وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منحة، R01 AG033620 (BG) وروبرت دريبر التكنولوجيا والابتكار التمويل (شعبة النهوض بالمرأة).

1. بناء على HIT الأجهزة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق الربيع لمجلس باستخدام اثنين من المشابك وأربعة مسامير (الشكل 1A). توسيط المشابك النسبية لعرض لوحة وبعقب لهم حتى ضد بعضهم البعض مع تدفق المشبك الخارجي مع حافة الرقعة. قبل ربط المشابك، والانحناء لهم باستخدام كماشة لتناسب محكم خلال فصل الربيع. ملاحظة: انظر الجدول رقم 1 لأوصاف المواد اللازمة لبناء الجهاز HIT. وينبغي أن تكون نهاية فرضت الربيع 1/8 بوصة (3.2 مم) من حافة الرقعة، ونهاية خالية ينبغي أن تمتد على المجلس من خلال 3/4 بوصة (19 مم). ضبط الربيع بحيث انها تقع بالتوازي مع طول اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التفاف نهاية خالية من الربيع مرة واحدة حولها مع شريط لاصق من الحلقات الفيلكرو. يجب أن يكون الطرف الخارجي للحافة الفيلكرو مطاردة مع نهاية فصل الربيع. الفيلكرو مهم لأنه يستخدم لتأمين القارورة لفصل الربيع من قبل لجنة المساواة العرقيةأثناء التشغيل ضغط ضيقة. كما يسمح الفيلكرو اتصال سهلة وإزالة قارورة، مما يتيح العديد من قارورة بحيث تتم معالجتها في فترة قصيرة من الزمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع غطاء دلو الجليد رأسا على عقب، تركز، مشددة على لوح خشبي. توجيه المنطقة رفعت الغطاء دلو الثلج بحيث الحافة الطويلة موازية للعرض اللوحة. نلاحظ أن المنطقة التي أثيرت من دلو الجليد 1/2 بوصة (13 مم) أعلى من لوح خشبي، بحيث عندما يتم إرفاق قارورة لربيع وربيع لا الاستلقاء على متن الطائرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرك الجهاز كله ضد كائن ثابت مثل جدار، حتى أن غطاء الجليد دلو تنحصر بين مجلس الإدارة والكائن ولا يتحرك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشريط المنقلة ورقة في الجزء السفلي من الورق المقوى يطير علبة قنينة والوقوف على حافة مقابل طول اللوح بحيث يتم محاذاة علامة 90 درجة مع فصل الربيع عندما يتم سحبها مرة أخرى إلى الوضع الرأسي تماما. </li></ol> 2.تشغيل جهاز HIT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الفترة ما بين 1 و 60 CO 2 -anesthetized الذباب في قنينة فارغة وسدادة القنينة باستخدام القطن الكرة ضيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصر الذباب إلى أسفل 1 بوصة (2.5 سم) من القارورة عن طريق دفع الكرة القطن في قارورة حتى يتم 1 بوصة (2.5 سم) من القاع. ومن المفيد لرسم خط على القارورة عند علامة 1 بوصة (2.5 سم). لاحظ أن حصر الذباب إلى مناطق أكبر أو أصغر من القارورة يمكن أن تؤثر على شدة الظواهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار 5 دقائق لالذباب لاسترداد التنقل من CO 2. لاحظ أنه من غير المعروف ما إذا كانت 5 دقائق كافية تماما لإزالة آثار CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج نهاية الربيع في قارورة حتى الحافة الداخلية من الفيلكرو هو مطاردة مع الجزء العلوي من القنينة (الشكل 1B). عندما الربيع هو الاستلقاء، يجب أن 1 بوصة (2.5 سم) من القارورة تتداخل المنطقة رفعت الغطاء دلو الجليد. قارورة يمكن إعادة استخدامها مفي اي وقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أثناء الجلوس، عقد القارورة في المنطقة الفيلكرو باستخدام الإبهام والسبابة من اليد اليسرى. عقد مجلس مشددة لالفوق باستخدام يدك اليمنى. بدلا من ذلك، استخدم C-المشابك لعقد مجلس مشددة لالفوق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الربيع تماما مباشرة إلى زاوية المرجوة. الافراج عن الربيع. السماح الربيع للتوصل إلى وقف كامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة قارورة من فصل الربيع، والسماح للذباب لاستعادة ل≥5 دقيقة. إخضاع الذباب إلى إضراب آخر أو نقل الذباب إلى قارورة مع ذبابة الغذاء. ملاحظة: مجموعة متنوعة من فحوصات يمكن استخدامها لتقييم آثار المظهرية لضربات من الجهاز HIT. على سبيل المثال، يمكن تحديد الآثار المترتبة على طول العمر من خلال تحليل المئة من الذباب التي تعيش في بعض الأحيان بعد الإصابة، يمكن تحديد آثارها على بنية الدماغ عن طريق التحليل النسيجي للرئيس، ويمكن تحديد الآثار المترتبة على التعبير الجيني عن طريق التحليل الكمي لمستويات مرنا 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Determinالآثار (ه) من الإجراء الذي لا بسبب الإضرابات عن طريق علاج مماثل الذباب التحكم التي لا تخضع للضربات. ارتداء حماية السمع بسبب تأثير القارورة ضد غطاء دلو الجليد تنتج ضوضاء عالية. </li></ol>

