The authors would like to acknowledge Dr. Paul Kubes for his guidance and mentoring that were central in the construction of this work.

ملاحظة: تم إجراء جميع التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية المؤسسية المحلية. 1. رسم الدم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من خلال venipucture الحفرة المرفقية وجمع 14 أنابيب من الدم من المتطوعين الأصحاء إلى أعلى الأخضر (heparinized) أنابيب وعكس كل أنبوب قبل أن يستقر على الجليد. جمع الدم من الداخل 10 - 15 دقيقة من التجربة لضمان الأمثل العائد العدلات. </li></ol> 2. عزل العدلات من الدم الكامل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل كل أنبوب كبار الأخضر من الدم مع 5 مل من PBS دون الكالسيوم والمغنيسيوم لتمييع الدم. في كل من 4 × 50 مل أنابيب مخروطية، إضافة 15 مل من وسائل الإعلام اللمفاويات فصل (LSM) في RT. باستخدام إبرة 18 G شنت على حقنة 60 مل، وطبقة بعناية الدم المخفف على LSM، وخلق واجهة LSM-الدم الحادة. ملاحظة: تجنب اختلاط الطبقات قدر الإمكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي في 800 x ج لمدة 30 دقيقة في 21 ° C دون انقطاع. ملاحظة: المفاجئة فواصل يمكنيسبب اختلاط الطبقات المختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الكريات الحمراء والعدلات الرواسب في القاع. نضح وتجاهل كبار 2 طبقات (البلازما وLSM) مع التأكد من التخلص من التفاعل بين هذه الطبقات التي تحتوي على الخلايا الليمفاوية وخلايا وحيدات النوى، ولم يتبق سوى طبقة حمراء أسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل أنبوب، إضافة 20 مل من الفوسفات عازلة المالحة (PBS) و 20 مل من 6٪ محلول دكستران. عكس بلطف كل أنبوب لخلط مع طبقة من كريات الدم الحمراء والعدلات والسماح للجلوس على RT لمدة 30 دقيقة. ملاحظة: هذا سيسمح خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) على الرسوبيات في الأسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة، ونقل العدلات طاف غنية في أنابيب جديدة والتخلص من الكريات RBC. supernatants أجهزة الطرد المركزي في 450 x ج في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. بعد الطرد المركزي، وتجاهل طاف. سيحتوي بيليه في الغالب العدلات وقلة كرات الدم الحمراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل الناشر بإضافة 0.5 مل من الناشر عازلة إلى 4.5 مل من الماء المعقم. ليز المتبقية RBC مع تيكان يستعد 5 مل من الناشر الحل، ونقل جميع الكريات معلق في أنبوب واحد. تسمح تحلل في RT في الظلام لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي في 450 x ج في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تجاهل طاف ويغسل بيليه مع 5 مل PBS دون الكالسيوم والمغنيسيوم وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى في 450 x ج في 4 درجات مئوية للتخلص من أي حل الناشر المتبقية. بيليه الحصول عليها في هذه المرحلة يحتوي على العدلات. Resuspend وبيليه في 30 مل من الباردة 3٪ RPMI وضعت على الجليد. ملاحظة: 3٪ يتم RPMI من خلال استكمال وسائل الاعلام RPMI مع 3٪ مصل بقري جنيني (FBS) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من نقاء العينة باستخدام الميثيلين الأزرق تلطيخ. &gt; يجب أن يكون 95٪ من الخلايا المحببة مع نوى متعددة فصي. استخدام التريبان تلطيخ الأزرق للتحقق من&gt; 95٪ قابلية الخلايا وحساب العائد العدلات النهائي. تمييع العدلات في الجليد الباردة 3٪ RPMI للحصول على التركيز النهائي من 5 × 10 6 العدلات / مل. </li></ol> 3. المستجدة الجيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحفيز العدلات مع 500 نM من سلطة النقد الفلسطينية (لكل 30 مل من محلول العدلات)، واحتضان على 150 خ 25mm الأنسجة مسطحة صحن الثقافة مع 20 مم الشبكة لمدة 4 ساعة عند 37 ° C 5٪ CO 2. وهذا سوف يسمح NETosis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 4 ساعات من التحفيز، نضح بلطف وتجاهل وسائل الإعلام، وترك طبقة من الشباك والعدلات الالتزام في الأسفل. لا تعطل هذه الطبقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ما مجموعه 15 مل من برنامج تلفزيوني الباردة دون الكالسيوم والمغنيسيوم في طبق، وغسل أسفل كل طبق قبل pipetting 15 مل من برنامج تلفزيوني على الجزء السفلي من الطبق من أجل رفع قبالة جميع المواد ملتصقة من القاع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الحل تم الحصول عليها من غسل كل طبق (الخطوة 3.3) في 15 مل أنبوب مخروطي الشكل