تستخدم هذه الدراسة نموذجًا حيوانيًا راسخًا للبحث في مراحل التعافي والآثار من نقص التروية في الدماغ. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها مستقرة وموثوقة وبسيطة نسبيا. تبدأ بوضع الجرذ تخدير على طاولة إصلاح الجراحية.
طوال الجراحة، والحفاظ على درجة حرارة الجسم من الفئران في 37 درجة مئوية في الحرارة صغير. ربط الفم إلى قناع آلة التخدير وتأكيد التخدير العميق من عدم وجود التوتر القصوى، وردود الفعل القرنية والألم. إصلاح أطراف الفئران إلى طاولة العمليات باستخدام الضمادات الورقية.
مع ماكينة حلاقة كهربائية، قم بإزالة معطف الرقبة وتعقيم الرقبة مع 75٪ من الكحول. استخدم مقص العيون لقطع 2-3 سنتيمتر على طول الشكل الطولي المركزي للرقبة. ثم مع ملقط العيون، وفصل العضلات تحت الجلد.
استخدام الداهم محلية الصنع لفضح مجال الرؤية بشكل كامل. يجب توخي الحذر لتقديم تقنية متعفنة مناسبة لجميع العمليات الجراحية البقاء على قيد الحياة. وينبغي ممارسة التقنية التي تم توضيحها لاحقا في الفيديو من خلال الإجراء بأكمله.
استخدم ملقط صغيرة لعزل الشريان السباتي المشترك والشريان السباتي الخارجي والشريان السباتي الداخلي. العمل تحت المجهر، واستخدام 8-0 الغرز لligate الشريان السباتي المشترك مع عقدة صلبة ، الشريان السباتي الخارجي بعيدا عن نهاية القلب مع عقدة صلبة ، الشريان السباتي الداخلي مع عقدة فضفاضة ومن ثم لخط الشريان السباتي الخارجي بالقرب من نهاية القلب. باستخدام مقص صغير، وقطع فتحة صغيرة في الشريان السباتي الخارجية وأدخل بلطف الترباس الموضوع.
Ligate خياطة الشريان السباتي الخارجي الذي هو عقدة رقيقة وفضفاضة وقطع الشريان السباتي الخارجي. تخفيف عقدة فضفاضة من الشريان السباتي الداخلي والاستمرار في إدراج الترباس الموضوع إلى بداية الشريان الدماغي الأوسط ملحوظ مع خياطة وقطع الترباس الموضوع المكشوفة. بعد أن يتم التوصل إلى وقت الإقفاري بعد ساعتين إلى ثلاث ساعات، وإصلاح كسر الشريان السباتي الخارجية باستخدام ملقط صغيرة وسحب بلطف من الترباس الموضوع مع آخر الملصات الصغيرة.
بعد سحب تماما الواجهة الأمامية من الترباس الخيط من الشريان السباتي الداخلي، ligate الشريان السباتي الخارجية التي اصطف مع 8-0 خياطة ثم قم بإزالة الترباس الموضوع تماما. بعد تخفيف الشريان السباتي المشترك ، داب حوالي 50000 وحدة من مسحوق الصوديوم البنسلين على سطح الجرح لمنع العدوى. استخدام أربعة خياطة لخياطة العضلات تحت الجلد والجلد.
بعد وضع الجرذ مرة أخرى إلى القفص، استخدم حقنة ملليلتر واحدة لإعطاء ما يقرب من 0.2 ملليلتر من الماء للجرذ عن طريق الفم لمنع الجفاف بعد الجراحة. اختيار الحيوانات وفقا لأطول درجة ل TTC تلطيخ أو دراسات السيارات الحسية. بعد احتضان الدماغ معزولة لتك تلطيخ في ناقص 20 درجة مئوية من 30 دقيقة، وضعه في قبل تبريد فئران الدماغ العفن.
باستخدام شفرة ما قبل التبريد، وقطع الدماغ إلى ستة أقسام متتالية سميكة اثنين ملليمترين. وصمة عار المقاطع مع 2٪ TTC في لوحة ثقافة ستة بئر واحتضان لمدة 30 إلى 60 دقيقة في 37 درجة مئوية في حين تهتز. كل 10 دقائق، الوجه المقاطع حتى نقص تروية الدماغ والمناطق غير المصابة هي بيضاء وحمراء واضحة.
خط شرائح الدماغ عموديا على الورق المقوى الأسود في النظام من الجزء الخلفي إلى الجزء الأمامي من الدماغ باستخدام مسطرة لضمان أن الطول الكلي لكل خط هو نفسه وأخذ الصور. استيراد الصورة وتحديد شرائح الدماغ. حدد المقدمة السوداء واكتب Alt Delete لتعبئة لون الخلفية ثم التحكم D لإلغاء التحديد.
وأخيراً، احفظ الصورة على سطح المكتب. لتحليل حجم infarct، أولاً فتح البرنامج واستيراد الصورة. لتعديل العيب، قم بضبط السطوع باستخدام أداة تحسين التباين بحيث تكون الخلفية سوداء.
في التصفية، استخدم أداة الوسيط لإزالة الأضواء. لحساب منطقة الدماغ الطبيعية اليسرى، حدد اللون باستخدام تجزئة وضبط قيمة H، S وأنا لفصل شرائح الدماغ من الخلفية السوداء. العودة إلى حجم العد وانقر على العد.
