وأيد هذه الدراسة منحة من المعاهد الوطنية للصحة، والمعهد الوطني لطب الأسنان والجمجمة البحوث (DE025030).

وأقر البروتوكول، المذكورة أدناه برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة وأنه يتبع المبادئ التوجيهية الأخلاقية التي وضعتها "المعاهد الوطنية للصحة". جميع البيانات الواردة في هذا التقرير تم إنشاؤها بواسطة استخدام الفئران الإناث التي كانت الأسابيع 10-12 من العمر. واستخدمت السلالات التالية من الفئران: C57BL/6، بالب/ج، DBA1، 129S، و F1 (B6XA/ي). جميع الفئران يسكنون في أقفاص الحاجز (5 الحيوانات في قفص) في ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض وتوفير الأعلاف والمياه ad متواصلة.
1-إعداد
<ol><li>لإعداد حل أسهم هيدروكلوريد pilocarpine، تزن 10 مغ المجمع وحل في 1.776 مل من المحلول الملحي متساوي التوتر العقيمة التي فورتيكسينج، تعطي حلاً أسهم من 5.63 mg/mL. ليس هناك حاجة لتعقيم هذا الحل. ولكن إذا رغبت في ذلك، تصفية عن طريق فلتر 0.2 ميكرون. تخزين هذا الحل الأسهم في مختبرين متعددة في ثلاجة-80 سج لمدة تصل إلى 3 أشهر. كل الأسهم المجمدة للاستخدام مرة واحدة. وبمجرد مذاب، لا تجميد الحل بيلوكاربيني.</li>
	<li>تأخذ 0.6 مل [ميكروفوج] أنابيب ولكمه ثقب صغير في الجزء السفلي من كل أنبوبة بعناية مع إبرة عيار 18 ساخنة. قم بتعيين هذه الأنابيب في أنابيب 2 مل. لا يلزم أن يكون الأنابيب معقمة.</li>
	<li>استخدام شفرة حلاقة حادة، عقيمة، قطع مسحات ماصة أسطواني إلى قطع طولها حوالي 2 سم. قص كل قطعة 2 سم قطرياً لإعطاء 2 مسحات على شكل مخروطي. ضع مسحه واحدة في كل من 0.6 مل [ميكروفوج] أنابيب.</li>
	<li>وزن 0.6 مل [ميكروفوج] أنابيب تحتوي على مسحه جافة.</li>
	<li>نقل الفئران دراستها في قفص نظيفة جديدة مع زجاجات المياه. تبقى الفئران دون طعام ح 2 على الأقل قبل بدء جمع اللعاب للحيلولة دون تلوث اللعاب جمع جزيئات الغذاء. ملاحظة: ليس من الضروري للحفاظ على الماوس 1 كل قفص لهذا الإجراء. ومع ذلك، عدد الفئران التي وضعت في كل قفص يعتمد على المؤسسة المحددة في القواعد والأنظمة للاستخدام الحيواني.</li>
	<li>فقط قبل نهاية ح 2، تعد الحل pilocarpine العامل (0.0563 mg/mL) بتمييع الحل الأسهم x 100 في المحلول الملحي المعقم. فإنه ليس من الضروري لمواصلة تصفية تعقيم هذا الحل. دائماً الحل pilocarpine العامل على الجليد. ملاحظة: ويورد الجدول 1 مقدار بيلوكاربيني بالحقن لمجموعة من أوزان الجسم الماوس إعطاء جرعة نهائي 0.375 مغ/كغ من وزن الجسم.</li>
</ol>2-الإجراء
<ol><li>تزن كل الماوس وتحديد جرعة مزيج مخدر لكل الماوس باستخدام الجدول 1. حقن أول ماوس بحجم مناسب لمزيج مخدر عن طريق داخل. تعيين جهاز ضبط الوقت لمدة 2 دقيقة (معظم سلالات الماوس اختبارها في هذا البروتوكول الذهاب إلى النوم قبل 2 دقيقة). تأكد من أن الماوس يتم تخديره بشكل صحيح بسبب الافتقار إلى المشي عند وضعه على سطح مستو. إذا كان الماوس لا يزال يسير، انتظر 2 دقيقة إضافية قبل المتابعة إلى الخطوة التالية. تطبيق قطره من زيوت التشحيم مرهم العيون لكلتا العينين لمنع التجفيف. ملاحظة: في الجدول 1، جرعة مزيج مخدر مل 0.007/غرام من وزن الجسم. النطاق الأمثل لهذا الإجراء مل 0.006 إلى 0، 008/غرام من وزن الجسم. ومع ذلك، بعد دقيقة 4، إذا كان الماوس لا يزال المشي أو نستعرض الحركات متشنج، أن يتشاور مع الطبيب البيطري المؤسسية لزيادة جرعة المخدر على نحو ملائم.</li>
	<li>تحديد جرعة pilocarpine للماوس باستخدام الجدول 1 وحقن كمية مناسبة من داخل المسار. تعيين جهاز ضبط الوقت لمدة 2 دقيقة وأدخل الماوس في أنبوب 50 مل ريسترينير حتى الرأس والاذنين عصا من نهاية قص. ضع الأنبوب بزاوية 45 درجة، مع الرأس إلى أسفل، والسطح البطني الأعلى. الشريط على أنبوب للمجلس الداخلي لمنعها من التحرك. ملاحظة: يوفر الجدول 1 الجرعة للفئران أكثر من 17 ز، كما لا محاولة هذا الإجراء على الفئران وزنها أدناه ز 17.</li>
