Bu protokol pulmoner hipertansiyonu indüklemek ve sağ ventrikülün fonksiyonel ölçümlerini yapmak için kullanılabilir. Sugen Hipoksi Modeli'nin uygulanması kolaydır ve indüksiyondan sonraki iki ila üç hafta içinde pulmoner hipertansiyonun bazı özelliklerini özetleyebilir. Bu modeli kullanarak, hastalığın gelişiminde rol oynayan yeni yolları belirleyebiliriz.
Yeni hedefleri belirleyebilir ve tedavi potansiyellerini test edebiliriz. İndüksiyon işlemine başlamadan önce, azot tanklarını hipoksik haznenin yakınına sabitler ve oksijen kontrol cihazını %10 oksijen noktasına ayarlayın. Daha sonra, taze hazırlanmış SU5416 çözeltisini 25 gauge iğneile donatılmış bir mililitreşşile rendelendirve enjekte edilecek ilk hayvanı el ile dizginler.
Fare tarafından olası bir ısırık yaralanmasını önlemek için sıkıca başın arka kavramak için emin olmak omurga paralel bir çadır oluşturmak için deri kavramak. İğneyi deri altı bir şekilde gevşek deri kıvrımına yan tarafa yerleştirin ve şırınga içeriğinin 100 mikrolitresini teslim edin. 10 saniye sonra iğneyi geri çekin ve hayvanı kafesine geri getirin.
Tüm hayvanlara enjekte edildiğinde, fareleri havalandırmalı bir hipoksi odasına yerleştirin. Hipoksiye maruz kalmak için, odaların oksijen seviyesini ölçmek için bir oksijen sensörü ile donatılmış olduğunu onaylayın ve temizlik ve yiyecek ve su eklemek için her üç günde en fazla 20 dakika için odaları açın. Stres belirtileri için günlük hayvanları inceleyin ve üç hafta üst üste SU5416 enjeksiyon haftalık tekrarlayın.
Basınç ölçüm işlemini başlatmadan önce Y tüp konektörünü hazırlayın ve ventilatörün işlevini kontrol etmek için manuel modda kullanın. Barotravmadan kaçınmak için inspiratuar basıncı bir santimetreden daha az suya ayarlayın ve solunum hızını dakikada 110 nefese ayarlayın. Bir endotrakeal tüp oluşturmak ve basınç hacmi kontrol ünitesi açmak için 20 gauge intravasküler kateter kesin.
Veri toplama yazılımını başlatın ve basınç hacmi kateterini 37 derece lik bir su banyosunda 15 mililitrelik bir PBS santrifüj tüpüne yerleştirin. Daha sonra kateteri üreticinin protokolüne göre kalibre edin. Fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin ve vücut ısısını izlemek için rektal bir prob yerleştirin.
Daha sonra, anestezili bir farede parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayın ve boyun ve göğüs bölgelerini tıraş edin. Farenin uzuvlarını cerrahi bantla sabitleyin ve medial servikal deride bir santimetrelik kesi yapın. Bir pamuk uçlu aplikatör kullanarak, trakea altında yatan kasları ortaya çıkarmak için açık sözlü ve submandibular tükürük bezleri nizve.
Dikkatle trakea ortaya çıkarmak için kasları kesin ve trakeal kıkırdak arasında küçük bir kesi yapmak için makas kullanın. Hazırlanan endotrakeal tüpü takın ve intravasküler kateterin metal rehberini çıkarın. Daha sonra kateteri ventilatöre bağlayın ve akciğerleri elle hafifçe şişirerek trakeal tüp pozisyonunu doğrulayın.
Pozisyonu bantla sabitleyin. Sağ ventrikül basınç ölçümü için, ksifoid süreci ve üst karın üzerinde bir santimetre lik deri kesiyapmak ve orta çizgi distal ile xiphoid başlayan ve dikkatle her iki tarafta yanal hareket, göğüs ve karın duvarı üzerinde deri ayırın. Karın boşluğu açılması, dikkatle diyafram kesilmiş, atan kalp veya akciğerlerzarar değil dikkat.
Ve nazikçe perikard kaldırmak için bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. Farenin yanına basınç kateteri getirin ve sağ ventriküla atipik distal kısmında bir bıçak yarası yapmak için bir iğne ile donatılmış bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. İğneyi basınç kateteri ile dikkatlice değiştirin, basınç kateterini sağ ventrikülyonuna paralel olarak pulmoner artere bakacak uçlatın.
Kateterin doğru konumlandırIlmesini sağlamak için basınç dalgasının izini izleyin. Basınç sinyali dengelendikten sonra solunumları duraklatın ve en az üç ölçüm alın. Tüm ölçümler kaydedildiğinde kateteri dikkatlice su banyosundaki PBS dolu santrifüj tüpüne geri döndürün.
Burada, gözlem periyodunun sonunda temsili basınç eğrileri ve sağ ventrikül basıncının nicel analizi gösterilmiştir. Hipoksi artı SU5416 tedavisinden sonra remodele pulmoner arterlerin histolojik analizi normoksik hayvanlara göre medial duvar kalınlığında bir artış olduğunu ortaya koymaktadır. Kardiyomiyosit hipertrofisi değerlendirmek için buğday germ agglutinin boyama hipoksi artı SU5416 maruziyetkardiyomiyosit boyutu ve sağ ventrikül hipertrofisi belirgin bir artış ile sonuç gösterir.
Ayrıca Fulton indeksi ölçümü ile sağ ventrikül hipertrofisinin morfometrik değerlendirilmesi hipoksik hayvanlarda sağ ventrikül hipertrofisinde bir artışı doğrular. Fonksiyonel ölçümlerin gerçekleştirilmesi kanamayı önlemek için önemlidir, çünkü bu çalışmanın sonuçlarını olumsuz etkileyebilir. Bu protokol aynı zamanda sadece hafif değişiklikler ile sıçanlarda pulmoner hipertansiyon indüklemek için kullanılabilir.
Özellikle, sıçanlarda sadece bir Sugen enjeksiyonu pulmoner hipertansiyon indüklemek için yeterlidir.
