Ce modèle de cancer de l’endomètre VX2 avec métastase rétroperitoneal de ganglion lymphatique peut être employé pour étudier la technologie pour la chirurgie image-guidée. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est fiable, simple, et qu’elle crée une propagation métastatique cohérente, qui imite le modèle du cancer de l’endomètre humain. Dans l’ensemble, il s’agit d’une technique simple.
Toutefois, la pratique de la suture avant de tenter de créer le modèle aidera à rendre le processus plus facile. La démonstration visuelle de cette technique est importante, car elle aide à démontrer les étapes chirurgicales impliquées dans l’établissement de modèle. Démontrant la procédure avec Harley Chan et moi serons Lili Ding, une technicienne de notre laboratoire.
Pour préparer les cellules VX2 propagées in vitro à l’injection, commencez par réchauffer les flacons congelés des cellules VX2 dans une perle ou un bain d’eau de 37 degrés Celsius pendant une minute. Lorsque les cellules ont décongelé, tirez les suspensions cellulaires dans un tube de 15 millilitres contenant 10 millilitres de milieu de culture. Sédimenter les cellules par centrifugation.
Resuspendez la pastille en neuf millilitres de milieu. Transférer les cellules dans un grand flacon de culture pour incubation à 37 degrés Celsius sans trembler, en vérifiant les cellules quotidiennement pour la confluence par microscopie légère. Lorsque les cellules ont atteint 80% de confluence, ajouter trois millilitres de 0,2% trypsine à la fiole et retourner les cellules à l’incubateur de culture cellulaire pendant cinq minutes.
Lorsque les cellules se sont détachées, transférer la suspension cellulaire dans un tube conique pour recueillir les cellules par centrifugation. Lavez la pastille de cellules trois fois avec neuf millilitres de PBS frais par lavage. Après le dernier lavage, resuspendre les cellules dans pbs frais pour compter avant de diluer à quatre fois 10 aux sept cellules VX2 par millilitre de concentration de PBS dans un nouveau tube conique sur la glace.
Pour préparer les cellules VX2 in vivo-propagées pour l’injection, décongeler congelé un par un centimètre VX2 blocs tumoraux et utiliser un scalpel pour hacher les échantillons de tissus dans une plaque de culture. Transférer les fragments de tissu dans un filtre de 70 micromètres et ajouter de petits aliquots jusqu’à un millilitre de la solution de sel équilibrée de Hank, ou HBSS, pour s’assurer que toutes les cellules sont passées à travers la passoire. Comptez ensuite les cellules avant de diluer la suspension cellulaire à une fois 10 aux sept cellules VX2 par millilitre de concentration de HBSS dans un tube stérile sur la glace.
Après avoir confirmé un manque de réponse au stimulus, placez le lapin néo-zélandais blanc anesthésié en position dorsale sur la table d’opération. Couper les cheveux sur le bassin et l’abdomen, et utiliser une préparation chirurgicale de la peau en trois étapes pour nettoyer la peau exposée. Portant un capuchon chirurgical et un masque facial, frottez les mains avec un désinfectant avant de mettre une robe stérile et des gants chirurgicaux stériles.
Repèrez le dessus de l’os pubien et drapez le champ chirurgical avec des rideaux de laparotomie, laissant une zone de cinq par cinq centimètres du bas-ventre exposée. Ensuite, utilisez une lame de scalpel numéro 11 pour faire une incision de 2,5 centimètres d’un centimètre crânien à la symphyse pubis à travers la peau et les tissus sous-cutanés. Incise le rectus fascia et dissèque les muscles rectus latéralement pour exposer le péritoine sous-jacent.
Confirmez que le sous-sol est dégagé de l’intestin ou d’autres organes abdominaux. Entrez brusquement dans le péritoine pour identifier la vessie urinaire et balayer un doigt ganté de façon supérieure, postérieure, et latéralement sur l’apex de la vessie pour localiser les cornes utérine. Extraire les cornes utérine par l’incision abdominale pour se reposer sur la paroi abdominale.
Utilisez une suture absorbable tressée 3-0 pour effectuer une ligature de suture unique de chaque corne utérine, environ 1,5 à deux centimètres distal aux cols de l’utérus et juste médial aux artères utérine. Attachez ensuite les sutures confortablement pour inclure les cornes utérins distales. Pour inoculer le myometrium avec la suspension cellulaire VX2 précédemment préparée, chargez une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 27 avec un millilitre de cellules.
Injectez lentement 0,5 millilitres de suspension cellulaire pendant plus d’une minute dans chaque corne utérine proximale au site de suture entre la suture et le col de l’utérus. Ensuite, appliquez une pression sur le site d’injection myométrial pendant 30 secondes pour minimiser les fuites cellulaires. Inspecter les sites d’injection et de suture pour l’hémostase avant de placer les cornes utérine dans l’abdomen.
Pour la fermeture profonde de mur abdominal, identifiez l’apex de l’incision péritonéale et utilisez une pince chirurgicale pour saisir le muscle et le fascia de rectus de péritoine. Ancrer la suture en plaçant une suture de polyfilament absorbable 3-0, superficielle à profonde sur un sommet de l’incision, et profonde à superficielle de l’autre. À l’aide de la suture ci-jointe, faire des points de course perpendiculaires à l’incision à travers les couches de la paroi abdominale, en travaillant étape-sage le long de l’incision d’un côté à l’autre avant d’attacher la suture et couper les extrémités lâches.
Pour la fermeture superficielle de mur abdominal, utilisez une suture subcuticulaire subcuticulaire enterrée de polyfilament 3-0 pour suturer profondément à superficielle d’un côté de l’incision et superficielle à profonde de l’autre. Après avoir noué les sutures, utilisez les sutures ancrées pour faire des points de course dans la couche cutanée parallèle à l’incision, en travaillant étape-sage le long de l’incision d’un côté à l’autre. Attacher les sutures et retirer les extrémités lâches.
Appliquer de la colle chirurgicale sur l’incision fermée pour apposer les bords de la peau. Ensuite, placez l’animal sur une couverture chaude avec de l’oxygène et de la surveillance, jusqu’à ce que l’animal soit alerte et capable de s’asseoir indépendamment. Lors de l’établissement de ce modèle, une dose de deux fois 10 aux sept cellules par corne utérine a été couronnée de succès chez quatre lapins, dans un délai moyen de 45 jours de l’inoculation à l’expérience et a donc été déterminée comme la dose d’injection optimale pour le modèle VX2 cultivé.
Pour le modèle VX2 in vivo-propagé, qui a été créé avec succès dans 16 lapins avec un temps moyen de l’inoculation à l’expérience de 29 jours, cinq fois 10 aux six cellules par corne utérine a été déterminée comme dose optimale d’injection. Tous les modèles ont eu comme conséquence une transformation métastatique réussie des ganglions lymphatiques rétroperitoneal. En outre, les tumeurs et les ganglions lymphatiques métastatiques des cellules VX2 cultivés sont apparus semblables aux tumeurs des cellules VX2 in vivo-propagées par l’analyse histologique, avec des cellules densymetoxolin-souillées observées dans le muscle envahissant et formant des structures glandulaires comme avec beaucoup de figures mytotiques pathologiques.
Placez votre perle de suture à l’artère utérine pour éviter le saignement d’une ponction de navire et prenez soin d’infiltrer les cellules dans le myometrium et non la cavité endométriale. Prenez soin d’utiliser une technique stérile appropriée pendant la création du modèle pour prévenir l’infection postopératoire et pour vous protéger avec le matériel de baryum pendant la chirurgie.