	<li>في نهاية 2 دقيقة، إدراج زوج مغلقة من تشريح الملقط في الفم الصغير برفق ورفع الفك السفلي إلى الأعلى لفتح الفم. ادفع الملقط 1-2 ملم زيادة في الفم، والتأكد من أن ينظر اللسان يستريح في أعلى الذراع الملقط. مع زوج آخر من الملقط غرامة، عقد مسحه جافة قبل موزون قريبة من طرفها المخروطي.</li>
	<li>حرك المخروطية تلميح المسحة برفق في الفم. سحب الملقط مع ترك الحافة المسحة في تجويف الفم.</li>
	<li>فهم أوسع نهاية مسحه تمتد خارج الفم وتدوير للسماح الحد الأقصى للمساحة للاتصال مع الفم. الاحتفاظ المسحة في هذا المنصب لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: وهذا ما يضمن أن يبقى المسحة في الفم للمدة جمع. لاحظ أن تلميح المخروطية المسحة بمثابة الفتيل والجزء الأوسع من مسحه ما زال خارج الفم.</li>
	<li>في نهاية مدة 15 دقيقة، تدوير مسحه لجمع أي اللعاب التي استوعبت لا برفق ووضع مسحه الرطب في 0.6 مل [ميكروفوج] أنابيب. إغلاق الأنبوب ووضعه في أنبوب 2 مل على الجليد. ملاحظة: في هذا الوقت، سوف تظهر الغشاء المخاطي للفم جافة تماما. الماوس يمكن الآن نقل العودة إلى قفصة للتعافي من التخدير.</li>
	<li>نقل الماوس في القفص. مكان مبلل الكريات الغذاء في القفص بعد جمع اللعاب للمساعدة الإماهة أسرع. ملاحظة: الفئران يستيقظ داخل 10 دقيقة بعد نهاية المجموعة. قد تمنح أيضا تحت الجلد حقن المحلول الملحي متساوي التوتر تحسنت قبل 0.2 مل لتسريع الانتعاش.</li>
	<li>المضي قدما بالماوس القادم. الجميع ينبغي أن ترصد الفئران حتى أنهم استعادوا تماما وهي الإسعافية.</li>
</ol>3-القياسات
<ol><li>في نهاية كافة المجموعات، تزن أنابيب 0.6 مل مع مسحه الرطب. حساب الفرق بين الوزن الرطب والوزن الجاف للحصول على وزن اللعاب المنتجة. ضع الأنبوب 0.6 مل مع اللعاب إلى أنبوب 2 مل.</li>
	<li>قطع قبعات أنابيب 2 مل. ثم الطرد المركزي أنابيب 2 مل لمدة 2 دقيقة في ز 7500 x، في 4oC في أجهزة الطرد مركزي الصغرى لاسترداد اللعاب. قياس حجم اللعاب الحصول عليها باستخدام ميكروبيبيتي.</li>
	<li>التعبير عن النتائج كاللعاب الوزن (mg)10 أكثر من 15 دقيقة، أو كنسبة من وزن اللعاب (ملغ)/الماوس من وزن الجسم (ز). ملاحظة: إذا تم قياس حجم اللعاب المستخرجة من أصل المسحة، التعبير عن النتائج كحجم اللعاب المستردة (mL) أو النسبة من حجم اللعاب (mL)/الماوس من وزن الجسم (ز).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Proctor, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+salivary+secretion.">The physiology of salivary secretion.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).</li><li>Fox, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sj&#246;gren's+syndrome.">Sj&#246;gren's syndrome.</a> Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).</li><li>Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xerostomia+and+its+predictors+following+parotid-sparing+irradiation+of+head-and-neck+cancer.">Xerostomia and its predictors following parotid-sparing irradiation of head-and-neck cancer.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 50 (3), 695-704 (2001).</li><li>Marmary, Y., Fox, P. C., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+secretion+rates+from+mouse+and+rat+parotid+glands+are+markedly+different+following+pilocarpine+stimulation.">Fluid secretion rates from mouse and rat parotid glands are markedly different following pilocarpine stimulation.</a> Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 88 (2), 307-310 (1987).