Nuestro protocolo es significativo porque proporciona una manera fácil de investigar qué sentidos pueden estar involucrados en bostezos contagiosos en ratas. El uso de un procedimiento no invasivo y la disponibilidad del software de aplicación, que acelera el cálculo para medir el bostezo contagioso, son las principales ventajas de esta técnica. Las personas que nunca han realizado esta técnica no deben enfrentar grandes dificultades en la implementación, siempre que sigan metódicamente cada paso y busquen asesoramiento profesional al construir el caso de observación.
La demostración visual de este método ayuda a comprender la disposición espacial de las jaulas de observación durante el experimento. Ayudar a evitar errores en la designación de los tratamientos. Demostrar ese procedimiento estará Evelyn Beristain-Castillo, un postdoctorado de mi laboratorio.
Para establecer una sesión de prueba, transfiera cuatro ratas a la sala de observación en jaulas individuales. Mientras los animales se aclimatan, coloque una mesa invertida en forma de T en una mesa rectangular más grande debajo de una lámpara de techo que encienda suficientemente la habitación. Coloque el papel de filtro en la parte inferior de cada jaula de observación y coloque las jaulas en pares a cada lado de la mesa invertida en forma de T.
Coloque un divisor entre cada par de jaulas y coloque estratégicamente dos videocámaras digitales, de modo que cada una registre el comportamiento bostezo de cada par de ratas. Después de confirmar que las videocámaras están fijadas de forma segura a los trípodes y correctamente orientadas a las jaulas de observación, conecte las videocámaras a un ordenador de sobremesa para monitorear simultáneamente el comportamiento de las ratas. Cuando los animales se hayan aclimatada durante 15 minutos, colóquelos en las jaulas de observación de acuerdo con la asignación previamente determinada y ajuste el enfoque automático a apagado en cada videocámara.
Inicie la grabación de vídeo y un cronómetro al mismo tiempo, deteniendo la grabación de vídeo al final del período de observación de 60 minutos. Cuando la observación haya terminado, devuelva a las ratas a sus jaulas de origen en las instalaciones de animales con acceso a alimentos y agua. A continuación, limpie a fondo las jaulas de observación con un detergente no tóxico antes de preparar el equipo experimental para realizar las sesiones de prueba posteriores del día.
Después de la última sesión, reproduzca cada vídeo en la pantalla de un ordenador utilizando cualquier sistema de reproducción estándar para un observador. Pida al observador que primero vea cada video para observar y grabar el comportamiento de bostezo en las hojas de datos una vez a velocidad normal, seguido de una visualización adicional a velocidades más lentas para que sea más fácil observar y medir el bostezo. Para puntuar el bostezo, utilice líneas verticales para representar la ocurrencia de un bostezo con el minuto escrito como superíndice.
Cuando todos los bostezos han sido puntuados, transcribir la secuencia temporal de bostezos en cada rata a una hoja de cálculo. Si el bostezo se registró en el minuto más cercano, ingrese el número de bostezos en cada minuto relevante y use cero para rellenar las celdas cuando no se haya producido ningún bostezo en un minuto dado. A continuación, guarde la hoja de trabajo como un archivo de texto.
Si el bostezo se grabó en el decimal más cercano de un minuto, escriba la secuencia de arriba hacia abajo. Utilice NA para rellenar los espacios vacíos de las columnas de rata en las que el número de bostezos en las filas es inferior al de la columna. Con el número máximo de filas de bostezos registrados para una rata.
A continuación, guarde la hoja de trabajo como un archivo de texto. Cuando se hayan introducido todos los datos, importe el archivo de texto en R.Guarde los códigos de programa con el código de extensión R y descargue el código de programa específico en función de si los bostezos se registraron como números enteros o fraccionarios. A continuación, ejecute el programa para cada par de ratas y el número deseado de marcos de tiempo.
Al final de la ejecución, ejecute el programa de nuevo utilizando una distribución aleatoria del número de bostezos de cada rata. Para crear curvas de contagio bostezos, utilice los datos previamente guardados en la hoja de cálculo para restar las tasas de no contagio de las tasas de contagio para cada par de ratas, la ventana de tiempo y la situación de prueba, separando los análisis de los datos observados y los datos artificiales. En este experimento representativo, el contagio bostezo entre ratas macho desconocidas se midió en un rango de ventanas de tiempo que variaban de uno a 10 minutos.
Estas curvas de contagio bostezo indican que sólo la comunicación olfativa entre ratas en jaulas con un divisor opaco perforado exhibió contagio de bostezo. Lo que es evidente desde la ventana de tiempo cuatro y posteriores, ya que el intervalo de confianza de los promedios no se solapa con el intervalo de confianza del número asignado aleatoriamente de bostezos durante el período de 60 minutos. La banda indicaba, como era de esperar, que una asignación aleatoria del número de bostezos en cada rata en el período de observación, producía tasas de bostezos que oscilaban a aproximadamente cero sin demostrar ningún patrón aparente.
En este experimento representativo con ratas macho conocidas, ninguna de las cuatro situaciones de prueba estimuló el contagio bostezo porque sus intervalos de confianza se superponieron con la banda de intervalo de confianza generada aleatoriamente. Además, no hubo diferencias entre las cuatro situaciones de prueba a pesar de que el aumento general en el contagio bostezo durante las ventanas de 10 tiempos diferente de una pendiente cero. Recuerde realizar un seguimiento de las identidades familiares y desconocidas de las ratas para una correcta interpretación de los resultados, y para limpiar las jaulas de observación entre experimentos.
Se puede utilizar un procedimiento farmacológico para bloquear la comunicación auditiva y para separar completamente los efectos auditivos sobre el bostezo contagioso de los efectos de los otros sentidos. Esta técnica ha allanado el camino para comparar bostezos contagiosos en toda la especie tanto en términos de los sentidos involucrados, como en la fuerza de la respuesta comparando las curvas de bostezo contagiosas. Recuerde manejar cuidadosamente las jaulas de observación porque pueden romperse accidentalmente y causar lesiones.
