حاجز الدم الأمعاء هو نظام متعدد الطبقات التي تتحكم في مرور المواد الغذائية, الأيضات البكتيرية, المخدرات, وغيرها من المركبات الخارجية من تجويف الأمعاء إلى مجرى الدم. كما نعلم، قد تضعف سلامة الحاجز في الجهاز الهضمي وكذلك في القلب والأوعية الدموية وبعض أمراض التمثيل الغذائي التي قد تؤدي إلى سهولة الوصول إلى المركبات النشطة بيولوجيا مثل الأيضات البكتيرية الأمعاء إلى مجرى الدم، ويمكن أن تؤثر على عمل كائن حي بأكمله. ولذلك قد يكون نفاذية حاجز الدم الأمعاء علامة على كل من الأمراض المعوية وغير المعوية.
في هذا الفيديو، نقدم قياسًا مباشرًا لنفاذية حاجز الدم في الأمعاء في الفئران باستخدام أخذ عينات الدم المدخلية بعد تناول مادة اختبارية إلى الجهاز الهضمي. نحن وصف بالتفصيل تصنيف الوريد المدخل و الوريد السفلي الوريدي cava فقط فوق التقاء الوريد الكبدي. يسمح أخذ عينات الدم من الوريد البوابي والسفلي السفلي من الوريد CAVA بتقييم ليس فقط نفاذية حاجز الدم الأمعاء ولكن أيضًا إزالة الكبد ومسار الامتصاص للجزيئات ذات الاهتمام مثل نواتج بكتيريا الأمعاء أو الأدوية.
هذه الطريقة لا تتأثر عمليا وظائف الكبد والكلى ويحافظ على تدفق الدم المعوي الذي هو ميزة قوية على استخدام يشيع في vivo وفي الأساليب المختبرية. يجب أن تُصوم الحيوانات بين عشية وضحاها قبل إجراء العملية. إجراء جميع الإجراءات أثناء التخدير العام.
الحيوانات تُقتل بعد التجربة يبدأ الإجراء الخاص بنا مع إدخال خط الإدارة داخل الأمعاء. هنا نقترح الإدارة داخل القولون من علامة.
ربما يتم تعديله من خلال الإدارة على مستويات مختلفة من الجهاز الهضمي. على سبيل المثال، المعدة أو الاثني، أو الـ 12. ومع ذلك، تأخذ في الاعتبار سرعة متغير من التعفن والتفاعلات المحتملة مع الانزيمات والأحماض المعدة أثناء إدارة علامة في الأجزاء العليا من الجهاز الهضمي.
استخدم قسطرة فولي للأطفال مقاس 10 F أو 8 F كقسطرة القولون. وضع علامة على القسطرة للإشارة إلى الجزء الذي سيتم إدخاله في القولون حوالي ثمانية سنتيمترات. تحقق من المنطقة الشرجية وعدد البراز في المستقيم قبل إدخال القسطرة في القولون.
إذا كان البراز موجودًا، افرغ المستقيم عن طريق تدليك منطقة المستقيم. ضع زيوت زيوت على طول القسطرة. بعد ذلك، ترطيب فتحة الشرج والمناطق المحيطة بها مع مواد التشحيم.
أدخل القسطرة مع سلك دليل من خلال العضلة العاصرة الشرجية الخارجية. جعل التحركات البطيئة إلى الأمام والخلف ودائرية. استمر في التحقق من موقع القسطرة عن طريق ملاق البطن أثناء إدخال القسطرة.
الخطوة التالية هي قسطرة الوريدي السفلية. يمكنك تخطي هذا الإجراء في دراسات نفاذية الأمعاء. حاول أن تشعر بالنبض على الشريان الفخذي وتقطع البشرة طولياً لطول حوالي سنتيمترين في المكان الذي يكون فيه النبض واضحًا.
تشريح اللفافة والعضلات لتصور حزمة الأوعية العصبية. بعد ذلك، تشريح الوريد الفخذي من حزمة الأوعية العصبية. أولا الأعصاب، ثم الشريان الفخذي ومن ثم الوريد.
كن حذرا أثناء تشريح الحزمة لأن العديد من الفروع الصغيرة من الوريد الفخذي قد يكون معطوبا بسهولة. التالي وضع اثنين من الأربطة على الوريد الفخذي. لا تربط العقدة حتى الآن.