</li><li>Lin, A. L., Johnson, D. A., Wu, Y., Wong, G., Ebersole, J. L., Yeh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+short-term+gamma-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device.">Measuring short-term gamma-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Arch Oral Biol. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li><li>Scofield, R. H., Asfa, S., Obeso, D., Jonsson, R., Kurien, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+short+peptides+from+the+60-kDa+Ro+antigen+recapitulates+the+serological+and+pathological+findings+as+well+as+the+salivary+gland+dysfunction+of+Sjogren's+syndrome.">Immunization with short peptides from the 60-kDa Ro antigen recapitulates the serological and pathological findings as well as the salivary gland dysfunction of Sjogren's syndrome.</a> J Immunol. 175 (12), 8409-8414 (2005).</li><li>Deshmukh, U. S., Nandula, S. R., Thimmalapura, P. R., Scindia, Y. M., Bagavant, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+innate+immune+responses+through+Toll-like+receptor+3+causes+a+rapid+loss+of+salivary+gland+function.">Activation of innate immune responses through Toll-like receptor 3 causes a rapid loss of salivary gland function.</a> J Oral Pathol Med. 38 (1), 42-47 (2009).</li><li>Deshmukh, U. S., Ohyama, Y., Bagavant, H., Guo, X., Gaskin, F., Fu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+stimuli+accelerate+Sj&#246;gren's+syndrome-like+disease+in+(NZB+x+NZW)F1+mice.">Inflammatory stimuli accelerate Sj&#246;gren's syndrome-like disease in (NZB x NZW)F1 mice.</a> Arthritis Rheum. 58 (5), 1318-1323 (2008).</li><li>Szczerba, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+innate+immunity+and+Ro52-induced+antibody+causes+Sj&#246;gren's+syndrome-like+disorder+in+mice.">Interaction between innate immunity and Ro52-induced antibody causes Sj&#246;gren's syndrome-like disorder in mice.</a> Ann Rheum Dis. 75 (3), 617-622 (2016).</li><li>Takakura, A., Moreira, T., Laitano, S., De Luca J&#250;nior, L., Renzi, A., Menani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+muscarinic+receptors+signal+pilocarpine-induced+salivation.">Central muscarinic receptors signal pilocarpine-induced salivation.</a> J Dent Res. 82 (12), 993-997 (2003).</li><li>Yao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+elevation+and+secretion+of+interleukin-1beta+in+the+submandibular+gland+of+male+mice.">Lipopolysaccharide-induced elevation and secretion of interleukin-1beta in the submandibular gland of male mice.</a> Immunology. 116 (2), 213-222 (2005).</li><li>Knudsen, J., Nauntofte, B., Josipovic, M., Engelholm, S. A., Hyldegaard, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+isoflurane+anesthesia+and+pilocarpine+on+rat+parotid+saliva+flow.">Effects of isoflurane anesthesia and pilocarpine on rat parotid saliva flow.</a> Radiat Res. 176 (1), 84-88 (2011).</li><li>Kohrs, R., Durieux, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ketamine:+teaching+an+old+drug+new+tricks.">Ketamine: teaching an old drug new tricks.</a> Anesth Analg. 87 (5), 1186-1193 (1998).</li><li>Kozaki, T., Hashiguchi, N., Kaji, Y., Yasukouchi, A., Tochihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+saliva+collection+using+cotton+swab+on+cortisol+enzyme+immunoassay.">Effects of saliva collection using cotton swab on cortisol enzyme immunoassay.</a> Eur J Appl Physiol. 107 (6), 743-746 (2009).</li></ol>