<ol>
	<li>Harrison-Felix, C. L., Whiteneck, G. G., Jha, A., DeVivo, M. J., Hammond, F. M., Hart, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+over+four+decades+after+traumatic+brain+injury+rehabilitation:+A+retrospective+cohort+study.">Mortality over four decades after traumatic brain injury rehabilitation: A retrospective cohort study.</a> Arch Phys Med Rehabil. 90, 1506-1513 (2009).</li><li>Coronado, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+for+traumatic+brain+injury-related+deaths+&#8211;+United+States.">Surveillance for traumatic brain injury-related deaths &#8211; United States.</a> MMWR Surveill Summ. 60, 1-32 (1997).</li><li>Masel, B., DeWitt, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+brain+injury:+A+disease+process,+not+an+event.">Traumatic brain injury: A disease process, not an event.</a> J. Neurotrauma. 27, 1529-1540 (2010).</li><li>Blennow, K., Hardy, J., Zetterberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuropathology+and+neurobiology+of+traumatic+brain+injury.">The neuropathology and neurobiology of traumatic brain injury.</a> Neuron. 76, 886-899 (2012).</li><li>Prins, M., Greco, T., Alexander, D., Giza, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+traumatic+brain+injury+at+a+glance.">The pathophysiology of traumatic brain injury at a glance.</a> Disease Models Mech. 6, 1307-1315 (2013).</li><li>Menon, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+challenges+in+clinical+trails+in+traumatic+brain+injury.">Unique challenges in clinical trails in traumatic brain injury.</a> Crit Care Med. 37, S129-S135 (2009).</li><li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+traumatic+brain+injury.">Animal models of traumatic brain injury.</a> Nature Rev Neurosci. 14, 128-142 (2013).</li><li>Balsiger, Z., Leudkte, J., Mawer, S., Willey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> HIT device high speed analysis. , (2014).</li><li>Davceva, N., Janevska, V., Illevski, B., Petrushevska, G., Popeska, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+occurrence+of+acute+subdural+haematoma+and+diffuse+axonal+injury+as+two+typical+acceleration+injuries.">The occurrence of acute subdural haematoma and diffuse axonal injury as two typical acceleration injuries.</a> J Forensic Leg Med. 19, 480-484 (2012).</li><li>Katzenberger, R. J., Loewen, C. A., Wassarman, D. R., Petersen, A. J., Ganetzky, B., Wassarman , D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila.+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury.">A Drosophila. model of closed head traumatic brain injury.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 110, E4152-E4159 (2013).</li><li>Fang, Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+degeneration+and+regeneration:+insights+from+Drosophila+.models+of+nerve+injury.">Axon degeneration and regeneration: insights from Drosophila .models of nerve injury.</a> Annu Rev Cell Biol. 28, 575-597 (2012).</li><li>Babcock, D. T., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+accurate+and+rapid+measurement+of+flight+performance+in+Drosophila.">An improved method for accurate and rapid measurement of flight performance in Drosophila.</a> J Vis Exp. (84), e51223 (2014).</li><li>Tully, T., Preat, T., Boynton, S. C., Vecchio, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila.">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li><li>Andretic, R., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essentials+of+sleep+recordings+in+Drosophila.:+moving+beyond+sleep+time.">Essentials of sleep recordings in Drosophila.: moving beyond sleep time.</a> Methods Enzymol. 393, 759-772 (2005).</li></ol>

ليس لدينا أي تضارب في المصالح في الكشف عنها.

