פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לגרום יתר לחץ דם ריאתי ולבצע מדידות תפקודיות של החדר הימני. מודל היפוקסיה סוגן קל ליישם והוא יכול recapitulate כמה סימני ההיכר של יתר לחץ דם ריאתי בתוך שבועיים עד שלושה שבועות של אינדוקציה. באמצעות מודל זה, אנו יכולים לזהות מסלולים חדשים המעורבים בהתפתחות המחלה.
אנחנו יכולים לזהות מטרות חדשות ולבדוק את הפוטנציאל הטיפולי שלהם. לפני תחילת הליך אינדוקציה, לאבטח מיכלי חנקן ליד התא hypoxic ולהגדיר את בקר החמצן בנקודה של 10%חמצן. לאחר מכן, לטעון פתרון SU5416 מוכן טרי לתוך מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט 25 מד ידני לרסן את החיה הראשונה להיות מוזרק.
לתפוס את העור כדי ליצור אוהל במקביל עמוד השדרה הקפדה לתפוס את החלק האחורי של הראש בחוזקה, כדי למנוע פגיעה פוטנציאלית לנשוך על ידי העכבר. הכנס את המחט תת עורית מעל האגף על קפל העור רופף במקביל לעור ולספק 100 microliters של תוכן המזרק. לאחר 10 שניות, למשוך את המחט ולהחזיר את החיה לכלוב שלה.
כאשר כל החיות הוזרקו, מניחים את העכברים בתא היפוקסיה מאוורר. לחשיפה להיפוקסיה, ודאו כי התאים מצוידים בחיישן חמצן למדידת רמת החמצן ולפתיחת התאים למשך לא יותר מ-20 דקות כל שלושה ימים לניקוי והוספת מזון ומים. בדוק בעלי חיים מדי יום לסימני לחץ וחזור על הזרקת SU5416 מדי שבוע במשך שלושה שבועות רצופים.
לפני התחלת הליך מדידת הלחץ, להכין את מחבר צינור Y ולהשתמש במצב הידני כדי לבדוק את הפונקציה של מכונת ההנשמה. הגדר את הלחץ ההשראה פחות מס"מ אחד של מים כדי למנוע barotrauma ולהגדיר את קצב הנשימה ל 110 נשימות לדקה. חותכים קטטר תוך וסקולרי 20 מד כדי ליצור צינור אנדוטראצ'ל ולהדליק את יחידת בקרת עוצמת הלחץ.
ליזום את התוכנה לרכישת נתונים ולמקום את קטטר נפח הלחץ בצינור צנטריפוגה 15 מיליליטר של PBS באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן כייל את הקטטר בהתאם לפרוטוקול היצרן. מניחים את העכבר על משטח חימום ומ מניחים בדיקה רקטלית לניטור טמפרטורת הגוף.
לאחר מכן, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן בעכבר הרדמה לגלח את הצוואר ואת אזורי החזה. לאבטח את הגפיים של העכבר עם סרט כירורגי ולעשות חתך של סנטימטר אחד בעור צוואר הרחם המדיקל. באמצעות מוליך כותנה, בבוטות להפריד את parotid ו בלוטות הרוק submandibular לחשוף את השרירים מתחת קנה הנשימה.
בזהירות לחתוך את השרירים כדי לחשוף באופן מלא את קנה הנשימה ולהשתמש מספריים לעשות חתך קטן בין הסחוסים קנה הנשימה. הכנס את צינור אנדוטראצ'ל מוכן ולהסיר את מדריך המתכת של קטטר תוך וסקולרי. לאחר מכן חבר את הקטטר למכונת ההנשמה ואמת את מיקום צינור קנה הנשימה על ידי ניפוח ידני של הריאות.
אבטח את המיקום עם קלטת. למדידת לחץ החדר הימני, בצע חתך עור של סנטימטר אחד מעל תהליך xiphoid והבטן העליונה ומתחיל בקו האמצעי דיסטלי כדי xiphoid בזהירות נעה באופן צדדי משני הצדדים, להפריד את העור על החזה ואת דופן הבטן. פותחים את חלל הבטן, חותכים את הסרעפת בזהירות, דואגים לא לפגוע בלב הפועם או בריאות.
ולהשתמש במוליך כותנה הטה להסיר בעדינות את pericardium. הביאו את קטטר הלחץ ליד העכבר ולהשתמש במוליך כותנה עם קצה מצויד במחט כדי להפוך פצע דקירה בחלק הדיסטלי הלא טיפוסי של החדר הימני. בזהירות להחליף את המחט עם קטטר לחץ, החדרת קטטר הלחץ במקביל לכיוון החדר הימני עם הקצה מול עורק הריאה.
צפה מעקב גל הלחץ כדי להבטיח מיקום נכון של הקטטר. לאחר שאות הלחץ התייצב, השהה את הנשימה והשג לפחות שלוש מדידות. כאשר כל המדידות נרשמו, בזהירות להחזיר את הקטטר לצינור צנטריפוגה מלא PBS באמבט המים.
כאן מוצגים עקומות לחץ ייצוגיות וניתוח כמותי של הלחץ בחדר הימני בסוף תקופת התצפית. ניתוח היסטולוגי של עורקי ריאה משופץ לאחר היפוקסיה בתוספת טיפול SU5416 מגלה עלייה בעובי הקיר המדילי בהשוואה לבעלי חיים נורמוקסיים. נבט חיטה agglutinin כתמים כדי להעריך היפרטרופיה cardiomyocyte מציין כי היפוקסיה בתוספת SU5416 חשיפה תוצאות עלייה ניכרת בגודל cardiomyocyte והיפרטרופיה חדרית ימין.
יתר על כן, הערכה מורפומטרית של היפרטרופיה חדרית נכונה על ידי מדידת מדד פולטון מאשרת עלייה בהיפרטרופיה חדרית נכונה בבעלי החיים היפוקסיים. ביצוע המדידות הפונקציונליות חשוב כדי למנוע דימום כי זה יכול להשפיע לרעה על תוצאות המחקר. פרוטוקול זה יכול לשמש גם כדי לגרום יתר לחץ דם ריאתי בחולדות עם שינויים קלים בלבד.
יש לציין, רק זריקת סוגן אחת בחולדות מספיקה כדי לגרום יתר לחץ דם ריאתי.
