يمكن استخدام هذا البروتوكول للحث على ارتفاع ضغط الدم الرئوي وإجراء قياسات وظيفية للبطين الأيمن. نموذج نقص الأكسجة سوغن من السهل تنفيذ ويمكن أن تُكَلَم ببعض السمات المميزة لارتفاع ضغط الدم الرئوي في غضون أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع من الحث. وباستخدام هذا النموذج، يمكننا تحديد المسارات الجديدة التي ينطوي عليها تطور المرض.
يمكننا تحديد أهداف جديدة واختبار إمكاناتها العلاجية. قبل البدء في إجراء الحث، خزانات النيتروجين آمنة بالقرب من غرفة نقص الأكسجة وتعيين وحدة تحكم الأكسجين في نقطة من 10٪ الأكسجين. المقبل, تحميل الطازجة التي أعدت SU5416 حل في حقنة واحدة ملليلتر واحدة مجهزة إبرة قياس 25 وكبح جماح يدويا الحيوان الأول ليتم حقنها.
فهم الجلد لتشكيل خيمة موازية للعمود الفقري مع التأكد من فهم الجزء الخلفي من الرأس بإحكام لتجنب إصابة لدغة محتملة من قبل الماوس. أدخل الإبرة تحت الجلد فوق الجناح في طي الجلد الفضفاض بالتوازي مع الجلد، ثم قم بتسليم 100 ميكرولترات من محتويات الحقنة. بعد 10 ثوان، سحب الإبرة والعودة إلى قفص الحيوان.
عندما يتم حقن جميع الحيوانات ، ضع الفئران في غرفة نقص الأكسجة التهوية. بالنسبة للتعرض لنقص الأكسجة، تأكد من أن الغرف مجهزة بمستشعر أكسجين لقياس مستوى الأكسجين وفتح الغرف لمدة لا تزيد عن 20 دقيقة كل ثلاثة أيام لتنظيف وإضافة الطعام والماء. تفقد الحيوانات يوميا لعلامات الإجهاد وتكرار حقن SU5416 أسبوعيا لمدة ثلاثة أسابيع متتالية.
قبل البدء في إجراء قياس الضغط، قم بإعداد موصل أنبوب Y واستخدم الوضع اليدوي للتحقق من وظيفة جهاز التنفس الصناعي. تعيين الضغط الهمي إلى أقل من سنتيمتر واحد من الماء لتجنب barotrauma وتعيين معدل التنفس إلى 110 نفسا في الدقيقة الواحدة. قطع قسطرة داخل الأوعية 20 قياس لإنشاء أنبوب بطانة وتشغيل وحدة التحكم في حجم الضغط.
بدء برنامج الحصول على البيانات ووضع قسطرة حجم الضغط في أنبوب الطرد المركزي 15 ملليلتر من برنامج تلفزيوني في حمام الماء 37 درجة مئوية. ثم معايرة القسطرة وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. ضع الماوس على وسادة التدفئة ووضع مسبار المستقيم لمراقبة درجة حرارة الجسم.
بعد ذلك، تأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع في فأر مُقصّر وحلق الرقبة والصدر. تأمين أطراف الماوس مع الشريط الجراحي وجعل شق سنتيمتر واحد في الجلد عنق الرحم الوسط. باستخدام قضيب قطن يميل، يفصل بصراحة الغدد اللعابية parotid و تحت المهاجع لفضح العضلات الكامنة في القصبة الهوائية.
قطع العضلات بعناية لكشف تماما القصبة الهوائية واستخدام مقص لجعل شق صغير بين الغضاريف القصبي. أدخل أنبوب البطارخي المعد وإزالة الدليل المعدني من القسطرة داخل الأوعية. ثم قم بتوصيل القسطرة بجهاز التنفس الصناعي والتحقق من وضع أنبوب القصبة الهوائية عن طريق نفخ الرئتين يدوياً بلطف.
تأمين الموقف مع الشريط. لقياس ضغط البطين الأيمن، وجعل شق الجلد سنتيمتر واحد على عملية xiphoid وأعلى البطن وتبدأ من خط الوسط إلى xiphoid وتتحرك بعناية في الجانبين، وفصل الجلد على الصدر وجدار البطن. فتح تجويف البطن، وقطع الحجاب الحاجز بعناية، مع الحرص على عدم إصابة القلب النابض أو الرئتين.
واستخدام قضيب قطن يميل لإزالة بلطف من الم pericardium. جلب القسطرة الضغط بالقرب من الماوس واستخدام قضيب قطن يميل مجهزة إبرة لجعل طعنة في الجزء غير نمطي من البطين الأيمن. استبدل الإبرة بعناية بقسطرة الضغط، مع إدخال قسطرة الضغط بالتوازي مع اتجاه البطين الأيمن مع الطرف الذي يواجه الشريان الرئوي.
شاهد مسار موجة الضغط لضمان تحديد موضع القسطرة بشكل صحيح. بمجرد أن تستقر إشارة الضغط، قم بإيقاف التنفس والحصول على ثلاثة قياسات على الأقل. عندما يتم تسجيل جميع القياسات، قم بإعادة القسطرة بعناية إلى أنبوب الطرد المركزي المملوء بـ PBS في حمام الماء.
هنا، تظهر منحنيات الضغط التمثيلية والتحليل الكمي للضغط البطيني الأيمن في نهاية فترة المراقبة. التحليل النسيجي للشرايين الرئوية المعاد تشكيلها بعد نقص الأكسجة بالإضافة إلى SU5416 العلاج يكشف عن زيادة في سمك الجدار المتوسط مقارنة مع الحيوانات نورموكسيك. القمح الجرثومة agglutinin تلطيخ لتقييم تضخم القلبية أوكسيدو تشير إلى أن نقص الأكسجة بالإضافة إلى SU5416 نتائج في زيادة ملحوظة في حجم القلب وتضخم البطين الأيمن.
علاوة على ذلك، يؤكد التقييم المُرفومي للتضخم البطيني الأيمن عن طريق قياس مؤشر فولتون حدوث زيادة في تضخم البطين الأيمن في الحيوانات النافقة. إن إجراء القياسات الوظيفية أمر مهم لتجنب النزيف لأن هذا يمكن أن يؤثر سلبًا على نتائج الدراسة. ويمكن أيضا أن يستخدم هذا البروتوكول للحث على ارتفاع ضغط الدم الرئوي في الفئران مع تعديلات طفيفة فقط.
وتجدر الإشارة إلى أن حقنة Sugen واحدة فقط في الفئران كافية للحث على ارتفاع ضغط الدم الرئوي.