وأجهزة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 450 x ج في 4 درجات مئوية. والعدلات وأي الخلايا المتبقية بيليه في الجزء السفلي، ترك-NET الغنية طاف خالية من الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفجوة طاف في 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الصغيرة وتدور لمدة 10 دقيقة في 18،000 x ج في 4 درجات مئوية. وهذا سوف يسمح كل DNA لتكوير. ملاحظة: الطرد المركزي في أكبر توبيز هي أسهل وأقل استهلاكا للوقت إذا كانت هذه السرعات العالية قابلة للتحقيق على أجهزة الطرد المركزي منتظم، وإلا سوف تحتاج إلى تقسيم supernatants في أنابيب أصغر من أجل استخدام سرعة عالية الصغير الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل طاف و resuspend جميع الكريات التي تم الحصول عليها معا في الجليد الباردة PBS إلى تركيز الموافق 2 × 10 7 العدلات لكل 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. هذا وسوف تسفر عن صافي الأسهم خالية من الخلايا التي يمكن استخدامها لتجارب لاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس تركيز الحمض النووي في العينة التي تم الحصول عليها باستخدام القياس الطيفي أو البديلة أداة القياس الكمي DNA. تركيز كاف في العينة أن يتراوح بين 140-180 نانوغرام / ميكرولتر. </li></ol> 4. NET-سرطان خلية ساكنة التصاق الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 ميكرولتر من NET الأسهم التي تم الحصول عليها سابقا لكل بئر في 96 المسطحة جيدا لوحة أسفل، والسماح لآبار معطف O / N عند 4 درجات مئوية في الظلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ما بين 12 و 20 ساعة في وقت لاحق، تحقق من تشكيل أحادي الطبقة موحدة للخليةالمستجدة مجانية في الجزء السفلي من الآبار تحت المجهر (الشكل 1). عند هذه النقطة، نضح بلطف جميع المواد غير ملتصقة من الآبار، والتأكد من عدم تعطيل أحادي الطبقة NET في الأسفل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 ميكرولتر من 1٪ الأبقار مصل الزلال (BSA) عرقلة الحل إلى كل بئر ويترك لمدة 1 ساعة عند RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الخلايا السرطانية A549 من T-75 قارورة من استخدام 2 مل من 0.25٪ التربسين الحل. مرة واحدة منفصلة، ​​إضافة 10 مل من وسائل الإعلام A549 إلى الخلايا trypsinized والطرد المركزي في 450 x ج في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تجاهل الخلايا وطاف resuspend في وسائل الإعلام للحصول على تركيز من 2 X10 4 الخلايا السرطانية لكل 100 ميكرولتر وسائل الإعلام. ملاحظة: ما نمت الخلايا A549 بشكل منفصل. باختصار، كانت الخلايا المستزرعة وحافظت في DMEM سائل الاعلام F12 تحتوي على 10٪ FBS و 1٪ البنسلين الستربتوميسين وحضنت عند 37 درجة مئوية 5٪ CO 2. مرة واحدة 70 - تم التوصل إلى 80٪ التقاء خلية، تم فصل أنهم باستخدام 0.25٪ التربسين-EDTA ومعلق في نفس وسائل الإعلامهو موضح أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا السرطانية وصمة عار باستخدام CFSE بإضافة 1 ميكرولتر من CFSE لكل مل من وسائل الإعلام وترك وصمة عار في RT لمدة 10 دقيقة. بعد تلطيخ، الطرد المركزي إلى أسفل في 450 x ج في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ثم تجاهل الخلايا وطاف resuspend في حجم الأولي من وسائل الإعلام للحصول على تركيز من 2 X10 4 الخلايا السرطانية لكل 100 ميكرولتر وسائل الإعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 ساعة والمستجدة حظر، بلطف نضح عرقلة الحل وإضافة 2 X10 4 خلايا السرطان في وسائل الإعلام، وهو ما يعادل 100 ميكرولتر، لكل بئر على الشبكة أحادي الطبقة والسماح لتنضم لمدة 90 دقيقة عند 37 ° C 5٪ CO 2. بلطف نضح الخلايا وإضافة 100 ميكرولتر من PBS إلى كل بئر لغسل أي خلايا غير ملتصقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في بعض الآبار، إضافة 1000U من DNAse1 لكل بئر لمدة 10 دقيقة قبل غسل للحط من الناموسيات. وهذا من شأنه السيطرة سلبية. في الآبار الأخرى، إضافة 100 ميكرولتر من الماء المعقم لكل بئر لمدة 10 دقيقة، والتي سوف تكون بمثابة السيطرة على السيارة (VC). ملاحظة: 3 تكرارات لكل شرطان عادة ما يتم القيام بها لزيادة حجم العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وتجاهل كل حل في الآبار ترك المستجدة الوحيدة والخلايا السرطانية ملتصقة في الأسفل. إضافة 100 ميكرولتر من 4٪ محلول الفورمالديهايد لكل بئر لإصلاح الخلايا السرطانية ملتصقة إلى NETS وقراءة الفحص تحت المجهر مضان (الشكل 1). مؤامرة وتحليل النتائج (الشكل 3). </li></ol>