انقر على الكائنات المنقسمة في تحرير لفصل الدماغ من خط الوسط الذي سيميز تلقائيا مناطق الدماغ اليمنى واليسرى. لحساب منطقة الدماغ الحق في التحويل، قم باستيراد الصورة، وضبط الخلفية، وإزالة الضوء كما تم ذلك من قبل. حدد حجم العد وانقر على رسم دمج الكائنات أداة في تحرير.
حدد يدوياً منطقة الإقفارية وانقر فوق عدد لحساب منطقة الإقفاري. لحساب منطقة الدماغ السليمة الصحيحة، قم أولاً باستيراد الصورة وضبط الخلفية وإزالة الأضواء كما تم ذلك من قبل. حدد اللون باستخدام تجزئة وضبط قيمة H، S وأنا لفصل شرائح الدماغ صحية من الخلفية السوداء.
العودة إلى حجم العد وانقر على العد لحساب هذه المنطقة. انقر على الكائنات المنقسمة في تحرير لفصل الدماغ من خط الوسط الذي سيميز تلقائيا مناطق الدماغ اليمنى واليسرى. تأخذ الفئران التي تم اختيارها للدراسات الحركية الحسية واختبار assymetry الثنائية ولصق الشريط الورقي على الجزء الصافث من كل مخلب أمام ثلاث مرات باستخدام ضغط متساو.
لكل فأر، سجل مع الكاميرا عدد المرات التي اتصالات مخلب كل الأمامية وإزالة الشريط في غضون خمس دقائق بما في ذلك مرات مخلب المتضررة والمتأثرة. كرر التفاف وتسجيل بعد 30 دقيقة ثم حساب القيم. بالنسبة لاختبار المشي في الشبكة، ضع الجرذ في وسط منصة سطح الشبكة المرتفعة مع فتحات 2.5 سنتيمتر مربع.
دفع الوركين الفئران قليلا لتشجيعه على التحرك عبر السطح. باستخدام الكاميرا، سجل عدد من أخطاء القدم التي أدلى بها الأطراف المتضررة اليمنى والمتأثرة اليسار ورقم الخطوة الإجمالية في دقيقة واحدة مع الكاميرا. لاختبار قضيب الدوار، قم بإعداد جهاز التعب شريط الدورية الفئران إلى سرعة 13 دورة في الدقيقة على مدى فترة خمس دقائق باستخدام برنامج الدعم.
بدء تشغيل برنامج الكمبيوتر ووضع الفئران على حلقات قضيب الدوار في نفس الوقت. إنهاء المحاكمة إذا سقط الجرذ من الحلبة أو بعد خمس دقائق وتسجيل وقت الدوران. اترك الجرذ ليرتاح لمدة 30 دقيقة، ثم كرر الاختبار مرتين أكثر واختر القيمة القصوى كآخر وقت دوار.
لرفع حبل الاختبار، ووضع أداة رفع حبل على مكتب. يكون الجرذان قبضة الحبل مع forelimbs والسماح لها شنق. تسجيل وقت تعليق وحساب الدرجات.
عندما تمت دراسة إصابة الدماغ الإقفارية الناجمة عن انسداد الشريان الدماغي الأوسط وإعادة ضخه ، ثبت أن وزن 300 جرام 3040 thread bolt ووقت الدماغ في مزرعة لمدة ثلاث ساعات هو الأنسب مع أكبر احتشاء دماغي ، وأعلى درجة أطول ، وأكبر نسبة نجاح في النموذج. وقد تحسن هذا بشكل ملحوظ بالمقارنة مع العلاج التقليدي ل 275 غرام الوزن، 2636 مؤشر الترباس والساعتين الدماغي. لدراسة حالة التعافي من نقص التروية في الدماغ، تم تنفيذ تلطيخ TTC وكشفت عن حجم النقش وتقلص في 23.4٪ في اليوم الأول بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط وإعادة ضخ، 19.6٪ في اليوم 35، 16.1٪ على 60 و 15.7٪ على 90.
بعد يوم واحد من انسداد الشريان الدماغي الأوسط وإعادة ضخ، والتحيز الحركي الحسي في اختبار قياس الحساسية الثنائية، وأوقات خطأ المشي في الشبكة في اختبار المشي في الشبكة ورفع درجة حبل في اختبار رفع الحبل يتم زيادتها في حين أن وقت قضيب الدوار في اختبار قضيب الدوار انخفض مما يشير إلى أهمية هذه الاختبارات في دراسة نقص التروية الحادة في الدماغ. فقط الحفاظ على التحيز الحركي الحسي اضطرابات وظيفية كبيرة مع طريقة تعتمد على الوقت بعد 35 و 60 و 90 يوما من انسداد الشريان الدماغي الأوسط و reperfusion. بالنسبة لاختبار المشي في الشبكة ، كانت هناك اختلافات كبيرة في أوقات خطأ المشي في الشبكة لمدة 35 و 60 يومًا.
وأشارت هذه النتائج إلى أن هذين الاختبارين يمكن أن يكونا مناسبين لاختبار الانتعاش في الفئران. من أجل ضمان النجاح، يجب أن يكون العمل لطيف ويجب أن تكون العملية ثابتة. قد تكون الاختبارات السلوكية الأخرى مثل اكتشاف المشية مناسبة أيضًا لهذا النموذج.
تطوير هذا النموذج يمكن أن يمهد الطريق للباحثين لاستكشاف نقص تروية الدماغ في مراحل الانتعاش وتتمة.
