Retroperitoneal lenf nodazı metastazı ile bu VX2 endometrial kanser modeli görüntü güdümlü cerrahi için teknoloji çalışması için kullanılabilir. Bu tekniğin başlıca avantajları güvenilir, basit ve tutarlı metastatik yayılım yaratmak, hangi insan endometrial kanser desen taklit vardır. Genel olarak, bu basit bir tekniktir.
Ancak, modeli oluşturmaya çalışmadan önce dikiş uygulama işlemi kolaylaştırmak için yardımcı olacaktır. Bu tekniğin görsel olarak gösterilmesi önemlidir, çünkü model inisinde yer alan cerrahi adımların gösterilmesine yardımcı olur. Harley Chan ve ben, laboratuarımızdan bir teknisyen olan Lili Ding'le prosedürü gösteriyoruz.
Enjeksiyon için in vitro-propagated VX2 hücreleri hazırlamak için, bir dakika için 37 derece santigrat boncuk veya su banyosu VX2 hücrelerinin dondurulmuş şişeleri ısınma ile başlar. Hücreler çözüldüğünde, hücre süspansiyonlarını 10 mililitre kültür ortamı içeren 15 mililitrelik bir tüpe çekin. Santrifüj ile hücreleri tortu.
Peleti dokuz mililitre orta alanda yeniden askıya alın. Hücreleri 37 santigrat derecede, günlük ışık mikroskobu yla kesişmelerini kontrol ederek, titreyerek kuluçka için büyük bir kültür şişesine aktarın. Hücreler %80 biraraya geldiğinde, şişeye üç mililitre 0.2 tripsin ekleyin ve hücreleri beş dakika boyunca hücre kültürü kuluçka makinesine geri verin.
Hücreler ayrıldığında, santrifüj ile hücreleri toplamak için konik bir tüp hücre süspansiyon aktarın. Hücre peletini yıkama başına dokuz mililitre taze PBS ile üç kez yıkayın. Son yıkamadan sonra, taze PBS'deki hücreleri yeniden sayma için yeniden askıya alın ve buz üzerindeki yeni bir konik tüpte mililitre başına yedi VX2 hücresiile yedi VX2 hücresine seyreltin.
Enjeksiyon için in vivo-propagated VX2 hücreleri hazırlamak için, bir santimetre VX2 tümör blokları tarafından dondurulmuş çözülme ve bir kültür plaka doku örnekleri kıyma için bir neşter kullanın. Doku parçalarını 70 mikrometrelik bir filtreye aktarın ve tüm hücrelerin süzgeçten geçmesini sağlamak için Hank'in dengeli tuz çözeltisinin veya HBSS'nin bir mililitresine kadar küçük aliquotlar ekleyin. Daha sonra hücre süspansiyonu bir kez 10 için hbss konsantrasyonu mililitre başına yedi VX2 hücreleri buz üzerinde steril bir tüp seyreltmeden önce hücreleri sayMak.
Uyarıcıya yanıt eksikliği ni doğruladıktan sonra, ameliyat masasına dorsal pozisyonda anestezi kadın beyaz Yeni Zelanda tavşan yerleştirin. Pelvis ve karın üzerinde saç klip ve maruz kalan cilt temizlemek için üç adım cerrahi cilt hazırlık kullanın. Cerrahi bir şapka ve yüz maskesi takın, steril bir gece elbisesi ve steril cerrahi eldiven giymeden önce ellerinizi dezenfektanla temizleyin.
Landmark kasık kemiğinin üst ve laparotomi perdeler imizle cerrahi alan perde, alt karın maruz beş santimetre lik bir alan bırakarak. Daha sonra, deri ve deri altı doku yoluyla symphysis pubis bir santimetre lik bir santimetre lik bir kesi yapmak için bir numara 11 neşter bıçak kullanın. Rektus fasyası incise ve altta yatan periton ortaya çıkarmak için yanal rektus kasları incelemek.
