تأثير. كلا D. pseudoobscura وD. لم subobscura لا تظهر أي تأثير التعرض للغاز في أي من التجارب. تفسير واحد هو أن D. كان البطن عرضة للالتعرض المبكر للCO 2 لأنه يجب جمع في الحياة في وقت سابق (0 - 6 ساعة قديمة) من الأنواع الأخرى لضمان الذكور هم البكر. وبالتالي الذكور D. البطن في هذه السن قد تكون أكثر حساسية مثل بشرة من ذبابة لا يزال تصلب، مقارنة مع الأنواع الأخرى التي كان يعد لبشرة لتتصلب. بشكل عام، وهذا يدعم فكرة أن آثار CO 2 التخدير هي أنواع محددة والمحققين يجب اختبار مناسب تأثير في الأنواع المستهدفة. Currentlوقد تم تنفيذ ذ، الجزء الأكبر من عمل على تأثير CO 2 التخدير خارجا على ذبابة الفاكهة البطن 5،11،22، وبالتالي قد لا يكون مناسبا لتطبيقه على الأنواع الأخرى ذات الصلة. طريقة غير الغازية بديل قدمت للتمييز ذباب، هو صبغة الطعام. وتشير النتائج كان هذا العلاج أي تأثير في في جميع الأنواع التي تم فحصها. ومع ذلك، في حين كان الاستخدام الناجح في توفير علامة الرخيصة ومرئية بسهولة للتمييز بين الأفراد تجدر الإشارة إلى أن الصبغة كان أسهل للتمييز في D. pseudoobscura وD. subobscura مما كان عليه في D. وقد استخدمت البطن. السابق مؤلفين عدة ألوان (الأحمر والأخضر والأزرق) 4،6. وجدنا التلوين الأزرق ليكون أسهل للتمييز في جميع الأنواع، وخاصة D. pseudoobscura وD. subobscura. باستخدام عدة ألوان من المحتمل أن تسمح تجارب أكثر تعقيدا مع العديد من flie ملحوظ بشكل فرديالصورة. ومع ذلك، الاختبارات الأولية من الأصباغ المختلفة ضرورية، كما تفشل بعض الأصباغ الغذائية لتلوين الذباب، ربما يتم هضمها عندما تستهلك. يمكن الأصباغ الأخرى لها آثار سامة والحد من البقاء على قيد الحياة من الذباب، وينبغي تجنبها 14). كما تم استخدام طرق تلوين الطعام بديلة باستخدام البقع أكثر تكلفة لفحص سلامة الأمعاء لD. البطن 23. قد توفر هذه كبديل لذلك، على الرغم من أن أكثر تكلفة، وأسلوب الصباغة 23. طريقة صبغ سريع مثل CO 2 الجناح لقطة كما الذباب يمكن تخزينها على الغذاء مصبوغ من المجموعة. كان الإقبال على الطعام السريع (~ 3 ساعة)، لذلك تخزين O / N على المواد الغذائية الملونة أيضا يكون كافيا للاحتفال الذباب، كما تستخدم في دراسات أخرى 6. ومع ذلك، فإن مدة التلوين قصيرة نسبيا (~ 4-5 ساعة) مقارنة لقطة الجناح (دائمة) أو الغبار الفلورسنت بمناسبة (10 - 12 أيام) 24. كما الأنواع ذبابة الفاكهةتختلف في المظهر، والأصباغ المختلفة تكون أكثر أو أقل فعالية بالنسبة للأنواع المختلفة، وحيث أن بعض سلالات (على سبيل المثال، المسوخ خروج المغلوب) يمكن أن يكون عرضة للتغييرات في النظام الغذائي، أي استخدام صبغة يتطلب اختبارا أوليا لفعاليتها لا سيما إذا كانت أطول التعرض الطويل لالأصباغ يمكن أن تكون سامة 14. وعلى النقيض من الدراسة من قبل كالاو وآخرون 14، لم نعثر على أي وفيات كبيرة بعد التخزين لأيام متعددة على الأطعمة الملونة لD. البطن (3 أيام)، D. pseudoobscura (5 أيام)، أو D. subobscura (7 أيام)، وربما يرجع ذلك إلى اختلاف صبغة المستخدمة. في خطوة حاسمة لنجاح استخدام تقنية الصبغة هي خطوة 1.5، وهو ما يؤكد وصبغ المختار يعمل بشكل جيد مع الأنواع والسلالة المستخدمة. وتتضمن تقنية بديلة تطبيق الغبار الملون إلى خارج الطاير قبل استخدامها في التجارب الميدانية 24. وقد استخدمت هذه الطريقة لتتبع الأفراد في ر يرجع الحقلس مدة وضع العلامات وسهولة كتلة بمناسبة الذباب 24. على الرغم من أننا لم تختبر صراحة هذه الطريقة في التجارب التزاوج، سيكون من المهم دراسة أي آثار الغبار التي يمكن أن يكون لها على الحواس الهامة في التزاوج، ولا سيما في ذبابة الفاكهة 25 و 26. وفي الأنواع، ومع ذلك، حيث الصباغة المعوية غير ممكن، هذه الأساليب يمكن أن تكون مناسبة. وفي الختام وجدنا أن في اثنين من الأنواع الثلاثة اختبار (D. pseudoobscura وD. subobscura) لم يكن هناك تأثير وجدت أي من CO 2 التخدير أو تلوين الطعام على قدرة التزاوج من الذكور. لD. البطن تأثير سلبي من CO 2 التخدير تم الكشف، ولكن لم تلوين الطعام لا يؤثر على التزاوج النجاح في هذا النوع. وبشكل عام، يوفر طريقة صبغ طريقة بسيطة ورخيصة غير الغازية لتحديد فردية ذبابة الفاكهة التي تعادل أو أفضل من الأساليب التي تتطلب CO 2 التخدير. هذاومن المرجح أن هذه الطريقة تعمل عبر مجموعة من الأنواع.

