يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التمثيل الغذائي مثل، كيف يتم تغيير النشاط الأيضي أثناء عملية الشيخوخة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي استخدام شريحة الجسم سليمة التي لديها البيانات التي تشبه إلى حد كبير الحالة الطبيعية والفسيولوجية بالمقارنة مع العزلة الميتوكوندريا الكلاسيكية. إثبات الإجراء سيكون أنوروب وأنيكا، طالب غراد في مختبري.
لبدء البروتوكول، قم بتشغيل الجهاز قبل ساعة واحدة من بدء التجربة بحيث يكون هناك وقت كاف للوصول إلى درجة الحرارة المطلوبة والبقاء مستقرة. ثم، في إعداد البرنامج، تحت وضع الإدارة، اختر طول معايرة الخراطيش ودرجة الحرارة المطلوبة. ثم أدخل البروتوكول التالي: بناءً على التصميم التجريبي، أضف خطوات الحقن من المنافذ A إلى D بعد خطوة القياس المختارة.
للتحقق من جودة وتحديد التعرف الضوئي على الحروف القاعدية، ضبط البروتوكول لثلاث دورات قياس على الأقل قبل وضع حقن الدواء الأول عبر المنفذ A.Pre-معايرة خرطوشة يوم واحد، أو على الأقل أربع ساعات قبل الاختبار، عن طريق إضافة 1.0 ملليلتر من الفرج إلى كل بئر، ووضع خرطوشة الاستشعار على رأس لوحة. غطي الكارتريدج بالبارا فيلم إذا كان من المقرر أن ترطب لأكثر من 24 ساعة لمنع التبخر. تخزين خرطوشة في 37 درجة مئوية دون CO2، بين عشية وضحاها.
بعد ذلك، تأكد من أن الأدوية التجريبية تذوب تمامًا في وسط جديد، بالإضافة إلى 2.5٪ من الجلوكوز. قياس وضبط درجة اله من محلول الدواء لدرجة الH في السيارة في درجة الحرارة المطلوبة. الماصات حل المخدرات في انها خصصت ميناء الحقن.
ثم قم بتحميل الكارتريدج في الجهاز وابدأ المعايرة. ضبط وسائل الاعلام الطازجة بالإضافة إلى 2.5٪ الجلوكوز إلى درجة ح H المطلوب مع واحد HCl العادية. بعد ذلك، قم بإعداد صندوق ثلج ووضع لوحة معدنية على الجليد.
فتح حزمة لوحة العين. تزج الشباك في وسائل الإعلام من قبل 16 ملليمتر طبق بيتري. جمع صافي واحد مع إدراج ويكون إدراج الوقوف بجانب المجهر.
إضافة قطرة صغيرة من الوسائط إلى الشبكة المرفقة إلى مُدرج. ثم تخدير الذباب بوضعه على لوحة معدنية باردة الجليد. باستخدام ملقط، والاستيلاء على بطن ذبابة وتزج في وسائل الإعلام في طبق بيتري تحت المجهر.
باستخدام زوج من ملقط الثانية، وإزالة بلطف رأس ذبابة. ضع الرأس في منتصف الشبكة المرفقة بالمدرج، وتحقق من أن الرأس مغمور في الوسائط. إزالة السوائل الزائدة عن الحاجة قبل توسيط رؤساء لتجنب فقدان الرؤوس في حين وضعها في البئر.
عندما يكون هناك 16 رؤساء على الشبكة، مركز لهم. باستخدام مُدرج، ضع الشبكة في البئر. تأكد من أن يتم المحاصرين رؤساء تحت الشبكة وإضافة ببطء 700 ميكرولترات من وسائل الإعلام بالإضافة إلى 2.5٪ الجلوكوز.
تأكد من أن الآبار الفارغة، التي تستخدم للخلفية، تحتوي أيضا على شبكة مع 700 ميكرولترات من المخزن المؤقت بالإضافة إلى 2.5٪ من الجلوكوز. تحقق من الآبار لفقاعات الهواء تحت الشباك عبر المجهر. الماصة بلطف صعودا وهبوطا باستخدام ماصة ملليمتر واحد لإزالة أي فقاعات.
حافظ على تمركز الرؤوس للحصول على قراءة موثوقة لـ OCR. ثم إضافة لوحة إلى الجهاز وبدء القياس. في نهاية البروتوكول، قم بإزالة الكارتريدج.
يؤكد بصريا أنه لا توجد بقايا واضحة في حشوات الميناء. بعد ذلك، تخلص من الخراطيش وطبقة إذا كانت الرؤوس لا تستخدم لاستخراج البروتين. تذكر أن ننظر إلى الأوكسجين ومستويات اله PH، من أجل الكشف عن أي آبار غير طبيعية قبل التحليل.
وعلاوة على ذلك، من المهم اختيار حساب معدل استهلاك الأكسجين المناسب، استنادا إلى مستويات الأكسجين. عند تنفيذ البروتوكول ، لوحظ أن مستويات الأكسجين من رؤساء منتصف العمر انخفض أسرع من رؤوس الذبابة الشباب. عندما يكون نطاق مستويات الأكسجين مشابهًا بين الظروف، فمن الأفضل استخدام خوارزمية AKOS لتوليد معدل استهلاك الأكسجين تلقائيًا، أو OCR، الذي يعكس بشكل موثوق التغيرات في مستوى الأكسجين أثناء القياس بين رؤساء الشباب مقابل رؤساء منتصف العمر.
إضافة باسيرات الصوديوم، أو SB، مثبط KDAC، يغير بشكل عابر ديناميات مستويات الأكسجين. في حين أن عناصر التحكم في السيارة تعرض مستويات ثابتة من الأكسجين خلال القراد الأول والأخير ، فإن SB بالإضافة إلى ذلك يسبب انخفاضًا كبيرًا وعابرًا لمستويات الأكسجين في هذه القراد. لأن حساب AKOS يأخذ في الاعتبار جميع القراد ويتجاهل حالة aoxic ، فإنه يولد OCR مضللة ، كما لوحظ في مستويات التعرف الضوئي على الحروف غير طبيعية AKOS ، والتي تظهر تغييرًا بسيطًا عند حقن خوارزمية A.The الثابتة المنفذ ، والتي تُظهر بشكل أكثر قربًا وتشبه تغييرات مستوى OCR والأكسجين ، تكشف عن زيادة OCR عند علاج SB.
عند محاولة هذا الإجراء، من المهم العمل مع شخصين معا من أجل ضمان فترة قصيرة نسبيا من الوقت لإعداد لوحة واحدة. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق كيميائية حيوية أخرى، مثل البلوط الغربي وقياس الطيف الكتلي للإجابة على الأسئلة المتعلقة بالآليات الجزيئية، على سبيل المثال، تلك التي تلطف التعديلات الأيضية.
