矫形子宫内膜癌模型，具有从 Vivo 传播和培养的 VX2 细胞中制成的再生淋巴病

这种VX2子宫内膜癌模型具有逆膜淋巴结转移，可用于研究图像引导手术的技术。这项技术的主要优点是可靠、简单，并且能够产生一致的转移性扩散，模仿人类子宫内膜癌的模式。总的来说，这是一个简单的技术。

但是，在尝试创建模型之前练习苏特操作将有助于使过程更容易。这种技术的视觉演示很重要，因为它有助于演示模型建立中涉及的手术步骤。演示与哈雷陈和我将李丽丁，一个技术员从我们的实验室演示程序。

要准备体外传播的VX2细胞进行注射，首先在37摄氏度的珠子或水浴中加热VX2细胞的冷冻小瓶一分钟。当细胞解冻后，将细胞悬浮液拉在含有10毫升培养培养的15毫升管中。通过离心沉淀细胞。

将颗粒以九毫升的介质重新暂停。将细胞转移到一个大的培养瓶中，在37摄氏度下孵育，无需摇晃，每天通过光显微镜检查细胞的汇合。当细胞达到80%的汇合时，在烧瓶中加入三毫升0.2%的三丁普辛，并将细胞返回细胞培养箱5分钟。

当细胞分离时，将细胞悬浮转移到锥形管中，通过离心收集细胞。每次洗涤用9毫升新鲜PBS清洗细胞颗粒三次。最后一次洗涤后，在新鲜PBS中重新暂停细胞计数，然后稀释到每毫升PBS浓度的7个VX2细胞的4倍10，在冰上新的锥形管中。

要准备体内传播的 VX2 细胞进行注射，请解冻一厘米 VX2 肿瘤块，并使用手术刀在培养板中切碎组织样本。将组织片段转移到70微米过滤器中，并加入汉克平衡盐溶液（HBSS）高达1毫升的小等分，以确保所有细胞都通过滤株机。然后计算细胞，然后将细胞悬浮液稀释到每毫升HSS浓度的7个VX2细胞的1倍至7个VX2细胞，在冰上的无菌管中。

在确认对刺激缺乏反应后，将麻醉的雌性新西兰白兔放在手术台上的后体位置。将头发夹在骨盆和腹部，并使用三步手术皮肤准备清洁暴露的皮肤。戴上手术帽和面罩，在戴上无菌长袍和无菌手术手套之前，先用消毒剂擦洗双手。

地标化阴骨的顶部，用腹腔切除术窗帘覆盖手术场，使下腹部的五到五厘米区域暴露。接下来，使用数字11手术刀刀片，使一个2.5厘米切口一厘米的颅骨，通过皮肤和皮下组织到共生阴。倾斜直肠筋膜，并横向解剖直肠肌肉，以暴露潜在的内膜。

确认底面是无肠或其他腹部器官。快速进入膀胱，识别膀胱，并扫一个戴手套的手指优越，后部，横向在膀胱的顶点，以找到子宫角。通过腹部切口提取子宫角，放在腹壁上。

使用 3-0 编织的可吸收缝合线对每个子宫角进行单缝合连接，距离子宫颈大约 1.5 到 2 厘米，并且只是中向子宫动脉。然后紧贴缝合线，包括近月子宫角。要用先前准备的 VX2 细胞悬浮液接种眼膜，请装上装有 27 量针的 1 毫升细胞的一毫升注射器。

在一分钟内缓慢地将0.5毫升的细胞悬浮液注射到每个子宫角近到缝合线和子宫颈之间的缝合位点。然后对子宫内膜注射部位施加压力30秒，以尽量减少细胞泄漏。在将子宫角放回腹部之前，检查注射和缝合部位有没有出血。

对于深腹壁闭合，识别腹膜切口的顶点，并使用手术夹抓住腹膜直肠肌肉和筋膜。通过放置一个3-0可吸收的多丝缝合线锚定缝合线，在切口的一个顶点上将表面到深，在切口的一个顶点上深到表面。使用附加的缝合线，使运行缝合垂直于切口通过腹壁的层，沿着切口从一侧到一边，然后绑下缝合和切割松散的末端。

对于表面腹壁闭合，使用埋藏运行下切下3-0可吸收多丝缝合缝合深到表面的切口的一侧和表面到深的另一侧。打结缝合后，使用锚定缝合线使皮肤层中的运行缝合与切口平行，沿着切口从一侧到另一侧逐步工作。系上缝合线并拆下松动的末端。

将手术胶涂抹在闭合切口上，以涂抹皮肤边缘。然后，将动物放在带氧气和监测的温暖毯子上，直到动物处于警觉状态并能够独立地坐着。建立此模型时，在从接种到实验的平均45天中，在四只兔子中成功获得每子宫角10倍至7个细胞的剂量，因此被确定为培养VX2模型的最佳注射剂量。

对于体内传播的VX2模型，在16只兔子中成功创建，平均从接种到实验29天，每个子宫角的5倍10到6个细胞被确定为最佳注射剂量。所有模型都成功地转移了逆转录体淋巴结。此外，通过组织学分析，来自培养的VX2细胞的肿瘤和转移淋巴结与体内传播的VX2细胞的肿瘤相似，在入侵的肌肉中观察到登西梅托索林染色细胞，形成具有许多病理肌瘤图的腺状结构。

将缝合线内侧放在子宫动脉上，以避免血管穿刺出血，并注意将细胞渗入肌膜而不是子宫内膜腔。在模型创建过程中，注意使用适当的无菌技术，以防止术后感染，并在手术过程中使用钛材料保护自己。