على مدى العقود القليلة الماضية كان هناك اهتمام متزايد في كيفية الاختيار والمنافسة الجنسي بين الذكور تأثير على تطور 1،2. وقد لعبت تجارب على سلوك التزاوج دورا هاما في تطوير واختبار نظريات الانتقاء الجنسي 3،4. وبصفة خاصة الأنواع الابحاث التي تستخدم، من جنس ذبابة الفاكهة، ساهمت إلى حد كبير في فهم الانتقاء الجنسي والسلوك. ومع ذلك، فمن المهم للتحقيق في ما إذا كانت التقنيات المستخدمة عادة قد تحيز بشكل مصطنع نتائج التجارب التزاوج القياسية 5،6. وكثيرا ما يستخدم التخدير لمعالجة وتحديد الهوية في تجارب 7. على سبيل المثال، يتم جمع الذباب عادة قبل التزاوج، أو تخزن في المورثات أو علاجات تجريبية باستخدام ثاني أكسيد الكربون (CO 2) مخدر. في التجارب التي يحتاج فيها شخصان أو أكثر لتمييزها، هو ممارسة شائعة لخدر في فلوريداالمنشأ وكليب جزء من الجناح قبالة لتحديد كل مجموعة فردية أو المعاملة 5،8. ومن الأهمية بمكان، ولكن، لفهم كيفية CO 2 العلاج سوف تؤثر على السلوك. وقد تم فحص تأثير CO 2 التخدير في ذبابة الفاكهة السوداء التي تكون فيها الذكور يتعرضون لثاني 2 استغرق فترة أطول كثيرا للتزاوج وعموما كان أقل نجاحا التزاوج من الذكور غير مخدرة أو الذكور مخدرة باستخدام التعرض للبرد 5. وقد لوحظ هذا التأثير على حد سواء عندما تم تطبيق التخدير في يوم التجربة وعندما تم احتساب الذباب يوم واحد لاسترداد. ومع ذلك، كان هذه الدراسة محدودة في دراسة تجارب فقط حيث تم تقديم الذكور واحد إلى كل أنثى 5. سيناريو أكثر واقعية هو لالإناث إلى الذكور تواجه متعددة 9،10، مما يتيح التنافس بين الذكور، والتي قد تسمح للكشف عن المزيد من الخسائر خفية من اللياقة البدنية الذكور بسبب التخدير. استخدام التخدير CO 2 قد يكون أيضاوجدت أون للحد من الخصوبة وطول العمر من البالغين D. البطن عندما يتعرضون بعد وقت قصير من eclosion، كما هو شائع عند جمع عذراء الذباب (11). بديلا لثاني 2 التخدير هو للاحتفال الذباب عن طريق تغذية لهم الطعام الملونة مع صبغ 4،6،10،12،13. هذه الصبغة يدخل أمعاء الطاير ومرئيا من خلال البطن، مما يسمح الذباب الملونة لتمييزها عن الذباب بغير لون، أو من الذباب المسمى مع لون مختلف. طرق تختلف في كيفية هذا يمكن تطبيقها: إضافتها مباشرة إلى الغذاء 12، عن طريق مصبوغ عجينة الخميرة التكميلية 6، أو عن طريق التعرض لرواية مصبوغة الغذاء الركيزة 13. ويبدو أن هذه التقنيات بمناسبة لإظهار أي تأثير على أداء 4،6 التزاوج. ومع ذلك، ورقة فحص مباشرة آثار نفس تلوين الطعام على الكبار D. وجد البطن انخفاض قوي في عمر 14. وقد ركز العمل السابق أيضا ALMمعاهدة الفضاء الخارجي كليا على D. البطن، سواء فيما يتعلق آثار CO 2 التخدير 5،11 وتلوين الطعام 14 الأساليب. حاليا، هناك القليل من المعلومات حول كيفية CO 2 التخدير أو استخدام التلوين الأمعاء يؤثر على سلوك التزاوج من غيرها من ذبابة الفاكهة. الدراسة التالية بتقييم تأثير CO 2 التخدير على سلوك التزاوج من ثلاثة أنواع من ذبابة الفاكهة (D. البطن، D. pseudoobscura، وD. subobscura). تم فحص تأثير جمع الذباب على CO 2 في تجربتين التزاوج الذكور على حد سواء واحد. كما تم العثور على تأثير CO 2 إلى تختلف في D. تم اختبار البطن 5 وفترات كمون مختلفة حتى بين التعرض لثاني 2 والتزاوج. بديل بمناسبة طريقة لقطة التخدير والجناح: يتم تقييم أيضا استخدام الأصباغ الغذائية وصمة عار على الذباب.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plastic tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TWT-200-061G</td>
			<td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine mesh</td>
			<td>Any haberdashery</td>
			<td>-</td>
			<td>Fine curtain mesh is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml pipette tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-376</td>
			<td>Various brands of pipette tips would be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Vials</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>58.49</td>
			<td>Larger vials or bottles could also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Balls</td>
			<td>Lewis Medical Solutions</td>
			<td>28170</td>
			<td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue Food colouring</td>
			<td>Thesugarcraftcompany</td>
			<td>-</td>
			<td>Other dye colours and brands can have variable results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Tank</td>
			<td>BOC</td>
			<td>BOC 40VK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpie Markers</td>
			<td>Steadtler</td>
			<td>Lumocolor 313 S</td>
			<td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Salter</td>
			<td>SL3920</td>
			<td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