ويتميز أسلوب جهاز HIT من الطرق الأخرى التي تسبب الإصابة المؤلمة في الذباب من حقيقة أنه يسبب رئيس مغلقة بدلا من اختراق TBI 11. وعلاوة على ذلك، فإن هذه الطريقة جهاز HIT يأخذ أقل الوقت والجهد والمهارة لإلحاق TBI في كثير من الذباب، لذلك فإن هذه الطريقة أكثر استعدادا من الأ?...

An author's name was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila</a>. The second to last author's was spelled incorrectly. It has been updated from:
Barry Ganetky
to:
Barry Ganetzky

An author's name was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila</a>.

Erratum: A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

يتم تعريف إصابات في الدماغ (TBI) كما إصابة في الدماغ من قوة ميكانيكية الخارجية. الأكثر شيوعا، ونتائج المصرف التجاري العراقي من القوات الرأس المغلقة مثل قوات حادة وتسارع بالقصور الذاتي وقوات التباطؤ الذي تسبب في الدماغ لضرب داخل الجمجمة. في الولايات المتحدة، يقدر أن 50،000 الأفراد يموتون سنويا من TBI و2،5-6٬500٬000 الأفراد الذين يعيشون مع عواقب TBI، بما في ذلك المنهكة المادي والمعرفي، والمشاكل السلوكية 1،2. عواقب TBI هي ليس فقط بسبب الإصابات الميكانيكية الأولية إلى الدماغ ولكن أيضا إلى وقوع إصابات الخلوية والجزيئية الثانوية إلى الدماغ فضلا عن الأنسجة الأخرى التي تحدث على مر الزمن 3-5. وقد ثبت وضع نهج لتشخيص وعلاج TBI ليكون صعبا بسبب TBI هو عملية معقدة المرض. طبيعة متغيرة من الإصابات الأولية، علم وظائف الأعضاء البشرية، والعوامل البيئية نتائج في الاول الثانوي غير متجانسةnjuries والأمراض. وتشمل العوامل المتغيرة الأساسية شدة الإصابة الأولية، والوقت بين الإصابات المتكررة الابتدائية، والسن والتركيب الوراثي للفرد. فهم كيفية مساهمة كل عامل متغير إلى عواقب TBI غير المرجح أن يساعد في وضع نهج لتشخيص وعلاج TBI 6،7. نحن هنا تصف طريقة لإلحاق رئيس مغلقة TBI في ذبابة الفاكهة (ذبابة الفاكهة) التي يمكن استخدامها لتحديد مساهمة العوامل المتغيرة لعواقب TBI. وتستند هذه الطريقة على الملاحظة الأولية التي تصل بشكل مكثف جانب قارورة ثقافة ذبابة ضد كف اليد الناجمة من النوع البري يطير لتصبح عاجزا مؤقتا، نتيجة محتملة للTBI. وبالتالي، فإننا شيدت الصدمة (HIT) جهاز تأثير كبير أن ألخص قوات التسارع والتباطؤ من الإجراءات التي اتخذت لضرب اليد. ويظهر الفيلم عالية السرعة التي بضربة واحدة منHIT يسبب جهاز الذباب في الاتصال جدار القارورة عدة مرات مع رئيس والجسم 8. إلى حد ما، من المحتمل أن تسبب في الدماغ يطير إلى الإرتداد وتشوه ضد كبسولة الرأس، على غرار ما يحدث للإنسان في السقوط وحوادث السيارات 9 كافة جهات الاتصال. وفقا لذلك، الذباب تعامل مع الظواهر شاشة الجهاز HIT تتفق مع إصابات الدماغ، بما في ذلك عجزا مؤقتا تليها ترنح، والانتعاش التدريجي للحراك، والتغيرات في التعبير الجيني في الرأس، والتنكس العصبي التدريجي في الدماغ 10. وبالتالي، يجعل الجهاز HIT من الممكن لدراسة TBI باستخدام ترسانة هائلة من الأدوات والتقنيات المتقدمة لالذباب التجريبية.

