بروتوكولنا مهم لأنه يوفر طريقة سهلة للتحقيق في الحواس التي قد تشارك في التثاؤب المعدي في الفئران. استخدام إجراء غير الغازية وتوافر البرمجيات التطبيق، الذي يسرع حساب لقياس التثاؤب المعدية، هي المزايا الرئيسية لهذه التقنية. الأفراد الذين لم يسبق لهم تنفيذ هذه التقنية لا ينبغي أن تواجه صعوبات كبيرة في التنفيذ، شريطة أن تتبع منهجيا كل خطوة والتماس المشورة المهنية عند بناء حالة المراقبة.
إن العرض التوضيحي البصري لهذه الطريقة يساعد في فهم الترتيب المكاني لأقفاص المراقبة أثناء التجربة. المساعدة على تجنب الأخطاء في تعيين العلاجات. مما يدل على أن هذا الإجراء سيكون إيفلين بيريستين كاستيلو، ما بعد الدكتوراه من مختبري.
لإقامة جلسة اختبار، نقل أربعة فئران إلى غرفة المراقبة في أقفاص فردية. في حين أن الحيوانات هي التأقلم، ووضع طاولة مقلوب على شكل حرف T على طاولة مستطيلة أكبر تحت مصباح السقف الذي يضيء الغرفة بما فيه الكفاية. ضع ورقة التصفية على الجزء السفلي من كل قفص المراقبة، ووضع الأقفاص في أزواج على كل جانب من الجدول المقلوب على شكل حرف T.
ضع مقسمًا بين كل زوج من الأقفاص ، ووضع اثنين من كاميرات الفيديو الرقمية بشكل استراتيجي ، بحيث يسجل كل منها سلوك التثاؤب لكل زوج من الفئران. بعد التأكد من أن كاميرات الفيديو ثابتة بشكل آمن إلى حوامل موجهة بشكل صحيح إلى أقفاص المراقبة، قم بتوصيل كاميرات الفيديو بالكمبيوتر المكتبي لمراقبة سلوك الفئران في وقت واحد. عندما تتأقلم الحيوانات لمدة 15 دقيقة، ضعها في أقفاص المراقبة وفقا للتخصيص المحدد سابقا، وتعيين التركيز التلقائي على إيقاف تشغيل كل كاميرا فيديو.
ابدأ تسجيل الفيديو وساعة توقيت في نفس الوقت، وأوقف تسجيل الفيديو في نهاية فترة المراقبة التي تبلغ 60 دقيقة. وعندما تنتهى الملاحظة، أعيدوا الفئران إلى أقفاصهم المنزلية فى منشأة الحيوانات مع إمكانية الحصول على الغذاء والماء. ثم تنظيف أقفاص المراقبة بدقة مع المنظفات غير السامة قبل إعداد مجموعة تجريبية تصل إلى إجراء جلسات الاختبار اللاحقة لهذا اليوم.
بعد الجلسة الأخيرة، قم بتشغيل كل فيديو على شاشة الكمبيوتر باستخدام أي نظام تشغيل قياسي للمراقب. اجعل المراقب يشاهد كل فيديو لأول مرة لمراقبة وتسجيل سلوك التثاؤب على أوراق البيانات مرة واحدة بالسرعة العادية ، متبوعًا بمشاهدة إضافية بسرعات أبطأ لتسهيل مراقبة وقياس التثاؤب. لتسجيل التثاؤب ، استخدم الخطوط العمودية لتمثيل حدوث التثاؤب مع الدقيقة المكتوبة على أنها اصفر.
عندما تم تسجيل كل التثاؤب ، نسخ التسلسل الزمني للتثاؤب في كل فأر إلى جدول بيانات. إذا تم تسجيل التثاؤب إلى أقرب دقيقة، أدخل عدد التثاؤب في كل دقيقة ذات صلة واستخدم الصفر لملء الخلايا عندما لا يحدث تثاؤب في دقيقة معينة. ثم احفظ ورقة العمل كملف نصي.
إذا تم تسجيل التثاؤب إلى أقرب عشرية من دقيقة، اكتب في التسلسل أعلى للأسفل. استخدم NA لتعبئة المسافات الفارغة لأعمدة الفئران التي يكون فيها عدد التثاؤب في الصفوف أقل من عدد الأعمدة. مع العدد الأقصى من الصفوف من التثاؤب المسجلة للجرذ.
ثم احفظ ورقة العمل كملف نصي. عند إدخال كافة البيانات، قم باستيراد الملف النصي إلى رموز البرنامج R.Save مع رمز التمديد R وتنزيل رمز البرنامج المحدد اعتماداً على ما إذا كان تم تسجيل التثاؤب كأعداد صحيحة أو أرقام كسورية. ثم تشغيل البرنامج لكل زوج من الفئران والعدد المطلوب من الأطر الزمنية.
في نهاية الشوط، تشغيل البرنامج مرة أخرى باستخدام توزيع عشوائي لعدد التثاؤب من كل فأر. لإنشاء منحنيات عدوى التثاؤب، استخدم البيانات المحفوظة سابقاً في جدول البيانات لطرح معدلات العدوى غير من معدلات العدوى لكل زوج من الجرذان، ونافذة الوقت، وحالة الاختبار، وفصل تحليلات البيانات الملاحظة والبيانات الاصطناعية. في هذه التجربة التمثيلية، تم قياس العدوى بين الفئران الذكور غير مألوف على مدى مجموعة من النوافذ الزمنية التي تراوحت من دقيقة إلى 10 دقائق.
تشير منحنيات العدوى التثاؤب هذه إلى أن التواصل الشمي فقط بين الفئران في أقفاص مع مقسم معتم مثقوب أظهر عدوى التثاؤب. وهو أمر واضح من النافذة الزمنية الرابعة وما بعدها ، حيث لا تتداخل فترة الثقة في المتوسطات مع فاصل الثقة لعدد التثاؤب المخصص عشوائيًا على مدى فترة 60 دقيقة. وأشار النطاق، كما هو متوقع، إلى أن تخصيصا عشوائيا لعدد التثاؤب في كل فأر في فترة المراقبة، أدى إلى معدلات تثاؤب تتأرجح عند الصفر تقريبا دون أن يظهر أي نمط واضح.
في هذه التجربة التمثيلية مع الفئران الذكور مألوفة، أيا من الحالات اختبار أربع حفزت العدوى التثاؤب لأن فترات الثقة تداخلت مع الفرقة الفاصلة الثقة ولدت عشوائيا. علاوة على ذلك، لم تكن هناك اختلافات بين حالات الاختبار الأربعة على الرغم من أن الزيادة الإجمالية في عدوى التثاؤب على النوافذ الزمنية 10 تختلف عن المنحدر الصفري. تذكر أن تتبع الهويات المألوفة وغير المألوفة للفئران من أجل تفسير صحيح للنتائج، وتنظيف أقفاص المراقبة بين التجارب.
ويمكن استخدام إجراء الدوائية لمنع الاتصالات السمعية, وفصل تماما آثار السمع على التثاؤب المعدية من الآثار من الحواس الأخرى. وقد مهدت هذه التقنية الطريق لمقارنة التثاؤب المعدي عبر الأنواع سواء من حيث الحواس المعنية، وقوة الاستجابة من خلال مقارنة منحنيات التثاؤب المعدية. تذكر أن تتعامل بعناية مع أقفاص المراقبة لأنها يمكن أن تكسر عن طريق الخطأ وتسبب إصابات.