وقد ساهمت تجارب التزاوج باستخدام ذبابة الفاكهة إلى حد كبير في فهم الانتقاء الجنسي والسلوك. وغالبا ما تتطلب التجارب أساليب بسيطة وسهلة ورخيصة للتمييز بين الأفراد في المحاكمة. وهناك تقنية القياسية لهذا هي CO 2 التخدير ثم وصفها أو الجناح لقطة كل الطاير. ومع ذلك، وهذا هو الغازية ولقد ثبت أن تؤثر على السلوك. وقد استخدمت تقنيات أخرى تلوين للتعرف على الذباب. تقدم هذه المقالة طريقة بسيطة وغير الغازية لوضع العلامات ذبابة الفاكهة التي تسمح لهم أن تحدد بشكل فردي ضمن التجارب، وذلك باستخدام تلوين الطعام. وتستخدم هذه الطريقة في التجارب حيث تتنافس اثنين من الذكور لتتزاوج مع الإناث. الصباغة سمحت تحديد سريعة وسهلة. كان هناك، ومع ذلك، هناك بعض الاختلاف في قوة تلوين عبر الأنواع الثلاثة التي تم اختبارها. يتم تقديم بيانات تظهر الصبغة لها تأثير أقل على سلوك التزاوج من CO 2 في ذبابة الفاكهة بميلانوجاستر. ويظهر تأثير التخدير CO 2 تعتمد على نوع من ذبابة الفاكهة، مع د. pseudoobscura وD. subobscura يظهر أي أثر، في حين D. وكان الذكور البطن خفضت نجاح التزاوج. طريقة صبغ قدمت ينطبق على مجموعة واسعة من التصاميم التجريبية.