قبض على نهايات الرباط القريب مع حامل إبرة. ثم سحب بعناية ينتهي الأربطة مع حامل صعودا لإغلاق الجزء القريب من الوريد. انتظر حتى يمتلئ الوريد بالدم ويربط العقدة البعيدة.
بعد ذلك، قم بعمل شق صغير على الوريد بين العقدة واللرابطة القريبة باستخدام مقص ميكروسوري. ثم أدخل القسطرة باستخدام ملاقط أو إبرة ذات نهاية منحنية كما نفعل في الفيديو. ثقب الوريد واستخدام طرف عازمة من الإبرة كدليل للقسطرة.
قم بفك الرباط القريب أثناء إدخال القسطرة. أدخل القسطرة لمدة ستة إلى سبعة سنتيمترات تقريبًا اعتمادًا على حجم الحيوان لوضع الطرف القريب من القسطرة في الوريد السفلي في الأجوف السفلي فوق التقاء الوريد الكبدي. يجب تأكيد الموضع الصحيح للقسطرة بعد التجربة.
قم بتأمين القسطرة في الوريد الفخذي مع عقدتين جراحيتين مفردتين. ربط الرباط القريب كذلك. تحقق من رعاية القسطرة عن طريق محاولة سحب الدم مع حقنة.
شطف القسطرة مع 0.3 ملليلتر من المالحة heparinized. أغلق الجرح الجراحي بطبقتين من الغرز المفردة. الآن ننتقل إلى القسطرة الوريدية المدخل.
إعداد القسطرة المدخل. وهو يتألف من إبرة، قسطرة البولي يوريثان مرنة، مرنة طرف البولي ايثيلين من القسطرة، والمكونات، والربط. الخطوة الأولى من الإجراء هو إجراء استئصال البطن خط الوسط.
بعد إعداد حقل التشغيل ، قطع الجلد طوليا من xiphoid من القص إلى السرة. قطع عضلات جدار البطن على طول الخط الأبيض. المقبل، وتوسيع خفض rostrally في شكل y بحيث الغضروف xiphoid هو بين اثنين من التخفيضات.
الخطوة التالية هي تشريح الوريد المدخل. أولا، ترطيب مسحات مع المالحة. ثم الخارجي cecum، القولون التصاعدي والمتحول، وحلقة الأمعاء الدقيقة.
وضع الأمعاء على الجانب الأيسر لفضح جذر المينتيرتي. غطي الأمعاء بالشاش المبلل بملوحة فسيولوجية لحمايتها من التجفيف. لفضح الوريد المدخل تحرك بعناية الفصوص الكبدية إلى الجانبين أو صعودا نحو الحجاب الحاجز مع مسحات مبللة.
هنا يمكننا أن نرى الوريد المدخل والوريد الميenteric العلوي. توطين جزء من الوريد المدخل التي لا تغطيها mesentery وتمرير الرباط تحت الوريد المدخل. لحماية الأنسجة من التلف، قم بلل الرباط بمحلول ملحي فسيولوجي.
المشبك مع الوغام نهايات الرباط وتشديد بلطف لتحقيق الاستقرار في السفينة. مرر الجزء الأطول من رباط القسطرة تحت الجزء الحر من الوريد المدخلي واسحبه بحيث يقع القسطرة بجوار الوريد المدخلي. أدخل الإبرة في الوريد الميكر الأعلى ثلاثة ملليمترات تحت تقاطع الوريد الميكبر العلوي والوريد المدخلي.
عقد الإبرة في زاوية 30 درجة وبعد الدخول في الوريد تقليل الزاوية وتقدم الإبرة أفقيا تقريبا بالتوازي مع الوريد المدخل لطول ما يقرب من ستة إلى سبعة ملليمترات. تطبيق واحدة أو اثنين من قطرات من الغراء الأنسجة في المكان الذي يتم إدخال الإبرة. إزالة مسحات التي غطت الكبد.
بعد ذلك وضع الأمعاء مرة أخرى إلى تجويف البطن. ترطيب الأمعاء بمحلول ملحي محمّد وغطّه بشاش معقمة مبللة. تحقق من طفح القسطرة وشطف القسطرة مع الملحية heparinized.
