هذا نموذج سرطان بطانة الرحم VX2 مع الانبثاث العقدة الليمفاوية الرجعية يمكن استخدامها لدراسة التكنولوجيا لجراحة موجهة بالصور. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها موثوقة وبسيطة ، وأنها تخلق انتشارًا النقيليًا ثابتًا ، مما يحاكي نمط سرطان بطانة الرحم البشري. عموما، وهذا هو تقنية بسيطة.
ومع ذلك ، فإن ممارسة خياطة قبل محاولة إنشاء نموذج يساعد على جعل العملية أسهل. إن البرهان المرئي لهذه التقنية مهم، لأنه يساعد على إظهار الخطوات الجراحية التي ينطوي عليها النموذج. إظهار الإجراء مع هارلي تشان وأنا ستكون ليلي دينغ، فني من مختبرنا.
لإعداد خلايا VX2 التي تنتشر في المختبر للحقن ، تبدأ من خلال احترار قوارير المجمدة من خلايا VX2 في حبة 37 درجة مئوية أو حمام مائي لمدة دقيقة واحدة. عندما تذوب الخلايا، اسحب تعليق الخلية في أنبوب 15 ملليلتر يحتوي على 10 ملليلتر من وسيط الثقافة. رواسب الخلايا عن طريق الطرد المركزي.
resuspend بيليه في تسعة ملليلتر من المتوسطة. نقل الخلايا إلى قارورة ثقافة كبيرة للاحتضان في 37 درجة مئوية دون اهتزاز، والتحقق من الخلايا يوميا لالتقاء عن طريق المجهر الخفيفة. عندما تصل الخلايا إلى 80٪ التقاء، إضافة ثلاثة ملليلترات من 0.2٪ التربسين إلى القارورة وإعادة الخلايا إلى الحاضنة ثقافة الخلية لمدة خمس دقائق.
عندما تكون الخلايا منفصلة، نقل تعليق الخلية إلى أنبوب مخروطي لجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. غسل بيليه الخلية ثلاث مرات مع تسعة ملليلترات من برنامج تلفزيوني الطازجة في غسل. بعد الغسيل الأخير، resuspend الخلايا في برنامج تلفزيوني جديد للعد قبل التخفيف إلى أربع مرات 10 إلى الخلايا VX2 سبع لكل ملليلتر من تركيز برنامج تلفزيوني في أنبوب مخروطي جديد على الجليد.
لإعداد في الخلايا VX2 التي تنتشر في الجسم الحي للحقن، ذوبان الجليد المجمدة واحد بمقدار سنتيمتر واحد كتل الورم VX2 واستخدام مشرط ل mince عينات الأنسجة في لوحة ثقافة. نقل شظايا الأنسجة إلى مرشح 70 ميكرومتر وإضافة aliquots الصغيرة تصل إلى ملليلتر من محلول الملح هانك متوازن، أو HBSS، لضمان أن يتم تمرير جميع الخلايا من خلال مصفاة. ثم عد الخلايا قبل تخفيف تعليق الخلية إلى مرة واحدة 10 إلى الخلايا VX2 سبع لكل ملليلتر من تركيز HBSS في أنبوب معقمة على الجليد.
بعد التأكد من عدم وجود استجابة للحافز، ضع الأنثى البيضاء الأنثى المُغدَّدة أرنب نيوزيلندا في موقف الظهر على طاولة العمليات. قص الشعر على الحوض والبطن، واستخدام الجلد الجراحية ثلاث خطوات الإعدادية لتنظيف الجلد المكشوفة. يرتدي قبعة جراحية وقناع الوجه، فرك اليدين مع مطهر قبل وضع على ثوب معقمة وقفازات جراحية معقمة.
معلم أعلى عظم العانة والستائر الحقل الجراحي مع الستائر البطن، وترك منطقة خمسة في خمسة سنتيمترات من أسفل البطن يتعرض. بعد ذلك ، استخدم شفرة مشرط رقم 11 لصنع شق طوله 2.5 سنتيمتر واحد في القرنية إلى العانة التكافلية من خلال الجلد والأنسجة تحت الجلد. حاز على اللفافة المستقيم وتشريح عضلات المستقيم بشكل رمزي لفضح الصفاق الكامنة.