<ol>
	<li>Saitoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+mediate+a+host+defense+response+to+human+immunodeficiency+virus-1.">Neutrophil extracellular traps mediate a host defense response to human immunodeficiency virus-1.</a> Cell Host Microbe. 12 (1), 109-116 (2012).</li><li>Bruns, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+extracellular+traps+against+Aspergillus+fumigatus+in+vitro+and+in+infected+lung+tissue+is+dependent+on+invading+neutrophils+and+influenced+by+hydrophobin+RodA.">Production of extracellular traps against Aspergillus fumigatus in vitro and in infected lung tissue is dependent on invading neutrophils and influenced by hydrophobin RodA.</a> PLoS Pathog. 6 (4), e1000873 (2010).</li><li>Brinkmann, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+kill+bacteria.">Neutrophil extracellular traps kill bacteria.</a> Science. 303 (5663), 1532-1535 (2004).</li><li>Papayannopoulos, V., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NETs:+a+new+strategy+for+using+old+weapons.">NETs: a new strategy for using old weapons.</a> Trends Immunol. 30 (11), 513-521 (2009).</li><li>McDonald, B., Urrutia, R., Yipp, B. G., Jenne, C. N., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+neutrophil+extracellular+traps+capture+bacteria+from+the+bloodstream+during+sepsis.">Intravascular neutrophil extracellular traps capture bacteria from the bloodstream during sepsis.</a> Cell Host Microbe. 12 (3), 324-333 (2012).</li><li>Pilsczek, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mechanism+of+rapid+nuclear+neutrophil+extracellular+trap+formation+in+response+to+Staphylococcus+aureus.">A novel mechanism of rapid nuclear neutrophil extracellular trap formation in response to Staphylococcus aureus.</a> J Immunol. 185 (12), 7413-7425 (2010).</li><li>Villanueva, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netting+neutrophils+induce+endothelial+damage,+infiltrate+tissues,+and+expose+immunostimulatory+molecules+in+systemic+lupus+erythematosus.">Netting neutrophils induce endothelial damage, infiltrate tissues, and expose immunostimulatory molecules in systemic lupus erythematosus.</a> J Immunol. 187 (1), 538-552 (2011).</li><li>Khandpur, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NETs+are+a+source+of+citrullinated+autoantigens+and+stimulate+inflammatory+responses+in+rheumatoid+arthritis.">NETs are a source of citrullinated autoantigens and stimulate inflammatory responses in rheumatoid arthritis.</a> Sci Transl Med. 5 (178), 178ra140 (2013).</li><li>Demers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancers+predispose+neutrophils+to+release+extracellular+DNA+traps+that+contribute+to+cancer-associated+thrombosis.">Cancers predispose neutrophils to release extracellular DNA traps that contribute to cancer-associated thrombosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (32), 13076-13081 (2012).</li><li>Hahn, S., Giaglis, S., Hoesli, I., Hasler, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+NETs+in+reproduction:+from+infertility+to+preeclampsia+and+the+possibility+of+fetal+loss.">Neutrophil NETs in reproduction: from infertility to preeclampsia and the possibility of fetal loss.</a> Front Immunol. 3, 362 (2012).</li><li>Cools-Lartigue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+sequester+circulating+tumor+cells+and+promote+metastasis.">Neutrophil extracellular traps sequester circulating tumor cells and promote metastasis.</a> J Clin Invest. , (2013).</li><li>Cools-Lartigue, J., Spicer, J., Najmeh, S., Ferri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+in+cancer+progression.">Neutrophil extracellular traps in cancer progression.</a> Cell Mol Life Sci. , (2014).</li><li>Brinkmann, V., Laube, B., Abu Abed, U., Goosmann, C., Zychlinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+how+to+generate+and+visualize+them.">Neutrophil extracellular traps: how to generate and visualize them.</a> J Vis Exp. (36), (2010).</li><li>Maqbool, M., Vidyadaran, S., George, E., Ramasamy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimisation+of+laboratory+procedures+for+isolating+human+peripheral+blood+derived+neutrophils.">Optimisation of laboratory procedures for isolating human peripheral blood derived neutrophils.</a> Med J Malaysia. 66 (4), 296-299 (2011).</li><li>Boyum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+lymphocytes,+granulocytes+and+macrophages.">Isolation of lymphocytes, granulocytes and macrophages.</a> Scand J Immunol. Suppl. 5, 9-15 (1976).</li><li>Calado, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+hormones,+acting+on+the+TERT+gene,+increase+telomerase+activity+in+human+primary+hematopoietic+cells.">Sex hormones, acting on the TERT gene, increase telomerase activity in human primary hematopoietic cells.</a> Blood. 114 (11), 2236-2243 (2009).</li><li>Zhong, C., Qu, X., Tan, M., Meng, Y. G., Ferrara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+regulation+of+bv8+in+human+blood+cells.">Characterization and regulation of bv8 in human blood cells.</a> Clin Cancer Res. 15 (8), 2675-2684 (2009).</li><li>Wu, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+leukocyte+labeling+with+intravenous+ferumoxides/protamine+sulfate+complex+and+in+vitro+characterization+for+cellular+magnetic+resonance+imaging.">In vivo leukocyte labeling with intravenous ferumoxides/protamine sulfate complex and in vitro characterization for cellular magnetic resonance imaging.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 293 (5), C1698-C1708 (2007).</li><li>Saffarzadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+directly+induce+epithelial+and+endothelial+cell+death:+a+predominant+role+of+histones.">Neutrophil extracellular traps directly induce epithelial and endothelial cell death: a predominant role of histones.</a> PLoS One. 7 (2), e32366 (2012).</li><li>Fuchs, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+cell+death+program+leads+to+neutrophil+extracellular+traps.">Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps.</a> J Cell Biol. 176 (2), 231-241 (2007).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما تكشف