الدم الوريدي تلقائياً بالتدفقات الخلفية في القسطرة. بعد خمس دقائق تحقق من لون الأمعاء والحركات الرادلية للتأكد من الحفاظ على تدفق الدم المساريق السليم. في النهاية، أغلق تجويف البطن بثلاث طبقات من الغرز الخارجية الجزء من القسطرة حول السرة.
لجمع الدم من الوريد المدخل، افتح قابس القسطرة البوابة واترك الدم يتدفق بحرية. استخدام حقنة وإبرة حادة وجمع ما لا يزيد عن 0.7 ملليلتر من الدم. شطف القسطرة مع المالحة heparinized وإغلاق المكونات القسطرة.
هنا نقدم مثالية بروتوكولات أخذ عينات الدم بوابة لتقييم نفاذية الأمعاء. عينات الدم من الكافا الوريدي السفلي ضرورية لإزالة الكبد ودراسات الاستيعاب. لجمع الدم من الوريد السفلي cava المضي قدما تماما كما هو الحال عندما أخذ الدم من الوريد المدخل.
هنا نقدم بروتوكول عينات دم مثالي لقياس إزالة الكبد وتتبع مسار الدم في الدم في مدخل الأمعاء والكبد والنظامية للمركبات المختارة. في دراساتنا استخدمنا المستقلب البكتيري، تريميثيلامين كعلامة على نفاذية. ولكن يمكن استخدام العديد من المواد الأخرى بما في ذلك علامات نفاذية الفئة كذلك.
ويمكن أيضاً استخدام البكتيريا المختلفة ونواتج المستقلبات والممرات في عملية التمكن من الحصول على مسار الامتصاص أو إزالة الكبد. إزالة guidewire وتضخيم البالون باستخدام حجم كاف من الماء العقيم عادة واحد milliliter ولكن تحقق في الواقع حجم البالون قبل الإدراج. يجب أن لا يتجاوز قطر البالون سنتيمتر واحد.
ضع رأس الجرذ لأسفل لتقليل خطر تدفق المحلل المُدار من القولون. إدارة ببطء المادة اختبارها باستخدام منفذ الصرف والقسطرة القولونية. استخدمنا تريثيلامين في جرعة من 100 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم المذاب في 0.7 ملليلتر من المالحة.
بعد عشر دقائق فرغ بالون القسطرة. يمكن التعبير عن إزالة الكبد يفهم على أنه استخراج الكبد عن طريق الفرق بين تركيز الدم المدخل وتركيز الدم الكافا الوريدي السفلي أو من خلال نسبة الوريد السفلي cava وبوابة تركيز الدم. لقد قمنا بقياس نفاذية حاجز الدم الأمعاء بنجاح وإزالة الكبد من تريميثيلامين في الفئران.
وهنا النتائج التمثيلية التي تثبت أن ارتفاع ضغط الدم الفئران قد زادت نفاذية القولون ل TMA بالمقارنة مع الفئران normotensive. في بحث آخر درسنا ما إذا كان ارتفاع تناول الملح يؤثر على نفاذية حاجز الأمعاء والدم وإزالة الكبد من تريميتيلامين. أنتجت الإدارة داخل القولون من ثلاثيthylamine زيادة كبيرة في تركيز الدم بوابة TMA.
وكان حجم الزيادة وإزالة الكبد متشابهين بين المجموعتين. كما تتبعنا مسار امتصاص الأحماض الدهنية السلسلة القصيرة. قمنا بقياس التركيز في البراز، دم البوابة والدم المحيطي.
في هذا الفيديو وصفنا بروتوكول شامل يتضمن القياس المباشر لنفاذية حاجز الدم الأمعاء في الجسم الحي الذي، على عكس الطرق المستخدمة عادة، لا يتأثر وظائف الكبد والكلى، وقياس إزالة الكبد، والثالث، تقييم مسار امتصاص المركبات الخارجية. ويمكن تعديل التقنية المقدمة للأغراض التجريبية الأخرى. على سبيل المثال، قياس ضغط الدم المدخل أو إدارة المخدرات مباشرة إلى الوريد المدخل.
