يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على بعض الأسئلة في طريقة حقل الأورام الخبيثة حول توصيف الخلية التي تبدأ في الخبيثة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر أساسًا للتحليل الوظيفي لهذه الخلايا الجذعية السرطانية. الآثار المترتبة على هذه التقنية تمتد إلى حيث العلاج من متلازمات النخاع أو MDS، كما أنها يمكن أن تساعد في تحديد الخلايا بدء المرض.
لإعداد المتلقين لنقل بالتبني ، قبل أسبوع واحد من عملية الزرع توفير المياه المعقمة المكملة مع 100 ملليغرام لكل لتر من ciprofloxacin لخين الحيوانات المتلقية وراثيا لمدة سبعة أيام في منشأة حيوانية محددة خالية من مسببات الأمراض. في اليوم السابع، يكون مدربة، شهادة cesium 17 المشغل تعيين أداة مصدر سيزيوم لتقديم 70 درجة مئوية من إجمالي الجسم أشعة غاما في الدقيقة الواحدة. ضع 10 فئران في حامل مصمم خصيصًا.
أدخل الحامل في غرفة الإشعاع، ووزّع 9 رماديات تشعيع الجسم الكلي في 13 دقيقة. ثم ارجع الحيوانات الى أقفاصها في صباح اليوم التالي، رش الإيثانول 70 في المئة على كامل اثنين إلى ستة العثة القديمة C57 ستة ماوس أسود واستخدام مقص لإزالة الجلد من الحوض إلى الكاحلين.
استخدام ملقط مع مقص لإزالة femora و tibiae. تقليم العضلات نظيفة من العظام. قطع نهايات قريبة وقطة ل tibiae والتقاط واحد الساق مع ملقط.
أدخل حقنة ثلاثية المليلتر مجهزة بإبرة 27 غيج في تجويف نخاع العظم واغسل نخاع العظم في أنبوب قاع دائري 14 ملليلتر يحتوي على 2.5 ملليلتر من محلول هانكس الملحي المخزن على الاحتياطية المكملة بمصل بوفين الجنين بنسبة 2٪ أو HF2. عندما تم جمع كل النخاع، pirate الأنسجة عدة مرات من خلال تلميح إبرة 20 غيج لتفريق كتلة النخاع في تعليق واحد للعد. لتسمية الخلايا النووية نخاع العظم، أو BMNC، لفرز التدفق، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه في واحد مرات عشر إلى BMNC السابعة لكل 90 ميكرولترات من تركيز HF2.
بعد ذلك، أضف عشرة ميكرولترات من كوكتيل الأجسام المضادة المضادة للانباتات الحيوية، المضادة للانساب إلى تعليق الخلية لمدة 20 دقيقة الحضانة في 4 درجات مئوية. تليها غسل بالطرد المركزي في ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني. إعادة تعليق بيليه في 100 ميكرولترات من HF2 لكل واحد × عشرة إلى الخلايا السابعة.
تسمية بشكلثاني الخلايا مع اثنين من microliters من APC مترافق المضادة للأضداد الحيوية. بعد 20 minuets في أربع درجات مئوية، محمية من الضوء، وغسل الخلايا في ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد. إعادة تعليق بيليه في HF2 تستكمل مع 0.2 ميكروغرام لكل ملليلتر من يوديد بروبديسيوم على الجليد.
الآن معايرة تدفق تدفق فرز الخلايا الخلوية باستخدام الخلايا غير المطوعة لتحسين جميع أنابيب الmultiplier الضوئية ، مبعثر ، والمعلمات fluorescence داخل نطاق خطي من كل كاشف. الحصول على ثلاث عينات من 10،000 الخلايا لخلايا، PI المسمى ومكافحة النسب APC الخلايا المسماة. في نهاية هذا النوع، تحليل 1،000 الخلايا من كل عينة لتأكيد نقاء وديموة الخلايا فرزها.
تدور أسفل العينات في جهاز الطرد المركزي. ثم إعادة تعليق الكريات في 0.5 ملليلتر من HF2 للعد. لنقل بالتبني من الخلايا فرزها، مزيج 100 ميكرولترات من مرتين إلى BMNC من نوع البرية الخامسة من المتلقي يخدع في HF2 العقيمة.
مع 100 ميكرولترات من 2-5 مرات عشرة إلى الرابع BMNC المانحة فرزها من الفائدة في HF2 العقيمة في أنبوب جهاز طرد مركزي صغير لكل المتلقي. تحميل حقنة واحدة ملليلتر، مجهزة 28 غيج لكل مستلم مع 200 ميكرولترات من الخلايا. ثم ضع الفئران المتلقي تحت مصباح الحرارة للحث على تمدد الوريد الذيل.
تسليم خلائط الخلية إلى كل المتلقي المشعة القاتلة عن طريق الوريد الذيل. كما الخلايا الجذعية التجديد الذاتي يقتصر على النسب السلبية BMNC البرية من نوع، النسب السلبية، نسب منخفض الإيجابية، وارتفاع النسب الخلايا الإيجابية يتم فرز وزرعها في المتلقين من النوع البري لتحديد قدرة التجديد الذاتي لكل مجموعة الخلايا. بالتبني زرع المانحة عبر BMNC الجينية من الحيوانات نموذج MDS يمكن تمييز السابقين vivo من قبل CD45.2 خلية تعبير علامة سطح.
قبل 16 أسبوعا بعد زرع النسب السلبية BNMC، أو BMNC غير فرزها من الحيوانات المانحة MDS المعدلة وراثيا، والخلايا المعدلة وراثيا من المنافسة خارج الخلايا من النوع البري كما يتضح من نسبة متزايدة من الخلايا المانحة إيجابية CD45.2، لوحظ في الدم المحيطي للحيوانات المتلقية المشعة القاتلة. هنا تظهر الخلايا من التحول الكريمي من الماوس المزروعة مع خلايا MDS المعدلة وراثيا. لاحظ وجود العديد من الانفجارات وأشكال غير ناضجة.
أثناء محاولة الإجراء، من المهم أن نتذكر للحد من الوقت السابقين التلاعب الجسم الحي، كما أنه يمكن أن تضع الضغط لا مبرر له على الخلايا، مما أدى إلى وفاة الخلية أو فقدان وظيفي. بعد أن تطور هذه التقنية يمهد الطريق للباحثين في البرنامج الميداني ، لوضع خبيث لاستكشاف مصدر المرض في الفئران المعدلة وراثيا.