الكتاب قد لا يوجد تضارب في الكشف عن.

إنتاج اللعاب هو عملية معقدة، ويتأثر بعوامل عديدة. ولذلك، يمكن قياس وظيفة الغدة اللعابية في الحيوانات المختبرية تحديا. تحديا إضافيا أن القياسات المتكررة لوظيفة الغدة اللعابية في الحيوان نفسه المطلوب لإثبات ظهور المرض أو إظهار الاسترداد بعد العلاج.
الأسلوب مسحه الموصوفة في...

تنتج الغدد اللعابية اللعاب في الاستجابة لمجموعة متنوعة من المحفزات العصبية والميكانيكية1. ويجري من خلال النظام العصبي متعاطفة والجهاز السمبتاوي مستقبلات ادريناليه واتروبين في الغدة المحفزات. بيلوكاربيني هو عامل اتروبين، الفقرة--مقلدات الذي يعمل أساسا على المستقبلات المسكارينيه. في الغدة اللعابية، فإنه يحفز إنتاج اللعاب بالنيابة على مستقبلات أستيل المسكارينيه M31. مؤشرا لقدرة الغدد اللعابية للاستجابة لتحفيز إنتاج اللعاب بعد الإدارة pilocarpine ويستخدم عادة كمقياس لوظيفة الغدة اللعابية.
القياس الدقيق لإنتاج اللعاب أمر بالغ الأهمية في دراسة أمراض الغدة اللعابية بما في ذلك متلازمة في سيورغن2 وإصابة الإشعاع عقب الرأس والرقبة علاج السرطان3. وقد وضعت عدة طرق مختلفة لقياس إنتاج اللعاب في القوارض. وتشمل هذه كانوليشن مباشرة من القناة اللعابية مطرح4، وجمع من اللعاب من تجويف الفم تحت فراغ5، وجمع باستخدام الزجاج الشعيرات الدموية6 أو7،ميكروبيبيتي8، 9-المباشر يوفر كانوليشن للقناة اللعابية اللعاب أكثر دقة ونقية. ومع ذلك، هذا إجراء تحديا من الناحية التقنية، ويحول دون إمكانية التسبب في إصابة الأقنية مجموعات اللعاب المتكررة من الحيوان نفسه. جمع اللعاب تحت فراغ يمكن أن يؤدي إلى نتائج متغير بسبب جفاف اللعاب من الأنبوب. زيادة مبالغ هذه الخسارة في الفئران مع انخفاض اللعاب. الزجاج الشعيرات الدموية تسمح جمع اللعاب للتحاليل اللاحقة، ولكن يمنع التغييرات في لزوجة اللعاب يفرز في حالة المريضة ملء الكفء شعري. علاوة على ذلك، محاولة اكتساح تجويف الفم لجمع بقايا اللعاب يمكن أن تؤدي إلى إصابات. الأسلوب بيبيت يسمح لمجموعة كاملة، والمشغل نفسه، أنها متسقة ملحوظ بين التجارب. ومع ذلك، لأسباب غير معروفة، هذا الأسلوب يظهر تباينا كبيرا بين مختلف العاملين. ولذلك، تسمح بإجراء مقارنات مناسبة، يصبح من المحتم أن المشغل نفسه ينفذ جميع التجارب ذات الصلة بمشروع معين. ومن الواضح أن هذا يمثل عائقا رئيسيا لمختبر.
ووضعت إجراء للتغلب على هذه المشكلات، أن يجمع بين أساليب جمع اللعاب تستخدم للبشر والقوارض. طريقة مسحه، الموصوفة أدناه لقياس حجم اللعاب الناجم عن بيلوكاربيني هو بسيط، واستنساخه، لا تتأثر بالمشغل، ويمكن أن يؤديها مرارا وتكرارا في الحيوان نفسه. وباﻹضافة إلى ذلك، فإنه يسمح جمع اللعاب للتحاليل اللاحقة من البروتينات المناعية أو الجزيئات الحيوية الأخرى.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals for saliva collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pilocarpine hydrochloride</td>
			<td>Alfa Aesar, Tewksbury, MA, USA</td>
			<td>B21410</td>
			<td>Dilute in sterile isotonic saline. Store single use aliquots of 100X stock at -80oC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Mix solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Mix 1 mL ketamine hydrochloride + 0.5 mL xylazine + 8.5 mL sterile isotonic saline in a sterile vial. Can be used for 3 months.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetamine (Ketamine hydrochloride)</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>C3N VT1</td>
			<td>Stock is 100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased (Xylazine)</td>
			<td>Med-Vet International, Mettawa, IL, USA</td>
			<td>RXANASED-20</td>
			<td>Stock is 20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotonic sterile saline</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>501032</td>
			<td>Used as diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial tears (lubricant ophthalmic ointment)</td>
			<td>Henry Schien, Dublin, OH, USA</td>
			<td>48272</td>
			<td>Used to prevent eyes from drying during the procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials for saliva collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SalivaBio Children&#39;s swab</td>
			<td>Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Individually wrapped swabs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL polypropylene tubes</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>89004-364</td>
			<td>Cut off the bottom 1 cm of the tube. Make sure that the cut edge is smooth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 0.6 mL</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>87003-290</td>
			<td>Make holes in the bottom of tube with heated 18 gauge needles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 2 mL</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>87003-298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes with permanently attached needles</td>
			<td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>324702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 gauge regular bevel needles</td>
			<td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel blade #11</td>
			<td>Integra York Inc PA, USA</td>
			<td>4-311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissecting forceps</td>
			<td>Roboz, Gaithersburg, MD, USA</td>
			<td>RS-5139</td>
			<td>Serrated angular 0.8 mm tip, 4&#34; length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Label tape</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA</td>
			<td>sc-224487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 channel timer</td>
			<td>Amazon.com, Seattle, WA, USA</td>
			<td>B06W2KCYVN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Mettler Toledo, Columbus OH, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals/ reagents for inducing salivary dysfunction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Invivogen, San Deigo, CA, USA</td>
			<td>tlrl-b5lps</td>
			<td>Dissolve in endotoxin free water, and store stock solution at 5 mg/mL . dilute in sterile HBSS 100 ug/mL - inject 100 uL/ moue ip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imject Alum adjuvant</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>77161</td>
			<td>Dilute 1:1 in sterile saline. Inject intraperitoneally 0.1 mL/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Ro52 antiserum</td>
			<td>Generated in lab</td>
			<td></td>
			<td>Immunization of rabbits with recombinant mouse Ro52</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals/ Kits for saliva analyses</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salivary lysozyme estimation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnzChek Lysozyme Assay Kit</td>
			<td>Molecular Probes, Eugene, OR, USA</td>
			<td>E-22013</td>
			<td>Used as per manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salivary IgA estimation by sandwich ELISA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgA</td>
			<td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td>
			<td>0106-01</td>
			<td>Standards for sandwich ELISA - range 30 ng/mL to 0.5 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti- mouse IgA unlabeled</td>
			<td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td>
			<td>1040-01</td>
			<td>Coat at 1 ug/mL in bicarbonate buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti- mouse IgA HRP</td>
			<td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td>
			<td>1040-05</td>
			<td>Detection antibody used at 1:4000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB substrate</td>
			<td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>555214</td>
			<td>Used as per manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immulon 4HBX Microtiter 96 well plates</td>
			<td>Thermo Scientific, Rochester, NY, USA</td>
			<td>3855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salivary protein estimation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate</td>
			<td>BioRad, Hercules, CA, USA</td>
			<td>5000006</td>
			<td>For protein estimation as per manufacturer&#39;s instructions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for the measurement of salivary gland function in mice

