Этот протокол может быть использован для индуцирования легочной гипертензии и для выполнения функциональных измерений правого желудочка. Модель Sugen Hypoxia проста в реализации и может повторить некоторые признаки легочной гипертензии в течение двух-трех недель после индукции. Используя эту модель, мы можем определить новые пути, участвующие в развитии болезни.
Мы можем определить новые цели и проверить их терапевтический потенциал. Перед началом процедуры индукции, безопасные резервуары азота вблизи гипоксической камеры и установить кислородный контроллер в точке 10%кислорода. Затем загрузите свежеприготовленный раствор SU5416 в один миллилитровый шприц, оснащенный иглой 25 калибра, и вручную сдерживайте первое животное, которое будет введено.
Возьмитесь за кожу, чтобы сформировать палатку параллельно позвоночнику убедившись, чтобы схватить затылок плотно, чтобы избежать потенциальной травмы укуса мышью. Вставьте иглу подкожно над флангом на свободной складке кожи параллельно коже и доставить 100 микролитров содержимого шприца. Через 10 секунд свями иглу и верните животное в клетку.
Когда все животные были введены, поместите мышей в проветриваемой гипоксии камеры. Для воздействия гипоксии, подтвердите, что камеры оснащены датчиком кислорода для измерения уровня кислорода и открыть камеры не более 20 минут каждые три дня для очистки и добавления пищи и воды. Осматривайте животных ежедневно на наличие признаков стресса и повторяйте инъекцию SU5416 еженедельно в течение трех недель подряд.
Перед началом процедуры измерения давления подготовьтесь к разъему трубки Y и используйте ручной режим для проверки функции вентилятора. Установите вовратное давление до менее чем одного сантиметра воды, чтобы избежать баротравмы и установите частоту дыхания до 110 вдохов в минуту. Вырезать 20 калибровочный внутрисосудистый катетер, чтобы создать эндотрахеаную трубку и включить блок контроля громкости давления.
Инициировать программное обеспечение для сбора данных и поместить катетер громкости давления в 15 миллилитровую центрифугу трубки PBS в 37 градусов по Цельсию водяной бане. Затем откалибровать катетер в соответствии с протоколом производителя. Поместите мышь на грелку и поместите ректальный зонд для мониторинга температуры тела.
Далее, подтвердить отсутствие ответа на боль в крайнем случае в анестезированной мыши и брить шею и грудь областях. Защитите конечности мыши хирургической лентой и сделайте один сантиметровый разрез в медиальной коже шейки матки. Использование хлопка наконечником аппликатора, прямо отделить околоушных и подукрепленных слюнных желез подвергать мышцы, лежащие в основе трахеи.
Тщательно сократить мышцы, чтобы полностью разоблачить трахею и использовать ножницы, чтобы сделать небольшой разрез между трахеей хрящей. Вставьте подготовленную эндотрахеаную трубку и удалите металлический направляющий выступ внутрисосудистого катетера. Затем подключите катетер к аппарату искусственной вентиляции легких и проинтуйте положение трахеальной трубки, вручную надув легкие.
Закрети положение лентой. Для измерения давления правого желудочка, сделать один сантиметр кожи разрез над процессом xiphoid и верхней части живота и, начиная с средней линии дистальной к xiphoid и тщательно движущихся боковой с обеих сторон, отделить кожу над грудью и брюшной стенки. Открывая брюшную полость, тщательно перережьте диафрагму, заботясь о том, чтобы не повредить бьющееся сердце или легкие.
И использовать хлопок наконечником аппликатора, чтобы аккуратно удалить перикард. Принесите катетер давления рядом с мышью и используйте хлопок наконечником аппликатор оснащен иглой, чтобы сделать ножевое ранение в нетипичной дистальной части правого желудочка. Тщательно замените иглу катетером давления, вставив катетер давления параллельно направлению правого желудочка кончиком, обращенный к легочной артерии.
Следите за отслеживанием волны давления, чтобы обеспечить правильное позиционирование катетера. Как только сигнал давления стабилизируется, приохтять дыхание и получить по крайней мере три измерения. Когда все измерения были записаны, осторожно вернуть катетер в PBS заполненные центрифуги трубки в водяной бане.
Здесь показаны кривые репрезентативного давления и количественный анализ давления правого желудочка в конце периода наблюдения. Гистологический анализ реконструированных легочных артерий после гипоксии плюс лечение SU5416 показывает увеличение толщины медиальной стенки по сравнению с нормоксическими животными. Окрашивание агглютинина пшеницы для оценки гипертрофии кардиомиоцитов указывает на то, что гипоксия плюс воздействие SU5416 приводит к заметному увеличению размера кардиомиоцитов и гипертрофии правого желудочка.
Кроме того, морфометрическая оценка гипертрофии правого желудочка путем измерения индекса Фултона подтверждает увеличение гипертрофии правого желудочка у гипоксических животных. Выполнение функциональных измерений важно, чтобы избежать кровотечения, потому что это может негативно повлиять на результаты исследования. Этот протокол также может быть использован для индуцирования легочной гипертензии у крыс только с небольшими изменениями.
Примечательно, что только одной инъекции Сугена у крыс достаточно, чтобы вызвать легочную гипертензию.