وخارج الخلية العدلات بروتوكول فخ العزلة موضح في هذا الفيديو يجمع بين التقنيات المختلفة المستخدمة في الأدب لعزل العدلات وتشكيل NET. انه يبسط عملية معقدة إلى حد ما ومتغيرة، ويقدم وسيلة موثوق بها للغاية وقابلة للتكرار لعزل تنقية المستجدة خالية من الخلايا مع خطوات أقل من...

الفخاخ خارج الخلية العدلات (المستجدة) التي يتم اكتشافها حديثا العناصر المستمدة من العدلات تتكون من خيوط من الحمض النووي خارج الخلية زينت بها المئات من البروتينات والهستونات. ويفرز من قبل العدلات في سياق العدوى والالتهابات التالية منبهات محددة وكانوا مبدئيا أن تكون جزءا من آليات الدفاع في العدلات ضد الالتهابات. وظهر لأول مرة لتعزيز محاصرة من مختلف الميكروبات الغازية بما في ذلك البكتيريا والفيروسات والفطريات 1-3. سوف محاصرة من الميكروب ثم تؤدي إلى تدميرها بشكل مباشر عن طريق البروتينات المرتبطة NET 3،4 وبشكل غير مباشر من خلال التوظيف المحلي من الخلايا البلعمية 5،6. ولكن لا يبدو أن دور شبكات تقتصر على استضافة الدفاع. وفي الآونة الأخيرة، فقد ثبت أنها تلعب دورا مهما في أمراض المناعة الذاتية 7،8، 9 الجلطة، واضطرابات مرتبطة بالحمل 10 وحتى تطور سرطان11،12. وفقا لذلك، يبدو أن المستجدة تلعب دورا هاما في عدد كبير من العمليات الفسيولوجية المختلفة. ومع ذلك، نظرا لطبيعة الرواية من هذه البحوث، لا يزال هناك الكثير ليتم توضيح فيما يتعلق الآليات التي المستجدة تمارس تأثيراتها. هنا، نقدم طريقة مبسطة لعزل الشباك في غياب العدلات. في الفيديو التالي، ونحن لشرح تقنية مبسطة وسهلة لعزل المستجدة من الدم الكامل البشري. ويمكن بعد ذلك المستجدة خالية من الخلايا يمكن استخدامها في عدد من التجارب في المختبر بما في ذلك تلطيخ، imuunofluorescence، النشاف وكذلك عدد من فحوصات مثل التصاق، والانتشار والهجرة. غيرها من البروتوكولات وجود 13 و 19، إلا أنها عادة ما تكون طويلة ومعقدة، ومكلفة، وغالبا، العائد المنخفض 13. يستخدم هذا البروتوكول المبسط الكواشف الأساسية ويقلل من عدد من الخطوات المطلوبة لعزل العدلات، وبالتالي التقليل من طول proceduإعادة مع تعظيم العائد. يجمع بين الأسلوب التالي تقنيات مختلفة لالعدلات العزلة وصف سابقا في الأدب للحصول على بروتوكول بسيط مما أسفر عن عينة نقية جدا من العدلات الحية. كما اقترح في الأدب، ويتم جمع الدم الوريدي في أنابيب EDTA واستخدامها في غضون 10 دقيقة لتجنب تفعيل العدلات 14. نحن نستخدم الخلايا الليمفاوية فصل وسائل الإعلام (LSM) التدرج الكثافة الطرد المركزي لعزل المحببة وخلايا الدم الحمراء من الدم الكامل heparinized، وهي طريقة مقتبسة من Ficoll تقنية الكثافة الطرد المركزي وصفها في البداية من قبل Boyum وآخرون 15. LSM هو تعديل للصياغة Boyum أن يستبدل دياتريزوات الصوديوم لمتريزوات الصوديوم واستخدمت بنجاح في العديد من الدراسات لعزل العدلات 16-18. وبعد كثافة التفاضلية الطرد المركزي، وتجاهل وحيدات الخلايا اللمفية. والرسوبية خلايا الدم الحمراء ثمباستخدام 6٪ ديكستران حل 14 وهي lysed في كرات الدم الحمراء المتبقية للحصول على سكان العدلات النقية، والتي يتم التحقق منها مع التريبان الأزرق والميثيلين الأزرق تلطيخ. وقد استخدمت العديد من وكلاء للحث على NETosis سواء في التجارب المختبرية والحية، بما في ذلك lipopolysaccharide في (LPS)، وphorbol ميريستات خلات (PMA) والمحفزة (IL-8) 3،5،6. في بروتوكول التالية، يتم تحفيز العدلات معزولة مع 500 نيوتن متر سلطة النقد الفلسطينية لمدة 4 ساعة، وهو ما ثبت أن يكون تركيز كاف للسماح NET تشكيل ثابت وموثوق بها من دون تعزيز موت الخلايا المبرمج 19،20. بعد العزلة، وعلينا أن نظهر كيف يمكن استخدام الناموسيات خالية من الخلايا التي تم الحصول عليها من هذا البروتوكول في مقايسة التصاق. يستخدم DNAse1 الهضم وتتحلل المستجدة كما هو موضح سابقا، ويعمل كعنصر تحكم 2،3،11 الآن. وتشمل الخيارات الأخرى استخدام العدلات الإيلاستاز المانع (ني) لمنع NET formatiعلى الذي هو بديل مقبول عندما يكون الهدف هو لمنع تشكيل NET بدلا من إحداث تدهورها 11. وعلى الرغم من ني لديها عدد من الوظائف المتنوعة، فقد ثبت سابقا أن صافي ترسب يمكن مستعمل من قبل نيي من خلال انسداد decondensation لونين، تحبب النووي والعدلة وفاة 12

