Nosso protocolo é significativo porque fornece uma maneira fácil de investigar quais sentidos podem estar envolvidos em bocejo contagioso em ratos. O uso de um procedimento não invasivo e a disponibilidade do software de aplicação, que agilize o cálculo para medir bocejo contagioso, são as principais vantagens dessa técnica. Indivíduos que nunca realizaram essa técnica não devem enfrentar grandes dificuldades na implementação, desde que metodicamente sigam cada passo e busquem aconselhamento profissional na construção do caso de observação.
A demonstração visual deste método auxilia na compreensão do arranjo espacial das gaiolas de observação durante o experimento. Ajudando a evitar erros na designação dos tratamentos. Demonstrando que o procedimento será Evelyn Beristain-Castillo, uma pós-doutora do meu laboratório.
Para configurar uma sessão de teste, transfira quatro ratos para a sala de observação em gaiolas individuais. Enquanto os animais estão aclimatando, coloque uma mesa invertida em forma de T em uma mesa retangular maior sob uma lâmpada de teto que ilumina suficientemente a sala. Coloque o papel do filtro na parte inferior de cada gaiola de observação e coloque as gaiolas em pares em cada lado da mesa invertida em forma de T.
Posicione um divisor entre cada par de gaiolas, e coloque estrategicamente duas filmadoras digitais, de modo que cada um registra o comportamento bocejando de cada par de ratos. Depois de confirmar que as filmadoras estão fixas com segurança nos tripés e corretamente orientadas para as gaiolas de observação, conecte as filmadoras a um computador de mesa para monitorar simultaneamente o comportamento dos ratos. Quando os animais tiverem se aclimatado por 15 minutos, coloque-os nas gaiolas de observação de acordo com a alocação previamente determinada, e defina o foco automático para desligar em cada filmadora.
Inicie a gravação de vídeo e um cronômetro ao mesmo tempo, interrompendo a gravação de vídeo no final do período de observação de 60 minutos. Quando a observação acabar, devolva os ratos para suas gaiolas de origem na instalação animal com acesso a comida e água. Em seguida, limpe completamente as gaiolas de observação com um detergente não tóxico antes de preparar a configuração experimental para realizar as sessões de teste subsequentes para o dia.
Após a última sessão, reproduza cada vídeo em uma tela de computador usando qualquer sistema de reprodução padrão para um observador. Faça com que o observador veja primeiro cada vídeo para observar e registrar o comportamento de bocejo em folhas de dados uma vez em velocidade normal, seguido de visualização adicional em velocidades mais lentas para facilitar a observação e medir o bocejo. Para marcar o bocejo, use linhas verticais para representar a ocorrência de um bocejo com o minuto escrito como um sobrescrito.
Quando todos os bocejos tiverem sido marcados, transcreva a sequência temporal de bocejos em cada rato para uma planilha. Se o bocejo foi registrado no minuto mais próximo, digite o número de bocejos em cada minuto relevante e use zero para preencher as células quando não ocorreu bocejo em um determinado minuto. Em seguida, salve a planilha como um arquivo de texto.
Se o bocejo foi gravado no decimal mais próximo de um minuto, digite a sequência de cima para baixo. Use NA para preencher os espaços vazios das colunas de ratos em que o número de bocejos nas fileiras é menor do que o da coluna. Com o número máximo de fileiras de bocejos registrados para um rato.
Em seguida, salve a planilha como um arquivo de texto. Quando todos os dados tiverem sido inseridos, importe o arquivo de texto em R.Salve os códigos do programa com o código de extensão R e baixe o código específico do programa, dependendo se os bocejos foram registrados como inteiros ou números fracionados. Em seguida, execute o programa para cada par de ratos e o número desejado de períodos de tempo.
No final da execução, execute o programa novamente usando uma distribuição aleatória do número de bocejos de cada rato. Para criar curvas de contágio bocejando, use os dados previamente salvos na planilha para subtrair as taxas de não contágio das taxas de contágio para cada par de ratos, a janela de tempo e a situação do teste, separando as análises dos dados observados e dados artificiais. Neste experimento representativo, o contágio bocejando entre ratos machos desconhecidos foi medido ao longo de uma série de janelas de tempo que variavam de um a 10 minutos.
Estas curvas de contágio bocejando indicam que apenas a comunicação olfativa entre ratos em gaiolas com um divisor opaco perfurado exibiu contágio bocejando. O que é evidente a partir da janela de tempo quatro e em diante, uma vez que o intervalo de confiança das médias não se sobrepõe ao intervalo de confiança do número de bocejos alocados aleatoriamente durante o período de 60 minutos. A banda indicou, como esperado, que uma alocação aleatória do número de bocejos em cada rato no período de observação, produziu taxas de bocejo que oscilavam a aproximadamente zero sem demonstrar qualquer padrão aparente.
Neste experimento representativo com ratos machos familiares, nenhuma das quatro situações de teste estimulou o contágio bocejando porque seus intervalos de confiança se sobrepunham à faixa de intervalo de confiança gerada aleatoriamente. Além disso, não houve diferenças entre as quatro situações de teste, embora o aumento geral do contágio bocejando ao longo das 10 janelas de tempo diferente de uma inclinação zero. Lembre-se de acompanhar as identidades familiares e desconhecidas dos ratos para uma interpretação correta dos resultados, e limpar as gaiolas de observação entre experimentos.
Um procedimento farmacológico pode ser usado para bloquear a comunicação auditiva, e para separar completamente os efeitos auditivos sobre bocejo contagioso dos efeitos dos outros sentidos. Esta técnica abriu caminho para comparar bocejos contagiosos em toda a espécie, tanto em termos dos sentidos envolvidos, quanto na força da resposta, comparando as curvas contagiosas de bocejo. Lembre-se de manusear cuidadosamente as gaiolas de observação porque elas podem acidentalmente quebrar e causar ferimentos.