المرضى الذين يعانون من المتلازمة في سيورغن، أحد أمراض المناعة الذاتية التي تؤثر في إفرازات الغدد، تطوير التهاب الغدة اللعابية وخفضت إنتاج اللعاب. وبالمثل، يتم إنتاج اللعاب لخطر شديد في المرضى الذين يتلقون العلاج الإشعاعي لسرطان الرأس والعنق. تسهيل فهم إمراضية المرض نماذج القوارض، وضعت لتقليد هذه الشروط السريرية، والسماح لوضع استراتيجيات علاجية جديدة. ولذلك، القدرة على دقة، وتكاثر، ومرارا وتكرارا قياس وظيفة الغدة اللعابية في نماذج حيوانية أمر بالغ الأهمية. وبناء على الإجراءات المذكورة سابقا في الأدب، وضعت أسلوب يفي بهذه المعايير وكان يستخدم لتقييم وظيفة الغدة اللعابية في الفئران. ميزة إضافية لهذا الأسلوب الجديد هو أنه يتقن بسهولة، وقد تباين بين المشغل صغيرة. يتم تقييم الدالة الغدة اللعابية كمبلغ (الوزن أو الحجم) أو معدل اللعاب تنتج استجابة للتحفيز pilocarpine (مل/دقيقة). تجمع اللعاب مصدر جيد لتحليل محتوى البروتين، وتركيزات الغلوبولين المناعي، والجزيئات الحيوية الأخرى.

في النظم النموذجية التجريبية الماوس، يتم استخدام القدرة على إنتاج اللعاب استجابة للتحفيز بيلوكاربيني كمؤشر لوظيفة الغدة اللعابية. في الفئران الإناث C57BL/6 عمره 11 أسبوع تقاس طريقة مسحه إنتاج اللعاب. الشكل 1A، يتم التعبير عن النتائج بكمية اللعاب (mg) جمعت بعد ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice at JoVE.com

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Hypofunction الغدة اللعابية نتيجة متكررة للعلاج بالإشعاع وأمراض المناعة الذاتية. التقييم استنساخه من وظيفة الغدة اللعابية في نماذج الماوس لهذه الأمراض تحديا تقنيا. وهنا يتم وصف طريقة بسيطة لقياس دقيق واستنساخه لإنتاج اللعاب في الفئران.

طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

a-method-for-the-measurement-of-salivary-gland-function-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

18.3K Views.  Oklahoma Medical Research Foundation. Hypofunction الغدة اللعابية نتيجة متكررة للعلاج بالإشعاع وأمراض المناعة الذاتية. التقييم استنساخه من وظيفة الغدة اللعابية في نماذج الماوس لهذه الأمراض تحديا تقنيا. وهنا يتم وصف طريقة بسيطة لقياس دقيق واستنساخه لإنتاج اللعاب في الفئران.

Video: A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of infection with influenza virus alone. Instead, most individuals are thought to have succumbed to a secondary bacterial infection, predominately caused by the bacterium Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). The synergistic relationship between infections caused by influenza virus and the pneumococcus has subsequently been observed during the 1957 Asian influenza virus pandemic, as well as during seasonal outbreaks of the virus (reviewed in 1, 2). Here, we describe a protocol used to investigate the mechanism(s) that may be involved in increased morbidity as a result of concurrent influenza A virus and S. pneumoniae infection. We have developed an infant murine model to reliably and reproducibly demonstrate the effects of influenza virus infection of mice colonised with S. pneumoniae. Using this protocol, we have provided the first insight into the kinetics of pneumococcal transmission between co-housed, neonatal mice using in vivo imaging 3.

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A concurrent infection with influenza A virus is one of the factors implicated in the induction of invasive pneumococcal disease during asymptomatic Streptococcus pneumoniae carriage. Here we describe a mixed infection method using infant mice to investigate the synergism between these two respiratory pathogens.

باستخدام التصوير Bioluminescent بالتحقيق في التآزر بين العقدية الرئوية والأنفلونزا من الفيروسات في الفئران الرضع

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in the thymus proper vasculature formation and patterning is essential for thymocyte entry into the organ and mature T-cell exit to the periphery. The spatial arrangement of blood vessels in the thymus is dependent upon signals from the local microenvironment, namely thymic epithelial cells (TEC). Several recent reports suggest that disruption of these signals results in thymus blood vessel defects 1,2. Previous studies have described techniques used to label the neonatal and adult thymus vasculature 1,2. We demonstrate here a technique for labeling blood vessels in the embryonic thymus. This method combines the use of FITC-dextran or Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I (GSL 1 - isolectin B4) facial vein injections and CD31 antibody staining to identify thymus vascular structures and PDGFR-&beta; to label thymic perivascular mesenchyme 3-5. The option of using cryosections or vibratome sections is also provided. This protocol can be used to identify thymus vascular defects, which is critical for defining the roles of TEC-derived molecules in thymus blood vessel formation. As the method labels the entire vasculature, it can also be used to analyze the vascular networks in multiple organs and tissues throughout the embryo including skin and heart 6-10.

This article describes a method for labeling embryonic skin and thymus blood vessels.

A طريقة لوصفها الأوعية الدموية في الفئران الجنينية

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human &gamma;-HVs, such as EBV and KSHV, has severely hindered detailed pathogenic studies. Murine &gamma;-herpesvirus 68 (&gamma;HV68) shares extensive genetic and biological similarities with human &gamma;-HVs and is a natural pathogen of murid rodents2. As such, evaluation of &gamma;HV68 infection of mice inbred strains at different stages of viral infection provides an important model for understanding viral lifecycle and pathogenesis during &gamma;-HVs infection.
Upon intranasal inoculation, &gamma;HV68 infection results in acute viremia in the lung that is later resolved into a latent infection of splenocytes and other cells, which may be reactivated throughout the life of the host3,4. In this protocol, we will describe how to use the plaque assay to assess infectious virus titer in the lung homogenates on Vero cell monolayers at the early stage (5 - 7 days) of post-intranasal infection (dpi). While acute infection is largely cleared 2 - 3 weeks postinfection, a latent infection of &gamma;HV68 is established around 14 dpi and maintained later on in the spleen of the mice. Latent infection usually affects a very small population of cells in the infected tissues, whereby the virus stays dormant and shuts off most of its gene expression. Latently-infected splenocytes spontaneously reactivate virus upon explanting into tissue culture, which can be recapitulated by an infectious center (IC) assay to determine the viral latent load. To further estimate the amount of viral genome copies in the acutely and/or latently infected tissues, quantitative real-time PCR (qPCR) is used for its maximal sensitivity and accuracy. The combined analyses of the results of qPCR and plaque assay, and/or IC assay will reveal the spatiotemporal profiles of viral replication and infectivity in vivo.

&#947;-Herpesviruses (&#947;-HVs) establish life-long persistency in their host. Infection of mice with &#947;-HV68 provides a genetically tractable in vivo model for the characterization of the lifecycle/pathogenesis of &#947;HVs. This protocol describes the detection and quantitation of &#947;HV68 infection at acute and latent stages following infection by plaque-forming, infectious center, and qPCR assays.