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="983">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:75px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:573px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline (PBS), Modified, without calcium chloride and magnesium chloride</td>
			<td style="width:75px;">Wisent</td>
			<td style="width:119px;">311-425-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Lymphocyte Separation Medium (LSM)</td>
			<td style="width:75px;">Wisent</td>
			<td style="width:119px;">305-010-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dextran hydrochloride (powder)</td>
			<td style="width:75px;">Spectrum</td>
			<td style="width:119px;">DE130</td>
			<td>6% Dextran solution is made by supplementing PBS with Ca and Mg with 6% Dextran powder</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">RPMI-1640 Medium with L-glutamine</td>
			<td style="width:75px;">Wisent</td>
			<td style="width:119px;">350-000-CL</td>
			<td>3% RPMI solution is made by supplementing RPMI with 3% Fetal Bovine serum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">BD Pharm Lyse Lysing buffer</td>
			<td style="width:75px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">555899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td style="width:75px;">Sigma-Alrdrich</td>
			<td style="width:119px;">P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNAse1</td>
			<td>Roche</td>
			<td style="width:119px;">11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">F12 DMEM</td>
			<td style="width:75px;">Wisent</td>
			<td style="width:119px;">319-075-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:75px;">Wisent</td>
			<td style="width:119px;">080-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:75px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CFSE</td>
			<td style="width:75px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:75px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Integrid tissue culture dish with 20mm grid (150 x 25mm)</td>
			<td style="width:75px;">Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353025</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simplified human neutrophil extracellular traps (nets) isolation and handling

الفخاخ خارج الخلية العدلات (المستجدة) تم تحديدها مؤخرا كجزء من عتاد المضادة للميكروبات والعدلة و. وبصرف النظر عن دورهم في محاربة الالتهابات، وقد أثبتت البحوث التي أجريت مؤخرا أنها قد تشارك في العديد من العمليات أمراض أخرى، بما في ذلك تطور السرطان. عزل المستجدة تنقية يشكل عنصرا حاسما للسماح دراسة هذه الوظائف. في هذا الفيديو، ونحن لشرح طريقة مبسطة من خلية NET المجانية بمعزل عن الدم كله البشري باستخدام الكواشف متاحة بسهولة. ويمكن بعد ذلك المستجدة المعزولة أن تستخدم لتلطيخ المناعي، النشاف أو مختلف المقايسات الفنية. وهذا يتيح إجراء تقييم لخصائصها البيولوجية في غياب آثار الخلط المحتملة العدلات أنفسهم. ويعمل كثافة تقنية فصل التدرج لعزل العدلات من متبرع سليم الدم الكامل. ثم يتم تحفيز العدلات معزولة من قبل phorbol 12 MYRistate 13-خلات (PMA) للحث على NETosis. ثم يتم التخلص منها العدلات المنشط، ويتم الحصول على صافي الأسهم خالية من الخلايا. نحن بعد ذلك شرح كيفية المستجدة معزولة يمكن استخدامها في مقايسة التصاق مع خلايا سرطان الرئة A549 الإنسان. يتم استخدام الأسهم NET إلى معطف الآبار من 96 بئر زراعة الخلايا لوحة O / N، وبعد ضمان تشكيل أحادي الطبقة NET كاف على الجزء السفلي من الآبار، وصفت CFSE الخلايا A549 تضاف. الخلايا الملتصقة وكميا باستخدام مجهر فلوري نيكون TE300. في بعض الآبار، يضاف 1000U DNAse1 10 دقيقة قبل عد أن تتحلل المستجدة

الإنجاز الناجح لالتصاق الفحص ثابت مع المستجدة يتطلب طلاء كافية من الآبار مع أحادي الطبقة والمستجدة قبل إضافة الخلايا السرطانية (الشكل 1). يجب أن تتم جميع الخطوات اللاحقة مع الحرص على عدم تعطيل تلك الطبقة. عندما يتم تشكيل طبقة كافية من الشباك، فمن المتوقع أن ن...

