إحدى مزايا هذا البروتوكول هو أن ورقة الفيروس المتنقل سهلة التعامل معها. تحتوي الورقة على ميزات تمنع التجفيف، مما يمكننا من إجراء تشعيع الميكروبات للحيوانات الحية، وإجراء العديد من التشطيبات السلوكية، والمراقبة على المدى الطويل. القنوات microfluidic في هذه الورقة دودة مفتوحة، مما يجعل من الأسهل لجمع الحيوانات.
ويمكن أيضا أن تستخدم هذه الأوراق دودة مرارا وتكرارا، مما يجعلها أكثر اقتصادا. عندما كنا نطور هذه التقنية، أردنا أن نشعع جزءًا فقط من الحيوانات بميكروبات تحت المجهر. لذا احتجنا رقائق واضحة ورقيقة جداً قادرة على حمل الحيوانات
للبدء، ضع ورقة رقيقة وشفافة على المسرح لاستخدامها كفيلم غلاف أسفل. ضع ورقة دودة بلطف على غلاف الفيلم السفلي مع ملاقط مسطحة. ضع ثلاث قطرات على الأقل من محلول عازل على سطح طبق بيتري 6 سنتيمتر وغير معالج.
ثم، اختيار العديد من الكبار C.elegans مع منتقي platina من لوحة الثقافة. نقل الحيوانات إلى قطرات مع منتقي بلاتينا والسماح للحيوانات للسباحة في المخزن المؤقت لإزالة أي بكتيريا. اغسل الحيوانات في قطرتين منفصلتين وشطف الحيوانات في قطرة أخرى.
بعد ذلك، ضع قطرة من حل العازلة على سطح ورقة worm. إزالة الحيوانات المغسولة من قطرات العازلة، ونقلها إلى قطرة على ورقة دودة. استخدم ملاقط مسطحة لوضع فيلم تغطية PS على ورقة دودة، واضغط بلطف على القنوات من نهاية واحدة من الورقة إلى أخرى.
أو ببساطة إسقاط الحيوانات في قطرات وختم بلطف مع غلاف الفيلم حتى قطرات ينتشر بين الغطاء وملاءات دودة مع الحيوانات داخل القناة. تأكد من أن الحيوانات على قيد الحياة عن طريق التحقق من الحركة مع المجهر في التكبير 1-2x. تسجيل مواقع animal'and ملاحظة على وجه التحديد عدد القناة التي كل المغلقة، وموقف كل في القناة.
لجمع الحيوانات التي شل الحركة، واستخدام ملاقط مسطحة لإزالة غلاف الفيلم من ورقة دودة، ثم إسقاط 10-15 ميكرولترات من حل عازلة على واحدة من القنوات microfluidic إحاطة الحيوانات. تحت الميكروسكوب، مراقبة الحيوانات لأنها تبدأ في الدوران. ثم استخدام منتقي platina لالتقاط الحيوانات السباحة ونقلها إلى لوحة فحص.
بعد إحاطة الحيوانات كما أظهرت سابقا، ومراقبة البقع الفلورية على الحيوانات مع مجهر دقيق. ثم صورة أيونات موجة انتشار باستخدام اقتناء الفيديو لمراقبة الأنشطة الديناميكية. ضع ورقة الديدان المستخدمة على طبق بتري- سنتيمتر ستة ووضع حوالي 100 ميكرولترات من المياه فائقة النقاء المعقمة على الورقة.
استخدام أصابع قفاز لنشر المياه على سطح ورقة وغسل قبالة أي الملوثات. بعد ذلك، استخدم مناديل يمكن التخلص منها لإزالة الرطوبة من ورقة الفيروس المتنقل. الاستغناء عن خمسة ملليلتر من 70٪ الإيثانول في طبق بيتري واستخدام الأصابع قفاز لنشر الإيثانول على ورقة دودة.
وأخيرا، بعد أن تكون ورقة جافة، ووضع ورقة على طبق بيتري العقيمة وتغطية. باستخدام هذا البروتوكول، تم التحقيق في مدى ملاءمة أفلام الغلاف المختلفة. لم يكن هناك فرق كبير في الحركة بين الحيوانات التحكم والحيوانات المغلقة في قنوات microfluidic مع فيلم PS.
في المقابل، تم تقليل الحركة بشكل كبير في الحيوانات المغلقة تحت غطاء الزجاج. كما انخفضت حركة الحيوانات المغلقة مع فيلم الحيوانات الأليفة بشكل كبير. من المهم تحديد تغطية الأفلام لختم القنوات microfluidic بعناية.
باستخدام هذا البروتوكول ، قمنا بتقييم مدى ملاءمة أفلام الغلاف المختلفة من خلال عمليات قياس الحركة للحيوانات بعد ثلاث ساعات من التثبيت على الشريحة. باستخدام هذه التقنية، كنا ننوي تطوير رقاقة مبللة رقيقة للغاية فقط للإشعاع الميكروبي. ومع ذلك، هذه الأوراق دودة قد استخدمت بالفعل للتصوير والتشذات السلوكية خارج تطبيقاتها الأصلية.