قياس γHV68 العدوى في الفئران

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes. Investigation of transcripts and gene regulators that are expressed in tissues in which the mosquito host and pathogen interact, and in organs involved in reproduction are of great interest for strategies to reduce mosquito-borne disease transmission and disrupt egg development. A number of tools have been employed to study and validate the temporal and tissue-specific regulation of gene expression. Here, we describe protocols that have been developed to obtain spatial information, which enhances our understanding of where specific genes are expressed and their products accumulate. The protocol described has been used to validate expression and determine accumulation patterns of transcripts in tissues related to mosquito-borne pathogen transmission, such as female salivary glands, as well as subcellular compartments of ovaries and embryos, which relate to mosquito reproduction and development. 
 The following procedures represent an optimized methodology that improves the efficiency of various steps in the protocol without loss of target-specific hybridization signals. Guidelines for RNA probe preparation, dissection of soft tissues and the general procedure for fixation and hybridization are described in Part A, while steps specific for the collection, fixation, pre-hybridization and hybridization of mosquito embryos are detailed in Part B.

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Temporal and spatial gene expression analyses have a crucial role in functional genomics. Whole-mount hybridization in situ is useful for determining the localization of transcripts within tissues and subcellular compartments. Here we outline a hybridization in situ protocol with modifications for specific target tissues in mosquitoes.

تهجين<em&gt; في الموقع</em&gt; من الغدد اللعابية والمبيض والأجنة من البعوض الحامل للمرض

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes.  Investigation of transcripts and gene ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne relapsing fever (Borrelia spp.), Rocky Mountain Spotted fever (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosis (Ehrlichia chaffeensis and E. equi), anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum), encephalitis (tick-borne encephalitis virus), babesiosis (Babesia spp.), Colorado tick fever (Coltivirus), and tularemia (Francisella tularensis) 1-8. To be properly transmitted into the host these infectious agents differentially regulate gene expression, interact with tick proteins, and migrate through the tick 3,9-13. For example, the Lyme disease agent, Borrelia burgdorferi, adapts through differential gene expression to the feast and famine stages of the tick's enzootic cycle 14,15. Furthermore, as an Ixodes tick consumes a bloodmeal Borrelia replicate and migrate from the midgut into the hemocoel, where they travel to the salivary glands and are transmitted into the host with the expelled saliva 9,16-19.
As a tick feeds the host typically responds with a strong hemostatic and innate immune response 11,13,20-22. Despite these host responses, I. scapularis can feed for several days because tick saliva contains proteins that are immunomodulatory, lytic agents, anticoagulants, and fibrinolysins to aid the tick feeding 3,11,20,21,23. The immunomodulatory activities possessed by tick saliva or salivary gland extract (SGE) facilitate transmission, proliferation, and dissemination of numerous tick-borne pathogens 3,20,24-27. To further understand how tick-borne infectious agents cause disease it is essential to dissect actively feeding ticks and collect tick saliva. This video protocol demonstrates dissection techniques for the collection of hemolymph and the removal of salivary glands from actively feeding I. scapularis nymphs after 48 and 72 hours post mouse placement. We also demonstrate saliva collection from an adult female I. scapularis tick.

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

The collection of infected tick hemolymph, salivary glands, and saliva is important to study how tick-borne pathogens cause disease. In this protocol we demonstrate how to collect hemolymph and salivary glands from feeding Ixodes scapularis nymphs. We also demonstrate saliva collection from female I. scapularis adults.

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

A complex interaction between the immune response and host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in particular, is known to occur as a response to infection in mammals 1 and has also recently been described in Drosophila melanogaster2. It is generally accepted that sleep is beneficial to the host during an infection and that it is important for the maintenance of a robust immune system3,4. However, experimental evidence that supports this hypothesis is limited4, and the function of excess sleep during an immune response remains unclear. We have used a multidisciplinary approach to address this complex problem, and have conducted studies in the simple genetic model system, the fruitfly Drosophila melanogaster. We use a standard assay for measuring locomotor behavior and sleep in flies, and demonstrate how this assay is used to measure behavior in flies infected with a pathogenic strain of bacteria. This assay is also useful for monitoring the duration of survival in individual flies during an infection. Additional measures of immune function include the ability of flies to clear an infection and the activation of NF&kappa;B, a key transcription factor that is central to the innate immune response in Drosophila. Both survival outcome and bacterial clearance during infection together are indicators of resistance and tolerance to infection. Resistance refers to the ability of flies to clear an infection, while tolerance is defined as the ability of the host to limit damage from an infection and thereby survive despite high levels of pathogen within the system5. Real-time monitoring of NF&kappa;B activity during infection provides insight into a molecular mechanism of survival during infection. The use of Drosophila in these straightforward assays facilitates the genetic and molecular analyses of sleep and the immune response and how these two complex systems are reciprocally influenced.