تأكد من أن الوجه السفلي واضح من الأمعاء أو أعضاء البطن الأخرى. أدخل بحدة الصفاق لتحديد المثانة البولية واكتساح إصبع قفاز بتفوق، في الخلف، و بشكلٍ آخر على قمة المثانة لتحديد موقع قرون الرحم. استخراج قرون الرحم من خلال شق البطن للراحة على جدار البطن.
استخدام خياطة قابلة للامتصاص 3-0 مضفر لأداء خياطة واحدة من كل قرن الرحم، ما يقرب من 1.5 إلى اثنين من السنتيمتر إلى cervices ومتوسط فقط إلى شرايين الرحم. ثم ربط الغرز بشكل مريح لتشمل قرون الرحم. لتطعيم الميوميتريوم مع تعليق خلايا VX2 المعدة مسبقًا ، قم بتحميل حقنة ذات ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة من عيار 27 مع ملليلتر واحد من الخلايا.
حقن ببطء 0.5 ملليلتر من تعليق الخلية على مدى دقيقة واحدة في كل القرن الرحمية في مكان قريب إلى موقع خياطة بين خياطة وعنق الرحم. ثم تطبيق الضغط على موقع حقن myometrial لمدة 30 ثانية للحد من تسرب الخلايا. افحص مواقع الحقن والخياطة بحثاً عن الهباس قبل وضع قرون الرحم مرة أخرى في البطن.
لإغلاق جدار البطن العميق، وتحديد قمة شق البريتوني واستخدام المشبك الجراحي لفهم العضلات المستقيم الصفاق والزفاف. مرساة خياطة عن طريق وضع خياطة البوليfilament 3-0 للامتصاص، سطحية إلى عميقة على قمة واحدة من شق، وعميقة إلى سطحية من ناحية أخرى. باستخدام خياطة المرفقة، وجعل غرز تشغيل عمودي على شق من خلال طبقات من جدار البطن، والعمل خطوة الحكمة على طول شق من جانب إلى آخر قبل ربط قبالة خياطة وقطع نهايات فضفاضة.
لإغلاق جدار البطن السطحية، استخدم خياطة خياطة متعددة الليفيات قابلة للامتصاص 3-0 القابلة للامتصاص لخياطة عميقة إلى سطحية على جانب واحد من الشق وسطحية إلى عمق على الجانب الآخر. بعد عقدة الغرز، واستخدام الغرز الراسية لجعل غرز الجري في طبقة الجلد موازية للشق، والعمل خطوة الحكمة على طول شق من جانب إلى آخر. ربط الغرز وإزالة النهايات فضفاضة.
تطبيق الغراء الجراحي على شق مغلق لاسترضاء حواف الجلد. ثم ضع الحيوان على بطانية دافئة مع الأكسجين والمراقبة ، حتى يكون الحيوان في حالة تأهب وقادرًا على الجلوس بشكل مستقل. عند إنشاء هذا النموذج، كانت جرعة من مرتين 10 إلى الخلايا السبع لكل قرن الرحم ناجحة في أربعة أرانب، في متوسط وقت 45 يوما من التطعيم إلى التجربة، وبالتالي تم تحديد جرعة الحقن الأمثل لنموذج VX2 المستزرعة.
لنموذج VX2 في في الجسم الحي نشرها، الذي تم إنشاؤه بنجاح في 16 الأرانب مع متوسط الوقت من التلقيح إلى تجربة 29 يوما، خمس مرات 10 إلى الخلايا الست لكل قرن الرحم تم تحديدها كجرعة الحقن الأمثل. كل من النماذج أسفرت عن التحول النقيلي ناجحة من الغدد الليمفاوية الصففية. وعلاوة على ذلك، وبدت الأورام والعقد اللمفاوية النقيلي من خلايا VX2 المستزرعة مشابهة للأورام من خلايا VX2 التي تنتشر في الجسم الحي عن طريق التحليل النسيجي، مع وجود خلايا ملطخة بصبغة densymetoxolin لوحظت في العضلات الغازية وتشكيل هياكل غدية مثل هياكل مع العديد من الشخصيات العضية المرضية.
ضع خياطة الوسيطة الخاصة بك إلى الشريان الرحمي لتجنب النزيف من ثقب في وعاء والحرص على التسلل إلى الخلايا في ميثريميوم وليس تجويف بطانة الرحم. الحرص على استخدام تقنية معقمة مناسبة أثناء إنشاء نموذج لمنع العدوى بعد العملية الجراحية وحماية نفسك مع مادة الباريوم أثناء الجراحة.