تجربتان التزاوج من الذكور - تأثير CO 2 التخدير على سلوك التزاوج أفضل نموذج جدت لشرح الاختلاف في تأثير CO 2 التخدير يتضمن الأنواع كعامل (مع D. pseudoobscura وD. subobscura تنصهر فيها لأنها أظهرت عدم وجود فروق بين بعضها البعض). في D. pseudoobscura وD. subobscura لم يكن هناك تأثير كبير من CO 2 التخدير على نجاح التزاوج في تجربتين الذكور (Z 1،589 = 0.087، P = 0.931). لD. البطن، كان الذكور يتعرضون لثاني 2 التخدير أقل بكثير نجاح التزاوج (Z1،589 = 2.467، P = 0.014). وكان هناك أيضا تفاعلا كبيرا بين الأنواع والعلاج (χ 2 = 1،589 6.83، P = 0.009) مع وجود تأثير أكبر عندما ينظر D. تعرض البطن إلى الغاز في جمع أو قبل المحاكمات (الجدول 1) 1 يوم. Howevإيه، D. الذكور البطن تتعرض لثاني قبل 2 يومين من المحاكمة التجريبية لم تظهر تأثير CO 2. تجربتان التزاوج من الذكور - تأثير التلوين الأمعاء على سلوك التزاوج أظهر نموذج تبسيط أي تأثير كبير من تلوين الطعام يتم العثور على أي من الأنواع الثلاثة (P&gt; 0.1). عندما أدرجت العلاج أو وضع الغاز في تحليل هذه كانت أيضا ليس كبيرا (P&gt; 0.1). وتظهر نسب التزاوج ناجحة لالذباب الملون عبر العلاجات في الجدول 2. والفرق في تلوين بين الذباب أبقى على الملونة ويمكن رؤية الطعام بغير لون في الشكل 1. وكانت شدة تلوين الطعام في الأمعاء أكبر في D. pseudoobscura وD. subobscura مما كان عليه في D. البطن. تجارب التزاوج واحدة - أثر استخدام CO 2 التخدير على مالسلوك أثناء التشغيل لم يكن هناك فرق في الكمون التزاوج لأي من الأنواع الثلاثة عندما تم استخدام CO 2 التخدير لجمع مؤخرا ظهرت البالغين. تم العثور على أثر لمدة التزاوج في D. subobscura عندما تعرضت لثاني قبل 2 يومين تجارب التزاوج (أرقام 2 و 3؛ الجدول 2). <img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> الشكل 1. صورة تظهر قوارير من الملونة وغير الملونة تحلق الأغذية (A) وقوة المعوية تلوين في ذكر D. Subobscura (B). <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> الشكل 2. متوسط ​​و 95٪ فترات الثقة عن الجماع الكمون لهذه الانواع الثلاثة التحقيق معهم في المحاكمات ذكر أعزب، عندما كان الذكور تخديرد (الحانات ضوء) أو لا مخدرة (القضبان السوداء) عندما يتم جمعها كما العذارى قبل النضج الجنسي. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> الشكل 3. متوسط ​​و 95٪ فترات ثقة لمدة الجماع لهذه الانواع الثلاثة التحقيق معهم في المحاكمات ذكر أعزب، عندما كانت مخدرة الذكور (الحانات ضوء) أو لا مخدرة (القضبان السوداء) عندما يتم جمعها كما العذارى قبل النضج الجنسي. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> علاج </td><td> نوع </td><td> رقم محاكمات </td><td> رقم الذباب الملونة التي تزاوج </td><td> ف القيمة </td><td> رقم الذباب بالغاز التي تزاوج </td><td> ف القيمة </td></tr><tr><td rowspan="3"> جمع على CO 2 </td><td> D. ميل </td><td> 73 </td><td> 36 </td><td> 1 </td><td> 27 </td><td> 0.0344 </td></tr><tr><td> D. سوق فلسطين </td><td>79 </td><td> 41 </td><td> 0.8221 </td><td> 44 </td><td> 0.3682 </td></tr><tr><td> D. الفرعية </td><td> 71 </td><td> 40 </td><td> 0.3425 </td><td> 33 </td><td> 0.6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> تتعرض لثاني 2 18 ساعة قبل </td><td> D. ميل </td><td> 57 </td><td> 28 </td><td> 1 </td><td> 19 </td><td> 0.0163 </td></tr><tr><td> D. سوق فلسطين </td><td> 65 </td><td> 32 </td><td> 1 </td><td> 31 </td><td> 0.8043 </td></tr><tr><td> D. الفرعية </td><td> 68 </td><td> 38 </td><td> 0.3961 </td><td> 35 </td><td> 0.9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> تتعرض لثاني 2 2DAYS. </td><td> D. ميل </td><td> 56 </td><td> 19 </td><td> 0.0222 </td><td> 32 </td><td> 0.3497 </td></tr><tr><td> D. سوق فلسطين </td><td> 70 </td><td> 32 </td><td> 0.5504 </td><td> 33 </td><td> 0.7202 </td></tr><tr><td> D. الفرعية </td><td> 56 </td><td> 29 </td><td> 0.8939 </td><td> 26 </td><td> 0.6889 &lt;/ td&gt; </tr></tbody></table> الجدول 1. نتائج تجربتين ذكر الاختيار عبر جميع أنواع العلاجات وفحصها. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> نوع </td><td> سمة </td><td> DF </td><td> تي القيمة </td><td> ف القيمة </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. البطن </td><td> كمون </td><td> 58 </td><td> 1.379 </td><td> 0،174 </td></tr><tr><td> مدة </td><td> 58 </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. pseudoobscura </td><td> كمون </td><td> 109 </td><td> 0.419 </td><td> 0،676 </td></tr><tr><td> مدة </td><td> 109 </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. subobscura </td><td> كمون </td><td> 83 </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td> مدة </td><td> 83 </td><td> 1،767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> . تم تنفيذ الجدول 2. النتائج من تجارب التزاوج واحدة فحص تأثير تجميع على CO 2 التخدير على التزاوج الكمون ومدة الاختبارات خارجا على ثلاثة أنواع من ذبابة الفاكهة (D. البطن، D. pseudoobscura وD. subobscura).