Watch this Scientific Journal Video about Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps NETs Isolation and Handling at JoVE.com

Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps NETs Isolation and Handling

في بروتوكول التالية، ونحن تصف طريقة بسيطة جدا لعزل الفخاخ خارج الخلية العدلات (المستجدة) من الدم الكامل البشري باستخدام الكواشف متاحة بسهولة. نحن ثم إظهار كيف يمكن استخدام شبكات معزولة في المختبر في التصاق مقايسة مع الخلايا السرطانية.

المبسطة الإنسان الفخاخ خارج الخلية العدلات (المستجدة) عزل والمناولة

Neutrophil Extracellular Traps (NETs) have been recently identified as part of the neutrophil&#8217;s antimicrobial armamentarium. Apart from their role ...

simplified-human-neutrophil-extracellular-traps-nets-isolation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps (NETs) Isolation and Handling

29.5K Views.  McGill University.  في بروتوكول التالية، ونحن تصف طريقة بسيطة جدا لعزل الفخاخ خارج الخلية العدلات (المستجدة) من الدم الكامل البشري باستخدام الكواشف متاحة بسهولة. نحن ثم إظهار كيف يمكن استخدام شبكات معزولة في المختبر في التصاق مقايسة مع الخلايا السرطانية...

Video: Simplified Human Neutrophil Extracellular Traps NETs Isolation and Handling

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them intracellularly when their antimicrobial granules fuse with the phagosome. We found that neutrophils have an additional way of killing microorganisms: upon activation, they release granule proteins and chromatin that together form extracellular fibers that bind pathogens. These novel structures, or Neutrophil Extracellular Traps (NETs), degrade virulence factors and kill bacteria1, fungi2 and parasites3. The structural backbone of NETs is DNA, and they are quickly degraded in the presence of DNases. Thus, bacteria expressing DNases are more virulent4. Using correlative microscopy combining TEM, SEM, immunofluorescence and live cell imaging techniques, we could show that upon stimulation, the nuclei of neutrophils lose their shape and the eu- and heterochromatin homogenize. Later, the nuclear envelope and the granule membranes disintegrate allowing the mixing of NET components. Finally, the NETs are released as the cell membrane breaks. This cell death program (NETosis) is distinct from apoptosis and necrosis and depends on the generation of Reactive Oxygen Species by NADPH oxidase5. 
Neutrophil extracellular traps are abundant at sites of acute inflammation. NETs appear to be a form of innate immune response that bind microorganisms, prevent them from spreading, and ensure a high local concentration of antimicrobial agents to degrade virulence factors and kill pathogens thus allowing neutrophils to fulfill their antimicrobial function even beyond their life span. There is increasing evidence, however, that NETs are also involved in diseases that range from auto-immune syndromes to infertility6.
We describe methods to isolate Neutrophil Granulocytes from peripheral human blood7 and stimulate them to form NETs. Also we include protocols to visualize the NETs in light and electron microscopy.

Neutrophil Extracellular Traps (NETs) are an important innate immune mechanism to fight pathogenic bacteria, fungi and parasites. Here we describe methods to isolate neutrophil granulocytes from human blood and to activate them to form NETs. We present preparation techniques to visualize NETs in light and electron microscopy.

الفخاخ خارج الخلية العدلات : كيفية إنشاء وتصور لهم

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of lipids. The function of lipids (e.g., in host-pathogen interactions or host entry) has been reported to play a crucial role in cellular processes. Here, we show a method to determine lipid composition, with a focus on the cholesterol level of primary blood-derived neutrophils, by HPTLC in comparison to high performance liquid chromatography (HPLC). The aim was to investigate the role of lipid/cholesterol alterations in the formation of neutrophil extracellular traps (NETs). NET release is known as a host defense mechanism to prevent pathogens from spreading within the host. Therefore, blood-derived human neutrophils were treated with methyl-&#946;-cyclodextrin (M&#946;CD) to induce lipid alterations in the cells. Using HPTLC and HPLC, we have shown that M&#946;CD treatment of the cells leads to lipid alterations associated with a significant reduction in the cholesterol content of the cell. At the same time, M&#946;CD treatment of the neutrophils led to the formation of NETs, as shown by immunofluorescence microscopy. In summary, here we present a detailed method to study lipid alterations in neutrophils and the formation of NETs.

Lipids are known to play an important role in cellular functions. Here, we describe a method to determine the lipid composition of neutrophils, with emphasis on the cholesterol level, by using both HPTLC and HPLC to gain a better understanding of the underlying mechanisms of neutrophil extracellular trap formation.

طرق لدراسة الدهون التعديلات في العدلات وتشكيل لاحقة من الفخاخ خارج الخلية العدلات

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal microscopy methods to visualize macrophage extracellular traps (METs). These extracellular traps are defined by the presence of extracellular chromatin with co-expression of other components such as granule proteases, citrullinated histones, and peptidyl arginase deiminase (PAD). The expression of METs is generally measured after exposure to a stimulus and compared to un-stimulated samples. Samples are also included for background and isotype control. Cells are analyzed using well-defined image analysis software. Confocal microscopy may be used to define the presence of METs both in vitro and in vivo in lung tissue.