Alt yüzeyin bağırsak veya diğer karın organlarından temiz olduğunu doğrulayın. Keskin idrar kesesi tanımlamak için periton girin ve üstün bir eldivenli parmak süpürme, posterior, ve yanal rahim boynuzları bulmak için mesane apeks üzerinde. Karın duvarında dinlenmek için karın kesisi ile rahim boynuzları ayıklayın.
Her rahim boynuzu tek bir dikiş ligation gerçekleştirmek için 3-0 örgülü emilebilir dikiş kullanın, cervices için yaklaşık 1,5-2 santimetre distal ve sadece rahim arterlere medial. Sonra distal uterin boynuzları içerecek şekilde snugly dikişler kravat. Miyometrium'u önceden hazırlanmış VX2 hücre süspansiyonu ile aşılamak için, bir mililitrelik iğne ile donatılmış bir mililitrelik şırınga yükleyin.
Yavaş yavaş dikiş ve serviks arasındaki dikiş siteye her uterin boynuz proksimal içine bir dakika içinde hücre süspansiyon 0,5 mililitre enjekte. Daha sonra hücre sızıntısını en aza indirmek için miyomenjeksiyon bölgesine 30 saniye basınç uygulayın. Rahim boynuzlarını karın içine geri yerleştirmeden önce enjeksiyon ve dikiş bölgelerini hemostaz için inceleyin.
Derin karın duvarı nın kapatılması için, periton kesisinin apeksini belirleyin ve periton rektus kas ve fasyayı kavramak için cerrahi bir kelepçe kullanın. 3-0 emilebilir polifilament sütür yerleştirerek sütür çapa, kesi bir apeks derin yüzeysel, ve derin diğer yüzeysel. Ekli sütür kullanarak, karın duvarının katmanları aracılığıyla kesi dik dikiş çalışan yapmak, dikiş bağlama dan önce yan yana kesi boyunca adım akıllıca çalışma ve gevşek biter kesme.
Yüzeysel karın duvarının kapatılması için, kesibir tarafında derin ve diğer derin yüzeysel derin dikiş için gömülü çalışan subcuticular 3-0 emilebilir polifilament sütür kullanın. Dikişleri düğümledikten sonra, kesite paralel olarak dermal tabakada çalışan dikişler yapmak için demirli dikişleri kullanın, kesi boyunca bir taraftan diğer tarafa adım adım çalışArak. Dikişleri bağlayın ve gevşek uçları çıkarın.
Cilt kenarlarını kaplamak için kapalı kesiye cerrahi yapıştırıcı uygulayın. Daha sonra, hayvan uyanık ve bağımsız olarak oturup mümkün olana kadar, oksijen ve izleme ile sıcak bir battaniye üzerine hayvan yerleştirin. Bu modeli oluştururken, rahim boynuzu başına yedi hücre ye kadar iki kez 10 doz dört tavşan başarılı oldu, aşıdan deneye ortalama 45 günlük bir süre içinde ve böylece kültürlü VX2 modeli için en uygun enjeksiyon dozu olarak belirlendi.
İnvivo-propagated VX2 modeli için, hangi başarıyla oluşturuldu 16 tavşan aşılama dan deneme için ortalama bir süre ile 29 gün, beş kez 10 rahim boynuzu başına altı hücre optimal enjeksiyon dozu olarak belirlendi. Tüm modeller retroperitoneal lenf düğümlerinin başarılı bir metastatik dönüşümü ile sonuçlandı. Ayrıca, kültürlü VX2 hücrelerinden tümörler ve metastatik lenf düğümleri in vivo-propagated VX2 hücrelerinden gelen tümörlere benzer histolojik analiz, densymetoksolin lekeli hücreler işgalci kas gözlenen ve birçok patolojik mitotik figürler ile yapılar gibi glandüler oluşturan ile ortaya çıktı.
Bir damar delinme kanamasını önlemek için rahim arter için dikiş medial yerleştirin ve miyometrium içine hücreleri sızmak için dikkat değil, endometrial kavite. Ameliyat sonrası enfeksiyonu önlemek ve ameliyat sırasında baryum materyali ile kendinizi korumak için model oluşturma sırasında uygun steril tekniği kullanmaya özen.