<table><tbody><tr><td>Zinc plated compression spring</td><td>The Hillman&amp;nbsp; Group</td><td>540189</td><td>9 7/8 inch (length, 2.2 cm), 15/16 inch (outer diameter, 2.4 cm), 0.12 inch (wire size, 0.3 cm)</td></tr><tr><td>Wooden board</td><td></td><td></td><td>9 inch (length, 22.9 cm), 6.5 inch (width, 16.5 cm), 0.75 inch (height, 1.9 cm)</td></tr><tr><td>Clamps</td><td>Sigma Electrical Manufacturing Corporation</td><td>49822</td><td>3.10 inch (length, 7.9 cm), 0.68 inch (width, 1.7 cm), 1.11 inch (height, 2.8 cm), EMT Two Hole Straps, click on type for 1 inch (2.5 cm) steel EMT conduit</td></tr><tr><td>Loop half of self-adhesive velcro</td><td></td><td></td><td>3 inch (length, 7.6 cm), (3/4 inch width, 1.9 cm)</td></tr><tr><td>Polyurethane ice bucket cover</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-591-45</td><td>9 1/8 inch (length, 23.2 cm), 9 1/8 inch (width, 23.2 cm), 1 1/4 inch (height, 3.2 cm)</td></tr><tr><td>Plastic fly vials</td><td>Applied Scientific</td><td>AS-510</td><td>3 11/16 inch (height, 9.4 cm), 1 1/16 inch (inner diameter, 2.7 cm), 1 1/8 inch (outer diameter, 2.9 cm)</td></tr><tr><td>Large cotton balls</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-456-883</td><td></td></tr><tr><td>Paper protractor</td><td></td><td></td><td>10 inch (diameter, 25.4 cm)</td></tr></tbody></table>

a method to inflict closed head traumatic brain injury in drosophila

إصابات في الدماغ (TBI) يؤثر على الملايين من الناس كل عام، مما تسبب في انخفاض قيمة المادي والمعرفي، والوظائف السلوكية والموت. وقد ساهمت الدراسات التي تستخدم ذبابة الفاكهة اختراقات مهمة في فهم العمليات العصبية. وهكذا، وذلك بهدف فهم الأساس الخلوي والجزيئي للأمراض المصرف التجاري العراقي في البشر، قمنا بتطوير عالية التأثير صدمة (HIT) جهاز لإلحاق رئيس مغلقة TBI في الذباب. الذباب تتعرض للالظواهر شاشة الجهاز HIT تتفق مع TBI الإنسان مثل عجز مؤقت والتنكس العصبي التدريجي. يستخدم الجهاز HIT آلية القائم الربيع لدفع الذباب ضد جدار القارورة، تسبب التلف الميكانيكي للدماغ الذبابة. الجهاز غير مكلفة وسهلة لبناء وتشغيل لها بسيطة وسريعة، وأنها تنتج نتائج يمكن استنساخه. ونتيجة لذلك، فإن الجهاز HIT يمكن دمجها مع أدوات وتقنيات الذباب لمعالجة الأساسي التجريبية القائمةأسئلة حول TBI التي يمكن أن تؤدي إلى تطوير وسائل التشخيص والعلاج لTBI. على وجه الخصوص، الجهاز HIT يمكن أن تستخدم لأداء شاشات الوراثية على نطاق واسع لفهم الأساس الجيني للأمراض TBI.

ونحن مهتمون في فهم لماذا الذباب يموت بعد الإصابة الأولية في وقت قريب. لتحديد الموت، ونحن مصممون على مؤشر الوفيات في 24 ساعة (MI 24)، وهي النسبة المئوية من الذباب الذي توفي خلال 24 ساعة من الإصابة الأولية. وحضنت الذباب تعرض لضربات من الجهاز HIT عند 25 درجة مئوية في قارور?...

Watch this Scientific Journal Video about A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila at JoVE.com

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

نحن هنا تصف طريقة لإلحاق رئيس مغلقة إصابات في الدماغ (TBI) في ذبابة الفاكهة. وهذه الطريقة توفر بوابة للتحقيق في الآليات الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء الأمراض المصرف التجاري العراقي باستخدام مجموعة واسعة من الأدوات والتقنيات التجريبية المتاحة للذباب.