Macrophage extracellular traps are a newly described entity. This article will concentrate on confocal microscopy methods and how they are visualized in vitro and in vivo from lung samples.

تصور بلعم الفخاخ خارج الخلية باستخدام المجهر [كنفوكل]

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Automated Image-Based Quantification of Neutrophil Extracellular Traps Using NETQUANT

Neutrophil extracellular traps (NETs) are web-like antimicrobial structures consisting of DNA and granule derived antimicrobial proteins. Immunofluorescence microscopy and image-based quantification methods remain important tools to quantitate neutrophil extracellular trap formation. However, there are key limitations to the immunofluorescence-based methods that are currently available for quantifying NETs. Manual methods of image-based NET quantification are often subjective, prone to error and tedious for users, especially non-experienced users. Also, presently available software options for quantification are either semi-automatic or require training prior to operation. Here, we demonstrate the implementation of an automated immunofluorescence-based image quantification method to evaluate NET formation called NETQUANT. The software is easy to use and has a user-friendly graphical user interface (GUI). It considers biologically relevant parameters such as an increase in the surface area and DNA:NET marker protein ratio, and nuclear deformation to define NET formation. Furthermore, this tool is built as a freely available app, and allows for single-cell resolution quantification and analysis.

Here, we present a protocol for generating neutrophil extracellular traps (NETs) and operating NETQUANT, a fully automatic software option for quantification of NETs in immunofluorescence images.

التلقائي القائم علي الصورة الكمية من الفخاخ العدلات خارج الخلية باستخدام NETQUANT

Neutrophil extracellular traps (NETs) are web-like antimicrobial structures consisting of DNA and granule derived antimicrobial proteins. ...

Identification of Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Feline Arterial Thrombi using Immunofluorescence Microscopy

Neutrophil extracellular traps (NETs), composed of cell-free DNA (cfDNA) and proteins like histones and neutrophil elastase (NE), are released by neutrophils in response to systemic inflammation or pathogens. Although NETs have previously been shown to augment clot formation and inhibit fibrinolysis in humans and dogs, the role of NETs in cats with cardiogenic arterial thromboembolism (CATE), a life-threatening complication secondary to hypertrophic cardiomyopathy, is unknown. A standardized method to identify and quantify NETs in cardiogenic arterial thrombi in cats will advance our understanding of their pathological role in CATE. Here, we describe a technique to identify NETs in formaldehyde-fixed and paraffin-embedded thrombi within the aortic bifurcation, extracted during necropsy. Following deparaffinization with xylene, aortic sections underwent indirect heat-induced antigen retrieval. Sections were then blocked, permeabilized, and ex vivo NETs were identified by colocalization of cell-free DNA (cfDNA), citrullinated histone H3 (citH3), and neutrophil elastase (NE) using immunofluorescence microscopy. To optimize the immunodetection of NETs in thrombi, autofluorescence of tissue elements was limited by using an autofluorescence quenching process prior to microscopy. This technique could be a useful tool to study NETs and thrombosis in other species and offers new insights into the pathophysiology of this complex condition.

We describe a method to identify neutrophil extracellular traps (NETs) in formaldehyde-fixed and paraffin-embedded feline cardiogenic arterial thrombi using heat-induced antigen retrieval and a double immunolabeling protocol.

تحديد الفخاخ نيوتروفيل خارج الخلية في البارافين جزءا لا يتجزأ من الخيط الشرياني Thrombi باستخدام المجهر Immunofluorescence

Neutrophil extracellular traps (NETs), composed of cell-free DNA (cfDNA) and proteins like histones and neutrophil elastase (NE), are released by ...

Morphological and Compositional Analysis of Neutrophil Extracellular Traps Induced by Microbial and Chemical Stimuli

Neutrophils function as the first line of cellular defense in an innate immune response by employing diverse mechanisms, such as the formation of neutrophil extracellular traps (NETs). This study analyzes the morphological and compositional changes in NETs induced by microbial and chemical stimuli using standardized in vitro methodologies for NET induction and characterization with human cells. The procedures described here allow the analysis of NET morphology (lytic or non-lytic) and composition (DNA-protein structures and enzymatic activity), and the effect of soluble factors or cellular contact on such characteristics. Additionally, the techniques described here could be modified to evaluate the effect of exogenous soluble factors or cellular contact on NET composition.
The applied techniques include the purification of polymorphonuclear cells from human peripheral blood using a double density gradient (1.079-1.098 g/mL), guaranteeing optimal purity and viability (&#8805; 95%) as demonstrated by Wright's staining, trypan blue exclusion, and flow cytometry, including FSC versus SSC analysis and 7AAD staining. NET formation is induced with microbial (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, and Candida albicans) and chemical (phorbol myristate acetate, HOCl) stimuli, and the NETs are characterized by DNA-DAPI staining, immunostaining for the antimicrobial peptide cathelicidin (LL37), and quantification of enzymatic activity (neutrophil elastase, cathepsin G, and myeloperoxidase). The images are acquired through fluorescence microscopy and analyzed with ImageJ.