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

To understand a link between the immune response and behavior, we describe a method to measure locomotor behavior in Drosophila during bacterial infection as well as the ability of flies to mount an immune response by monitoring survival, bacterial load, and real-time activity of a key regulator of innate immunity, NF&kappa;B.

قياس كمية الاستجابة المناعية والنوم في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, including cell biology, oncology, dentistry, and immunology. The SMG is an exocrine gland comprised of secretory epithelial cells, myofibroblasts, endothelial cells, nerves, and extracellular matrix. Dynamic cellular processes in the rat and mouse SMG have previously been imaged, mostly using inverted multi-photon microscope systems. Here, we describe a straightforward protocol for the surgical preparation and stabilization of the murine SMG in anesthetized mice for in vivo imaging with upright multi-photon microscope systems. We present representative intravital image sets of endogenous and adoptively transferred fluorescent cells, including the labeling of blood vessels or salivary ducts and second harmonic generation to visualize fibrillar collagen. In sum, our protocol allows for surgical preparation of mouse salivary glands in upright microscopy systems, which are commonly used for intravital imaging in the field of immunology.

We describe a protocol to surgically expose and stabilize the murine submandibular salivary gland for intravital imaging using upright intravital microscopy. This protocol is easily adaptable to other exocrine glands of the head and neck region of mice and other small rodents.

إعداد موريني الغدة اللعابية اللهاة تستقيم مجهرية إينترافيتال

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections may be one possible cause. The typical animal model used for studying BA is established by inoculating a neonatal mouse with a rhesus rotavirus. Silver nanoparticles have been shown to exert antibacterial and antiviral effects; their function in the BA mouse model is evaluated in this study. Currently, in BA animal experiments, the methods used to improve the symptoms of BA mice are generally symptomatic treatments given via food or other drugs. The aim of this study is to demonstrate a new method for ameliorating BA syndrome in mice by the intraperitoneal injection of silver nanoparticles and to provide detailed methods for preparing the silver nanoparticle gel formulation. This method is simple and widely applicable and can be used to research the mechanism of BA, as well as in clinical treatments. Based on the BA mouse model, when the mice exhibit jaundice, the prepared silver nanoparticle gel is injected intraperitoneally to the surface of the lower liver. The survival status is observed, and biochemical indicators and liver histopathology are examined. This method allows a more intuitive understanding of both the establishment of the BA model and novel BA treatments.

This article describes in detail a method based on silver nanoparticles for ameliorating biliary atresia syndrome in an experimental biliary atresia mouse model. A solid understanding of the reagent preparation process and the neonatal mouse injection technique will help familiarize researchers with the method used in neonatal mouse model studies.

أسلوب نانوحبيبات الفضي للتخفيف من حدة المتلازمة الكبدية الصفراوية في الفئران

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Measurement of Specific Mycobacterial Mistranslation Rates with Gain-of-function Reporter Systems

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 per codon, the actual error rates vary widely, depending on the species, environment, and codons being studied. We have previously shown that mycobacteria use a two-step pathway for the generation of aminoacylated glutamine and asparagine tRNAs and that this is specifically associated with relatively high error rates due to the modulation of mistranslation rates by an essential component of the pathway, the amidotransferase GatCAB. We modified a previously employed Renilla-Firefly dual-luciferase system that had been used to measure mistranslation rates in Escherichia coli for use in mycobacteria to measure specific mistranslation rates of glutamate at glutamine codons and aspartate for asparagine codons. Although this reporter system was suitable for the accurate estimation of specific error rates, lack of sensitivity and requirements for excessive manipulation steps made it unsuitable for high-throughput applications. Therefore, we developed a second gain-of-function reporter system, using Nluc luciferase and green fluorescent protein (GFP), which is more amenable to medium/high-throughput settings. We used this system to identify kasugamycin as a small molecule that can decrease mycobacterial mistranslation. Although the reporters that we describe here have been used to measure specific types of mycobacterial mistranslation, they may be modified to measure other types of mistranslation in a number of model systems.

In this article, we present two complementary methods to measure specific rates of translational error and mistranslation in the model mycobacterium, Mycobacterium smegmatis, using gain-of-function reporter systems. The methods can be employed to measure accurate error rates in low throughput or relative error rates in a more high-throughput setting.

قياس معدلات المتفطرات المحددة مع أنظمه المراسلة التي تكتسب وظيفة

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 ...