طريقة لإلحاق رئيس مقفلة إصابات الدماغ في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

a-method-to-inflict-closed-head-traumatic-brain-injury-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

11.4K Views.  University of Wisconsin-Madison.  نحن هنا تصف طريقة لإلحاق رئيس مغلقة إصابات في الدماغ (TBI) في ذبابة الفاكهة. وهذه الطريقة توفر بوابة للتحقيق في الآليات الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء الأمراض المصرف التجاري العراقي باستخدام مجموعة واسعة من الأدوات والتقنيات التجريب...

Video: A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic screening using chemical mutagens is a useful strategy for mapping mutant phenotypes to genes among Drosophila and other model organisms that share conserved cellular pathways with humans. If the mutated gene of interest is not lethal in early developmental stages of flies, a climbing assay can be conducted to screen for phenotypic indicators of decreased brain functioning, such as low climbing rates. Subsequently, secondary histological analysis of brain tissue can be performed in order to verify the neuroprotective function of the gene by scoring neurodegeneration phenotypes. Gene mapping strategies include meiotic and deficiency mapping that rely on these same assays can be followed by DNA sequencing to identify possible nucleotide changes in the gene of interest.

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

We present a protocol using a forward genetic approach to screen for mutants exhibiting neurodegeneration in Drosophila melanogaster. It incorporates a climbing assay, histology analysis, gene mapping and DNA sequencing to ultimately identify novel genes related to the process of neuroprotection.

في فيفو إلى الأمام الشاشة الوراثية لتحديد الجينات العصبية الجديدة في دروسوفيلا melanogaster

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic ...

Genetics

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

Live imaging is an important technique for studying cell biological processes, however this can be challenging in live animals. The translucent cuticle of the Drosophila larva makes it an attractive model organism for live imaging studies. However, an important challenge for live imaging techniques is to noninvasively immobilize and position an animal on the microscope. This protocol presents a simple and easy to use method for immobilizing and imaging Drosophila larvae on a polydimethylsiloxane (PDMS) microfluidic device, which we call the 'larva chip'. The larva chip is comprised of a snug-fitting PDMS microchamber that is attached to a thin glass coverslip, which, upon application of a vacuum via a syringe, immobilizes the animal and brings ventral structures such as the nerve cord, segmental nerves, and body wall muscles, within close proximity to the coverslip. This allows for high-resolution imaging, and importantly, avoids the use of anesthetics and chemicals, which facilitates the study of a broad range of physiological processes. Since larvae recover easily from the immobilization, they can be readily subjected to multiple imaging sessions. This allows for longitudinal studies over time courses ranging from hours to days. This protocol describes step-by-step how to prepare the chip and how to utilize the chip for live imaging of neuronal events in 3rd instar larvae. These events include the rapid transport of organelles in axons, calcium responses to injury, and time-lapse studies of the trafficking of photo-convertible proteins over long distances and time scales. Another application of the chip is to study regenerative and degenerative responses to axonal injury, so the second part of this protocol describes a new and simple procedure for injuring axons within peripheral nerves by a segmental nerve crush.

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

Drosophila larvae are an attractive model system for live imaging due to their translucent cuticle and powerful genetics. This protocol describes how to utilize a single-layer PDMS device, called the &#39;larva chip&#39; for live imaging of cellular processes within neurons of 3rd instar Drosophila larvae.

باستخدام رقائق الموائع الدقيقة للتصوير لايف ودراسة الردود الإصابات في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

Live imaging is an important technique for studying cell biological processes, however this can be challenging in live animals. The translucent cuticle of ...

Bioengineering

A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila

Chronic Traumatic Encephalopathy (CTE) is an established neurodegenerative disease that is closely associated with exposure to repetitive mild Traumatic Brain Injury (mTBI). The mechanisms responsible for its complex pathological changes remain largely elusive, despite a recent consensus to define the neuropathological criteria. Here, we describe a novel method to develop a model of CTE in Drosophila melanogaster&#160;(Drosophila&#160;)&#160;in an attempt to identify the key genes and pathways that lead to the characteristic hyperphosphorylated tau accumulation and neuronal death in the brain. Adjustable-strength impacts to inflict mild closed injury are delivered directly to the fly head, subjecting the head to rapid acceleration and deceleration. Our method eliminates the potential problems inherent with other Drosophila mTBI models (e.g.,animal death might be induced by damage to other parts of the body or to internal organs). The less labor- and cost-intensive animal care, short life span, and extensive genetic tools make the fruit fly ideal to study CTE pathogenesis and make it possible to perform large-scale, genome-wide forward genetic and pharmacological screens. We anticipate that the ongoing characterization of the model will generate important mechanistic insights on disease prevention and therapeutic approaches.

