אחד היתרונות של פרוטוקול זה הוא כי גיליון התולעת קל לטפל. הסדין כולל תכונות המונעות ייבוש, ומאפשרות לנו לבצע הקרנה מיקרו-קרן לבעלי חיים חיים, לבצע מספר בדיקות התנהגותיות והתבוננות ארוכת טווח. הערוצים המיקרופלואידיים בסדין תולעת זה פתוחים, מה שמקל על איסוף בעלי חיים.
יריעות תולעת אלה יכולות לשמש גם שוב ושוב, מה שהופך אותם חסכוניים יותר. כשפיתרנו את הטכניקה הזו, רצינו להקרנה רק חלק מבעלי החיים עם חיידק תחת מיקרוסקופ. אז היינו צריכים שבבים ברורים ודקים מאוד המסוגלים להחזיק את החיות.
כדי להתחיל, מקם גיליון דק ושקוף על הבמה לשימוש כסרט כיסוי תחתון. מקם בעדינות גיליון תולעת על סרט הכיסוי התחתון עם פינצטה שטוחה. מניחים לפחות שלוש טיפות של פתרון חיץ על פני השטח של צלחת פטרי 6 ס"מ, לא מטופלת.
לאחר מכן, בחרו כמה C.elegans בוגרים עם קוטף פלטינה מצלחת תרבות. מעבירים את בעלי החיים ל טיפה עם קוטף פלטינה ומאפשרים לבעלי החיים לשחות בחרץ כדי להסיר חיידקים. לשטוף את בעלי החיים בשתי טיפות נפרדות ולשטוף את בעלי החיים טיפה אחרת.
לאחר מכן, מקם טיפה של פתרון חיץ על פני השטח של גיליון התולעת. מוציאים את החיות השטופות מ טיפת החיץ, ומעבירים אותן ל טיפה על יריעת התולעת. השתמש פינצטה שטוחה כדי למקם סרט כיסוי PS מעל גיליון התולעת, ולחץ בעדינות על הערוצים מקצה אחד של הסדין לקצה השני.
או פשוט לזרוק בעלי חיים לתוך טיפה בעדינות לאטום עם סרט השער כך טיפה מתפשטת בין העטיפה ואת יריעות התולעת עם בעלי החיים בתוך התעלה. אשר את בעלי החיים בחיים על ידי בדיקת תנועה עם מיקרוסקופ בהגדלה 1-2x. תקליטו את מיקומם של בעלי החיים ושים לב באופן ספציפי למספר הערוץ שבו כל חיה סגורה, ולמיקום של כל בעל חיים בערוץ.
לאיסוף בעלי חיים משותקים, השתמש פינצטה שטוחה כדי להסיר את סרט הכיסוי מפני גיליון התולעת, ולאחר מכן זרוק 10-15 microliters של פתרון חיץ על אחד הערוצים microfluidic המקיף את בעלי החיים. תחת הסטריאומיקרוסקופ, התבונן בבעלי החיים כשהם מתחילים להסתובב. לאחר מכן השתמשו בקוטף הפלטינה כדי לאסוף את חיות השחייה ולהעביר אותן לצלחת מים.
לאחר ההקף את בעלי החיים כפי שהוכח בעבר, להתבונן כתמים פלואורסצנטיים על בעלי החיים עם מיקרוסקופ flourescence. לאחר מכן, הפצת גל הסידן באמצעות רכישת וידאו כדי לצפות בפעילויות דינמיות. מניחים את יריעת התולעת המשמשת על צלחת פטרי באורך שישה סנטימטרים וממקמים על הסדין כ-100 מיקרוליטרים של מים סטריליים אולטרה-טהורים.
השתמש באצבעות כפפות כדי להפיץ מים על פני השטח של הסדין ולשטוף את כל מזהמים. לאחר מכן, השתמש במגבונים חד פעמיים כדי להסיר את הלחות מפני גיליון התולעת. מחלקים חמישה מיליליטר של 70% אתנול לתוך צלחת פטרי ולהשתמש באצבעות כפפות כדי להפיץ את האתנול על יריעת התולעת.
לבסוף, לאחר הסדין יבש, מניחים את הסדין על צלחת פטרי סטרילית לכסות. באמצעות פרוטוקול זה נחקרה התאמתם של סרטי כיסוי שונים. לא היה הבדל משמעותי במניע בין חיות בקרה לבעלי חיים המוקף בערוצים מיקרופלואידיים עם סרט PS.
לעומת זאת, תנועתיות הופחתה באופן משמעותי בבעלי חיים סגורים תחת זכוכית כיסוי. תנועתיותם של בעלי חיים המוקף בסרט לחיות מחמד פחתה אף היא באופן משמעותי. חשוב לבחור סרטי כיסוי לאיטום ערוצים מיקרופלואידיים בזהירות.
באמצעות פרוטוקול זה, אנו מעריכים את ההתאמה של סרטי כיסוי שונים באמצעות משגיחי תנועה של בעלי החיים שלוש שעות לאחר קיבוע על שבב. באמצעות טכניקה זו, התכוונו לפתח שבב רטוב דק במיוחד רק להקרנת חיידקים. עם זאת, גיליונות תולעת אלה כבר שימשו להדמיה ומסיעים התנהגותיים מעבר ליישומים המקוריים שלהם.
