هذه الطريقة تخلق نموذجا للدراسات المستقبلية من خلال تزويد الباحثين نموذج موثوق به وترجمة من الارتجاج الذي يسمح التوصيف الطولي للآثار الجزيئية للارتجاج. يجمع هذا النموذج بين الميكروسينات التي تسمح بالتقارير المستمر مع تقنية التفاف إسفينية التي تمارس تسارعًا سريعًا وتباطؤًا في الرأس والجذع الذي يحاكي سمة أساسية للصدمة القيصرية البشرية. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو الدراسات العلاجية للارتجاج لأنها توفر فرصة ثمينة لدراسة آلية وفعالية العوامل الدوائية في الجسم الحي ودون انقطاع.
من المستحسن للغاية العمل في فرق من اثنين خلال خطوات الارتجاج والتحريض صور من هذه الطريقة لتقييد أخطاء التلاعب وتعظيم الكفاءة أثناء التجربة. إثبات الإجراء سيكون كلوي بروفوست، فني في مختبرنا. لبدء العملية، حلق رأس الحيوان باستخدام مقص كهربائي.
تنظيف منطقة حليقة باستخدام محلول من 2٪ من الكحول isopropyl و 2٪ chlorhexidine غلوكونات ثلاث مرات. ثم تطبيق مرهم العين التشحيم لمنع جفاف أثناء التخدير. بعد ذلك، ضع الجرذ في جهاز استريو تكسيكس.
أدخل قضبان الأذن في قنوات الأذن بعناية فائقة وشد المشبك الأنفي. بعد ذلك، إصلاح 26 قياس الفولاذ المقاوم للصدأ دليل cannula إلى الذراع حامل على جهاز stereotaxic. إجراء شق في خط الوسط من ثلاثة سنتيمترات على فروة الرأس.
اترك الجمجمة واضحة عن طريق تركيب أربعة مشابك حول الشق. كشط الصلصال من الجمجمة بقوة مع الشفرة الجراحية حتى تكون خيوط البريغما وخيوط لامدا مرئية. إذا كان هناك نزيف، والحفاظ على ضغط ثابت على الجمجمة مع وسادة الشاش أو القطن يميل قضيب.
تأكد من محاذاة الجمجمة بشكل صحيح على جهاز مجسم من خلال مقارنة إحداثيات دورسوفينرال من خيوط البريغما و لامبدا. تحديد الإحداثيات الأمامية، والميدولية، والدورسوفينرال لخياطة البريغما كنقاط مرجعية لإحداثيات كانولا الدليل. ثم أخذ إحداثيات خياطة bregma كمراجع ، حساب إحداثيات موقع زرع القنية الدليل في قرن آمون.
وضع علامة على موقع الزرع الدقيق باستخدام علامة. وفي وقت لاحق، حفر حفرة بقطر 0.5 ملليمتر من خلال الجمجمة في الموقع المستهدف من cannula دليل. حفر ثلاثة ثقوب أخرى حوالي خمسة ملليمترات حول هذه النقطة لخيط ثلاثة مسامير مرساة في الجمجمة التي سوف ترسّج الكانولا بعد تطبيق الاسمنت الأسنان الاكريليك.
بعد ذلك، أدخل القنية في قرن آمون واصلحه بأسمنت الأسنان. يجب الحرص على عدم تسرب الاسمنت الأسنان الزائدة حول الموقع حيث سيتم إسقاط الوزن. اترك الأسمنت لتجف لمدة دقيقتين ثم أخرج ذراع الحامل من القنية.
إدراج مزيل الفولاذ المقاوم للصدأ القابلة للإزالة في القنية لتجنب تسرب السائل النخاعي ومخاطر العدوى. بعد ذلك ، قم بإزالة المشابك الأربعة ، وسحب الجلد المنسحب وغرزته بخيط خياطة جراحي. بعد ذلك ، قم بإزالة الجرذ من الجهاز وحقن البوبرينورفين تحت الجلد لعلاج الألم.
ضع القوارض مرة أخرى في قفصها مع وسادة التدفئة تحت حتى يصبح واعية. ثم إعادته إلى مرفق رعاية الحيوان لفترة نقاهة مدتها سبعة أيام تحت المراقبة عن كثب. في هذا الإجراء، وإزالة المخالط من القنية وإدراج مسبار غسيل الكلى ببطئ.
المقبل، إصلاح الجمعية التحقيق إلى ربيع الفولاذ المقاوم للصدأ المربوطة إلى ذراع ذراع رافعة السائل وموازنة مع موقف حلقة والمشابك بحيث يمكن للحيوان التحرك بحرية داخل قفصه. الفئران المربوطة لديها إمكانية الوصول إلى الغذاء والماء خلال عملية غسيل الكلى الدقيقة بأكملها. استخدام مضخة ضخ صغيرة لتقديم perfusate إلى التحقيق وجمع dialysate من خط مخرج السيليكا تنصهر.