A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila

Here, we describe a new approach to inflict closed-head traumatic brain injury in Drosophila melanogaster. Our method has the advantage of directly delivering repetitive impacts with adjustable strength to the head alone. Further exploration of the invertebrate system will help to illuminate the pathogenesis of chronic traumatic encephalopathy.

طريقة جديدة لنموذج اعتلال الدماغ الصدمة المزمن في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Chronic Traumatic Encephalopathy (CTE) is an established neurodegenerative disease that is closely associated with exposure to repetitive mild Traumatic ...

Monitoring Cell-to-cell Transmission of Prion-like Protein Aggregates in Drosophila Melanogaster

Protein aggregation is a central feature of most neurodegenerative diseases, including Alzheimer&#39;s disease (AD), Parkinson&#39;s disease (PD), Huntington&#39;s disease (HD), and amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Protein aggregates are closely associated with neuropathology in these diseases, although the exact mechanism by which aberrant protein aggregation disrupts normal cellular homeostasis is not known. Emerging data provide strong support for the hypothesis that pathogenic aggregates in AD, PD, HD, and ALS have many similarities to prions, which are protein-only infectious agents responsible for the transmissible spongiform encephalopathies. Prions self-replicate by templating the conversion of natively-folded versions of the same protein, causing spread of the aggregation phenotype. How prions and prion-like proteins in AD, PD, HD, and ALS move from one cell to another is currently an area of intense investigation. Here, a Drosophila melanogaster model that permits monitoring of prion-like, cell-to-cell transmission of mutant huntingtin (Htt) aggregates associated with HD is described. This model takes advantage of powerful tools for manipulating transgene expression in many different Drosophila tissues and utilizes a fluorescently-tagged cytoplasmic protein to directly report prion-like transfer of mutant Htt aggregates. Importantly, the approach we describe here can be used to identify novel genes and pathways that mediate spreading of protein aggregates between diverse cell types in vivo. Information gained from these studies will expand the limited understanding of the pathogenic mechanisms that underlie neurodegenerative diseases and reveal new opportunities for therapeutic intervention.

Monitoring Cell-to-cell Transmission of Prion-like Protein Aggregates in Drosophila Melanogaster

Accumulating evidence supports the idea that pathogenic protein aggregates associated with neurodegenerative diseases spread between cells with prion-like properties. Here, we describe a method that enables visualization of cell-to-cell spreading of prion-like aggregates in the model organism, Drosophila melanogaster.

رصد خلية إلى انتقال بروتين بريون مثل المجاميع في Melanogaster المورفولوجية

Protein aggregation is a central feature of most neurodegenerative diseases, including Alzheimer&#39;s disease (AD), Parkinson&#39;s disease (PD), ...

Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain

The molecular and cellular mechanisms underlying neurogenesis in response to disease or injury are not well understood. However, understanding these mechanisms is crucial for developing neural regenerative therapies. Drosophila melanogaster is a leading model for studies of neural development but historically has not been exploited to investigate adult brain regeneration. This is primarily because the adult brain exhibits very low mitotic activity. Nonetheless, penetrating traumatic brain injury (PTBI) to the adult Drosophila central brain triggers the generation of new neurons and new glia. The powerful genetic tools available in Drosophila combined with the simple but rigorous injury protocol described here now make adult Drosophila brain a robust model for neural regeneration research. Provided here are detailed instructions for (1) penetrating injuries to the adult central brain and (2) dissection, immunohistochemistry, and imaging post-injury. These protocols yield highly reproducible results and will facilitate additional studies to dissect mechanisms underlying neural regeneration.

Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain

This article provides detailed protocols for inflicting Penetrating Traumatic Brain Injury (PTBI) to adult Drosophila and examining the resulting neurogenesis.

تحفيز وتحليل تكوين الأعصاب للبالغين في الدماغ المركزي Drosophila

The molecular and cellular mechanisms underlying neurogenesis in response to disease or injury are not well understood. However, understanding these ...