Presented here is a protocol for the induction and analysis of in vitro neutrophil extracellular traps (NETs). Quantification of DNA, cathelicidin (LL37), and enzyme activity yielded data that show the variability in the composition and morphology of NETs induced by microbial and chemical stimuli under similar controlled conditions.

التحليل المورفولوجي والتركيبي لمصائد العدلات خارج الخلية التي تسببها المحفزات الميكروبية والكيميائية

Neutrophils function as the first line of cellular defense in an innate immune response by employing diverse mechanisms, such as the formation of ...

Quantifying Myeloperoxidase-DNA and Neutrophil Elastase-DNA Complexes from Neutrophil Extracellular Traps by Using a Modified Sandwich ELISA

Certain stimuli, such as microorganisms, cause neutrophils to release neutrophil extracellular traps (NETs), which are basically web-like structures composed of DNA with granule proteins, such as myeloperoxidase (MPO) and neutrophil elastase (NE), and cytoplasmic and cytoskeletal proteins. Although interest in NETs has increased recently, no sensitive, reliable assay method is available for measuring NETs in clinical settings. This article describes a modified sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to quantitatively measure two components of circulating NETs, MPO-DNA and NE-DNA complexes, which are specific components of NETs and are released into the extracellular space as breakdown products of NETs. The assay uses specific monoclonal antibodies for MPO or NE as the capture antibodies and a DNA-specific detection antibody. MPO or NE binds to one site of the capture antibody during the initial incubation of samples containing MPO-DNA or NE-DNA complexes. This assay shows good linearity and high inter-assay and intra-assay precision. We used it in 16 patients with COVID-19 with accompanying acute respiratory distress syndrome and found that the plasma concentrations of MPO-DNA and NE-DNA were significantly higher than in the plasma obtained from healthy controls. This detection assay is a reliable, highly sensitive, and useful method for investigating the characteristics of NETs in human plasma and culture supernatants.

We present a protocol for a modified sandwich enzyme-linked immunosorbent assay technique to quantitatively measure two components of neutrophil extracellular trap remnants, myeloperoxidase conjugated-DNA and neutrophil elastase conjugated-DNA complexes,derived from activated neutrophils.

القياس الكمي لمعقدات الميلوبيروكسيديز - الحمض النووي و Neutrophil Elastase-DNA من مصائد العدلات خارج الخلية باستخدام شطيرة ELISA المعدلة

Certain stimuli, such as microorganisms, cause neutrophils to release neutrophil extracellular traps (NETs), which are basically web-like structures ...

تلطيخ والتصوير لتصور مصائد العدلات خارج الخلية

Immunofluorescence Imaging of Neutrophil Extracellular Traps in Human and Mouse Tissues

Neutrophil extracellular traps (NETs) are released by neutrophils as a response to bacterial infection or traumatic tissue damage but also play a role in autoimmune diseases and sterile inflammation. They are web-like structures composed of double-stranded DNA filaments, histones, and antimicrobial proteins. Once released, NETs can trap and kill extracellular pathogens in blood and tissue. Furthermore, NETs participate in homeostatic regulation by stimulating platelet adhesion and coagulation. However, the dysregulated production of NETs has also been associated with various diseases, including sepsis or autoimmune disorders, which makes them a promising target for therapeutic intervention. Apart from electron microscopy, visualizing NETs using immunofluorescence imaging is currently one of the only known methods to demonstrate NET interactions in tissue. Therefore, various staining methods to visualize NETs have been utilized. In the literature, different staining protocols are described, and we identified four key components showing high variability between protocols: (1) the types of antibodies used, (2) the usage of autofluorescence-reducing agents, (3) antigen retrieval methods, and (4) permeabilization. Therefore, in vitro immunofluorescence staining protocols were systemically adapted and improved in this work to make them applicable for different species (mouse, human) and tissues (skin, intestine, lung, liver, heart, spinal disc). After fixation and paraffin-embedding, 3 &#181;m thick sections were mounted onto slides. These samples were stained with primary antibodies for myeloperoxidase (MPO), citrullinated histone H3 (H3cit), and neutrophil elastase (NE) according to a modified staining protocol. The slides were stained with secondary antibodies and examined using a widefield fluorescence microscope. The results were analyzed according to an evaluation sheet, and differences were recorded semi-quantitatively.
Here, we present an optimized NET staining protocol suitable for different tissues. We used a novel primary antibody to stain for H3cit and reduced non-specific staining with an autofluorescence-reducing agent. Furthermore, we demonstrated that NET staining requires a constant high temperature and careful handling of samples.

تسليط الضوء على المؤلف: تصوير مصائد العدلات خارج الخلية في الأنسجة البشرية والفأر 

Neutrophil extracellular traps (NETs) are associated with various diseases, and immunofluorescence is often used for their visualization. However, there are various staining protocols, and, in many cases, only one type of tissue is examined. Here, we establish a generally applicable protocol for staining NETs in mouse and human tissue.

التصوير المناعي لمصائد العدلات خارج الخلية في الأنسجة البشرية والفأر

Neutrophil extracellular traps (NETs) are released by neutrophils as a response to bacterial infection or traumatic tissue damage but also play a role in ...