Watch this Scientific Journal Video about Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila at JoVE.com

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

الصباغة الحشرات لفحوصات السلوكية: في سلوك التزاوج من تخدير<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

dyeing-insects-for-behavioral-assays-mating-behavior-anesthetized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.7K Views.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Video: Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Studying the Neural Basis of Adaptive Locomotor Behavior in Insects

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those leg movements that result from passive forces and interactions with other legs through the common contact with the substrate. If we want to understand, which part of a given movement is produced by nervous system motor output, kinematic analysis of stepping movements, therefore, needs to be complemented with electrophysiological recordings of motor activity. The recording of neuronal or muscular activity in a behaving animal is often limited by the electrophysiological equipment which can constrain the animal in its ability to move with as many degrees of freedom as possible. This can either be avoided by using implantable electrodes and then having the animal move on a long tether (i.e. Clarac et al., 1987; Duch &amp; Pfl&uuml;ger, 1995; B&ouml;hm et al., 1997; Gruhn &amp; Rathmayer, 2002) or by transmitting the data using telemetric devices (Kutsch et al, 1993; Fischer et al., 1996; Tsuchida et al. 2004; Hama et al., 2007; Wang et al., 2008). Both of these elegant methods, which are successfully used in larger arthropods, often prove difficult to apply in smaller walking insects which either easily get entangled in the long tether or are hindered by the weight of the telemetric device and its batteries. In addition, in all these cases, it is still impossible to distinguish between the purely neuronal basis of locomotion and the effects exerted by mechanical coupling between the walking legs through the substrate. One solution for this problem is to conduct the experiments in a tethered animal that is free to walk in place and that is locally suspended, for example over a slippery surface, which effectively removes most ground contact mechanics. This has been used to study escape responses (Camhi and Nolen, 1981; Camhi and Levy, 1988), turning (Tryba and Ritzman, 2000a,b; Gruhn et al., 2009a), backward walking (Graham and Epstein, 1985) or changes in velocity (Gruhn et al., 2009b) and it allows the experimenter easily to combine intra- and extracellular physiology with kinematic analyses (Gruhn et al., 2006).
We use a slippery surface setup to investigate the timing of leg muscles in the behaving stick insect with respect to touch-down and lift-off under different behavioral paradigms such as straight forward and curved walking in intact and reduced preparations.

We describe a method to record motor activity, timed to the electrically recorded tarsal contact signal in a tethered insect, walking on a slippery surface. This is used to study the neural basis of adaptive behavior under reduced influence of mechanical interaction between legs through the substrate.

دراسة الأساس العصبي للسلوك الحركي التكيفية في الحشرات

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

في الجسم الحي Optogenetic تحفيز الجهاز العصبي المركزي القوارض

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

عالية الدقة الكمي للسلوك رائحة الموجهة في<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em&gt; استخدام<em&gt; Flywalk</em&gt; بارادايم

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

النسخ في والسلوكية الفحص لMechanosensation من MARCM المستندة<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

فحوصات لكشف الهياكل التي تعكس الأشعة فوق البنفسجية، وتحديد أهميتها في تفضيل ماتي باستخدام مولي شراعية الزعانف<em&gt; البكيللية latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

طريقة بسيطة لقياس التغيرات في السلوك المكافأة التماس طريق<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

الكمي للسلوك الاستمالة ذبابة الفاكهة

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...