على الأقل ساعة واحدة و 30 دقيقة قبل بدء العملية، بدوره يصل التحقيق إلى معدل تدفق العمل في الدقيقة الدقيقة الواحدة. تحقق من أن معدل تدفق المسبار متناسق من خلال قياس حجم المُصّة بمرور الوقت باستخدام ماصة. بعد ذلك، جمع كل عينة dialysate في قارورة كسر محملة مسبقا مع ميكرولتر واحد من 0.25 الخلد لكل لتر حمض perchloric لمنع تدهور التحليل.
تخزين العينة عند أربع درجات مئوية للتحليل اللاحق. وبمجرد جمع العينة الأخيرة، قم بإزالة مسبار التحليل الدقيق من القنية وإعادة إدخال المُزخر قبل إعادة الجرذ إلى مرفق رعاية الحيوان. لتثبيت جهاز الارتجاج، الشريط ورقة الألومنيوم بإحكام إلى إطار زجاج شبكي على شكل حرف U الذي يحتوي على وسادة رغوة.
استخدام شفرة حلاقة حادة لجعل الشقوق في ورقة الألومنيوم. الشريط ورقة الألومنيوم مشقوق. ثم ضع إطار Plexiglass تحت أنبوب دليل PVC.
عقد أنبوب دليل PVC في مكان مع موقف المشبك في 3-1/2 سم فوق الألومنيوم مشقوق. نعلق خط صيد ذبابة النايلون من خلال حلقة معدنية بحيث الجزء السفلي من الوزن هو في 2-1/2 سم فوق الألومنيوم مشقوق لمنع ضربات متعددة عندما يسقط الجرذ على وسادة رغوة بعد تأثير. ثم نعلق على خط صيد ذبابة النايلون إلى موقف المشبك.
سحب ما يصل الوزن من خلال أنبوب PVC مع خط صيد ذبابة النايلون. يبقيه في مكانه عن طريق إدراج مفتاح سداسي عشري من خلال الثقوب حفر الأولية في متر واحد فوق رقائق الألومنيوم مشقوق. للحث على ارتجاج، وضع الحيوان على صدره على ورقة الألومنيوم مشقوق بحيث يتم وضع رأسه مباشرة في مسار الوزن النحاسي.
إزالة مخروط الأنف وسحب مفتاح الهيكس. وسوف ينخفض الوزن عموديا من خلال أنبوب PVC وتؤثر على رأس الفئران. ونتيجة لذلك، سيخضع الجرذ لدوران سريع 180 درجة ويهبط على ظهره.
إزالة الفئران من وسادة رغوة ووضعها على ظهرها في القفص. استخدام جهاز توقيت رقمي لقياس الوقت رد الفعل الصحيح كعلامة على الانتعاش وشدة الإصابة. الوقت المنعك الصحيح هو الوقت الإجمالي من التأثير حتى يستيقظ الجرذ ويتحول تلقائيا إلى موقف عرضة أو يبدأ المشي.
لاحظ أي علامات على الموت أو الكسر أو النزيف. للحصول على التعريفي صور، وضع الحيوان على صدره على ورقة الألومنيوم مشقوق بحيث يضع رأسه مباشرة في مسار الوزن النحاسي. إزالة مخروط الأنف ثم إزالة الحيوان من ورقة الألومنيوم دون سحب مفتاح الهكية.
بعد ذلك، ضع الجرذ على ظهره في القفص. استخدام جهاز توقيت رقمي لقياس الوقت الصحيح كمؤشر لاستعادة العصبية. وكان الحيوانات من المجموعة المصابة زيادة كبيرة في وقت اليمين في المتوسط مقابل الحالات صورية وبدا مذهولا عند استعادة وعيه.
ومن بين الحالات العشر من مجموعة الارتجاج ، ظهرت على واحد فقط علامات طفيفة على النزيف تحت موقع الارتطام عقب انخفاض الوزن. ولوحظت زيادات كبيرة في تركيزات الغلوتامات خارج الخلية في منطقة CA1 فرس النهر خلال أول 10 دقائق بعد تحريض الصدمة مقارنة مع إصابة صورية. يرجى تذكر خلال الارتجاج التعريفي تجنب التأثير على القنية مع الوزن لأن هذا من شأنه أن يولد إصابات في قلب الفئران التي هي أكثر خطورة بكثير من ارتجاج.
يمكن تطبيق هذه الطريقة على دراسة الارتجاج المتكرر لأن الإجراء هو إصابة قريبة في الرأس والتي يمكن تكرارها على نفس الحيوانات في نقاط زمنية مختلفة.
