이 프로토콜은 폐 고혈압을 유도하고 오른쪽 심실의 기능적 측정을 수행하는 데 사용할 수 있습니다. Sugen 저산소증 모델은 구현하기 쉽고 유도 후 2 ~ 3 주 이내에 폐 고혈압의 특징 중 일부를 다시 회수 할 수 있습니다. 이 모형을 사용하여, 우리는 질병의 발달에 관련시킨 새로운 통로를 확인할 수 있습니다.
우리는 새로운 표적을 확인하고 그들의 치료 잠재력을 시험할 수 있습니다. 유도 절차를 시작하기 전에 저산소 챔버 근처의 질소 탱크를 확보하고 산소 컨트롤러를 10 %의 산소 지점에서 설정하십시오. 다음으로, 새로 준비된 SU5416 용액을 25 게이지 바늘을 장착한 1밀리리터 주사기에 적재하고 주입할 첫 번째 동물을 수동으로 억제합니다.
마우스에 의한 잠재적인 물린 부상을 피하기 위하여 머리의 뒤쪽을 단단히 붙잡도록 하는 등뼈에 평행하게 텐트를 형성하기 위하여 피부를 붙잡습니다. 바늘을 피부에 평행하게 접을 때 측면 측면에 피하로 삽입하고 주사기 내용물의 100 마이크로리터를 전달합니다. 10초 후 바늘을 철회하고 동물을 케이지로 돌려놓습니다.
모든 동물이 주입되었을 때, 통풍이 좋은 저산소증 챔버에 마우스를 놓습니다. 저산소증 노출의 경우, 챔버에는 산소 수준을 측정하고 3일마다 20분 간격으로 챔버를 열어 음식과 물을 청소하고 추가하는 산소 센서가 장착되어 있는지 확인하십시오. 매일 동물을 검사하여 스트레스의 징후를 검사하고 3주 연속 SU5416 주사를 반복합니다.
압력 측정 절차를 시작하기 전에 Y 튜브 커넥터를 준비하고 수동 모드를 사용하여 인공호흡기의 기능을 확인합니다. 기압을 피하기 위해 피의 자식기압을 1센티미터 미만으로 설정하고 호흡 속도를 분당 110호흡으로 설정합니다. 20 게이지 인트라바스칸 카테터를 잘라 내막 튜브를 만들고 압력 볼륨 제어 장치를 켭니다.
데이터 수집 소프트웨어를 시작하고 37도 섭씨 수조에 PBS의 15 밀리리터 원심분리기 튜브에 압력 볼륨 카테터를 배치합니다. 그런 다음 제조업체의 프로토콜에 따라 카테터를 보정합니다. 가열 패드에 마우스를 놓고 체온 모니터링을 위해 직장 프로브를 배치합니다.
다음으로, 마취 된 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인하고 목과 가슴 부위를 면도합니다. 수술 용 테이프로 마우스의 사지를 고정하고 내측 자궁 경부 피부에 1 센티미터 절개를합니다. 면 기울어진 어플리케이터를 사용하여, 기관의 근본적인 근육을 드러내기 위하여 parotid 및 감하성 타액 땀샘을 무뚝뚝하게 분리합니다.
조심스럽게 기관을 완전히 노출하고 기관 연골 사이의 작은 절개를 만들기 위해 가위를 사용하여 근육을 잘라. 준비된 내트라큐어 튜브를 삽입하고 내트라바스 내 카테터의 금속 가이드를 제거합니다. 그런 다음 카테터를 인공호흡기에 연결하고 폐를 수동으로 부드럽게 팽창시켜 기관관 위치를 확인합니다.
테이프로 위치를 고정합니다. 오른쪽 심실 압력 측정을 위해, xiphoid 과정과 상부 복부를 통해 1 센티미터 피부 절개를 하고 xiphoid에 단면중간 선에서 시작하고 조심스럽게 양쪽에 측면으로 이동, 가슴과 복부 벽 에 피부를 분리. 복강을 열고 다이어프램을 조심스럽게 자르고, 심장이나 폐를 다치게하지 않도록 주의하십시오.
그리고 면 기울어진 어플리케이터를 사용하여 심낭을 부드럽게 제거합니다. 마우스 근처에 압력 카테터를 가져와 바늘이 장착 된 면 팁 어플리케이터를 사용하여 오른쪽 심실의 비정형 탈스부분에 찔린 상처를 만듭니다. 조심스럽게 압력 카테터로 바늘을 교체, 폐 동맥을 향한 팁과 오른쪽 심실의 방향에 평행 압력 카테터를 삽입.
카테터의 올바른 위치를 보장하기 위해 압력 파 추적을 시청하십시오. 압력 신호가 안정화되면 호흡을 일시 중지하고 적어도 세 가지 측정을 얻습니다. 모든 측정값이 기록되면 카테터를 수조의 PBS 채워진 원심분리기 튜브로 조심스럽게 반환하십시오.
여기서, 관찰 기간이 끝날 때 의대표적인 압력 곡선 및 오른쪽 심실 압력의 정량적 분석이 도시된다. 저산소증 과 SU5416 치료 후 리모델링 된 폐 동맥의 조직학적 분석은 노목 동물에 비해 내측 벽 두께의 증가를 나타낸다. 심근세포 비대증을 평가하기 위한 밀 배암 agglutinin 염색은 저산소증 과 SU5416 노출이 심근세포 크기와 오른쪽 심실 비대에서 현저한 증가를 초래한다는 것을 나타냅니다.
또한, 풀턴 지수의 측정에 의한 오른쪽 심실 비대의 형태측정 평가는 저산소 동물의 오른쪽 심실 비대증의 증가를 확인한다. 이 연구의 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있기 때문에 기능 적 측정을 수행하는 것은 출혈을 방지하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜은 또한 약간의 수정으로 쥐에 있는 폐 고혈압을 유도하기 위하여 이용될 수 있습니다.
특히, 쥐에 있는 단지 1개의 수겐 주사는 폐 고혈압을 유도하기 위하여 충분합니다.