Mechanically Injuring Drosophila Larvae Segmental Nerves to Induce Neurodegeneration

Source: Danella, E. B., et al. <a href="https://app.jove.com/v/56128">A Simple Neuronal Mechanical Injury Methodology to Study Drosophila Motor Neuron Degeneration.</a> J. Vis. Exp. (2017).
The video demonstrates inducing neurodegeneration in Drosophila larva segmental nerves via mechanical injury. The ventral cuticle of anesthetized larvae is pinched using forceps to cause injury to the segmental nerves. The injured larvae are maintained with food, allowing the injury to cause degeneration of the motor neurons in the nerves, causing disruption of their neuromuscular junctions (NMJs).

إصابة ذبابة الفاكهة الأعصاب القطعية الجزئية ميكانيكيا للحث على التنكس العصبي

1. Preparation of Reagents and Equipment 

	Prepare 1x Dissection Buffer (70 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.02 mM CaCl2, 20 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 115 mM sucrose, ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuropathology

Neurodegenerative Diseases

Drosophila Adult Brain Dissection: A Method in Fly Neurobiology

Source: Kelly, S. M., et al. <a href="https://www.jove.com/video/56174/" target="_blank">Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains</a>. J. Vis. Exp. (2017).
This video describes how to dissect and isolate the adult Drosophila brain&#8211;a procedure necessary for visualizing the organ, which is otherwise obscured by the cuticle, eye, and tracheal tissue. The example protocol shows a detailed demonstration yielding high-quality preparations that can be used for immunostaining and imaging methods in Drosophila neurobiology.

ذبابة الفاكهة تشريح دماغ البالغين: طريقة في علم الأعصاب للذباب

Source: Kelly, S. M., et al. Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains. ...

Biology

Drosophila melanogaster (fruit fly)

Adult

Source: Katzenberger, R. J., et al.,&#160;<a href="https://app.jove.com/v/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (2015).
The video demonstrates the use of a High-Impact Trauma (HIT) device to induce closed-head traumatic brain injury (TBI) in Drosophila. TBI causes mechanical brain trauma affecting neuronal function, which over time leads to neurodegeneration and mortality.

Source: Katzenberger, R. J., et al.,&#160;A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila. J. Vis. Exp. (2015).
The video ...

Trauma

A Technique to Inflict Closed-Head Traumatic Brain Injury in Drosophila Flies

Source: Sun, M., et al. <a href="https://app.jove.com/v/55602">A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates a procedure to inflict a closed-head traumatic injury in anesthetized Drosophila flies using a strike device with a gas-propelled impactor. The injury affects neuronal function and impairs walking ability.

تقنية لإلحاق إصابات الدماغ الرضحية المغلقة في ذبابة الفاكهة

1. Assembly of the Strike Device (Figure 1)

	Remove the plunger from a 1 mL tuberculin syringe. Cut the barrel at the 1 mL mark.
	Remove an aerosol ...

Inducing Penetrating Traumatic Brain Injury in Adult Drosophila Flies

Source: Crocker, K. L., et al. <a href="https://app.jove.com/v/63182">Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain.</a> J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the induction of penetrating traumatic brain injury in the drosophila brain. Newly emerged flies are selected, anesthetized, and positioned under a fluorescence-equipped stereo microscope. The GFP-expressing mushroom body is identified, and a Minutien pin is inserted to cause injury. The flies are allowed to recover for further studies.

Source: Crocker, K. L., et al. Stimulating and Analyzing Adult Neurogenesis in the Drosophila Central Brain. J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates ...

طريقة لإلحاق رئيس مقفلة إصابات الدماغ في

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

في فيفو إلى الأمام الشاشة الوراثية لتحديد الجينات العصبية الجديدة في دروسوفيلا melanogaster

باستخدام رقائق الموائع الدقيقة للتصوير لايف ودراسة الردود الإصابات في

طريقة جديدة لنموذج اعتلال الدماغ الصدمة المزمن في

رصد خلية إلى انتقال بروتين بريون مثل المجاميع في Melanogaster المورفولوجية

تحفيز وتحليل تكوين الأعصاب للبالغين في الدماغ المركزي Drosophila

إصابة ذبابة الفاكهة الأعصاب القطعية الجزئية ميكانيكيا للحث على التنكس العصبي

ذبابة الفاكهة تشريح دماغ البالغين: طريقة في علم الأعصاب للذباب

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

تقنية لإلحاق إصابات الدماغ الرضحية المغلقة في ذبابة الفاكهة

Inducing Penetrating Traumatic Brain Injury in Adult Drosophila Flies