Diese Studie verwendet ein etabliertes Tiermodell, um die Erholung und die Fortsetzungsstadien der Gehirn-Ischämie zu erforschen. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie stabil, zuverlässig und relativ einfach ist. Beginnen Sie, indem Sie eine anästhesierte Ratte auf einen chirurgischen Fixiertisch legen.
Während der gesamten Operation, halten Sie die Körpertemperatur der Ratte bei 37 Grad Celsius in einem kleinen Tierthermostat. Verbinden Sie den Mund mit der Anästhesie-Maschinenmaske und bestätigen Sie tiefe Anästhesie durch mangelende Extremitätsspannung, Hornhautreflexe und Schmerzen. Befestigen Sie die Gliedmaßen der Ratte mit Papierverbänden am Operationstisch.
Mit einem elektrischen Rasierer, entfernen Sie den Nackenmantel und sterilisieren Sie den Hals mit 75%Alkohol. Verwenden Sie eine Augenschere, um zwei bis drei Zentimeter entlang der zentralen Längsform des Halses zu schneiden. Und dann mit ophthalmologischen Zangen, trennen Sie den subkutanen Muskel.
Verwenden Sie hausgemachte Retraktor, um das Feld der Vision vollständig zu entlarven. Es muss darauf geachtet werden, dass für alle chirurgischen Überlebensoperationen eine geeignete aseptische Technik vorliegt. Die später im Video dargestellte Technik sollte während des gesamten Verfahrens geübt werden.
Verwenden Sie die Mikrozange, um die gemeinsame Halsschlagader, die äußere Halsschlagader und die innere Halsschlagader zu isolieren. Arbeiten unter dem Mikroskop, verwenden Sie 8-0 Nähte, um die gemeinsame Halsschlagader mit hartem Knoten, externe Halsschlagarterie weit weg vom Herzende mit hartem Knoten, innere Karotisarterie mit losem Knoten zu ligan und dann die äußere Halsschlagader in der Nähe des Herzendes auszusäumen. Schneiden Sie mit einer Mikroschere eine kleine Öffnung in die äußere Halsschlagader und legen Sie vorsichtig eine Gewindeschraube ein.
Ligate die Naht der äußeren Halsschlagader, die dünn und locker Knoten ist und schneiden Sie die äußere Halsschlagader. Lösen Sie den losen Knoten der inneren Halsschlagader und setzen Sie den Gewindebolzen am Anfang der mit der Naht markierten mittleren Hirnarterie ein und schneiden Sie den freiliegenden Gewindebolzen ab. Nachdem die ischämische Zeit nach zwei bis drei Stunden erreicht ist, fixieren Sie die Fraktur der äußeren Halsschlagader mit Mikrozangen und ziehen Sie den Fadenbolzen vorsichtig mit einer anderen Mikrozange heraus.
Nachdem Sie das vordere Ende der Gewindeschraube vollständig aus der inneren Halsschlagader zurückgezogen haben, ligaten Sie die äußere Halsschlagader, die mit 8-0 ausgekleidet wurde und entfernen Sie dann die Gewindeschraube vollständig. Nach dem Lösen der gemeinsamen Halsschlagader, tupfe etwa 50.000 Einheiten Penicillin-Natriumpulver auf der Wundoberfläche, um eine Infektion zu verhindern. Verwenden Sie vier Nähte, um subkutane Muskeln und Haut zu naht.
Nachdem Sie die Ratte wieder in den Käfig gebracht haben, verwenden Sie eine Ein-Milliliter-Spritze, um der Ratte oral etwa 0,2 Milliliter Wasser zu geben, um eine postoperative Dehydrierung zu verhindern. Wählen Sie die Tiere nach der längsten Punktzahl für TTC Färbung oder sensorische motorische Studien. Nach der Inkubation des Gehirns isoliert für TTC Färbung bei minus 20 Grad Celsius von 30 Minuten, legen Sie es in einer vorgekühlten Ratte Gehirn Scheibe Schimmel.
Schneiden Sie das Gehirn mit einer vorgekühlten Klinge in sechs zwei Millimeter dicke aufeinanderfolgende Abschnitte. Die Abschnitte mit 2%TTC in einer Sechs-Brunnen-Kulturplatte färben und 30 bis 60 Minuten bei 37 Grad Celsius beim Schütteln bebrüten. Alle 10 Minuten die Abschnitte umzudrehen, bis die Gehirnischämie und die nicht betroffenen Bereiche sichtbar weiß und rot sind.
Line das Gehirn schneidet vertikal auf dem schwarzen Karton in der Reihenfolge von hinten nach vorne des Gehirns mit einem Lineal, um sicherzustellen, dass die Gesamtlänge jeder Linie gleich ist und fotografieren. Importieren Sie das Foto und wählen Sie die Gehirnscheiben aus. Wählen Sie schwarzen Vordergrund aus, und geben Sie Alt Delete ein, um die Hintergrundfarbe zu füllen, und steuern Sie dann D, um die Auswahl aufzuheben.
Speichern Sie schließlich das Bild auf dem Desktop. Um das Infarktvolumen zu analysieren, öffnen Sie zuerst die Software und importieren Sie das Foto. Um eine Fehleränderung vorzunehmen, passen Sie die Helligkeit mit dem Kontrastverbesserungswerkzeug so an, dass der Hintergrund schwarz ist.
Verwenden Sie im Filter das Medianwerkzeug, um die Hervorhebungen zu entfernen. Um den linken normalen Hirnbereich zu berechnen, wählen Sie Farbe mit Segmentierung und passen Sie den Wert von H, S und I an, um die Gehirnscheiben vom schwarzen Hintergrund zu trennen. Kehren Sie zur Zählgröße zurück und klicken Sie auf Count.
Klicken Sie in der Bearbeitung auf geteilte Objekte, um das Gehirn von der Mittellinie zu trennen, wodurch links und rechts automatisch der Gehirnbereich getrennt wird. Um den rechten Hirnbereich des Infarts zu berechnen, importieren Sie das Bild, passen Sie den Hintergrund an, und entfernen Sie die Hervorhebungen wie zuvor. Wählen Sie die Anzahl Größe und klicken Sie auf Zeichnen Merge Objekte Werkzeug in bearbeitung.
Wählen Sie manuell den ischämischen Bereich aus und klicken Sie auf Anzahl, um das ischämische Gebiet zu berechnen. Um den richtigen gesunden Gehirnbereich zu berechnen, importieren Sie zuerst das Bild, passen Sie den Hintergrund an, und entfernen Sie die Highlights wie zuvor. Wählen Sie Farbe mit Segmentierung und passen Sie den Wert von H, S und I an, um die gesunden Gehirnscheiben vom schwarzen Hintergrund zu trennen.
Kehren Sie zur Zählgröße zurück, und klicken Sie auf Anzahl, um diesen Bereich zu berechnen. Klicken Sie in der Bearbeitung auf geteilte Objekte, um das Gehirn von der Mittellinie zu trennen, wodurch links und rechts automatisch der Gehirnbereich getrennt wird. Nehmen Sie Ratten, die für sensorische motorische Studien und für bilaterale Assymmetrietests ausgewählt wurden, und wickeln Sie Papierband auf den saftigen Teil jeder Vorderkralle dreimal mit gleichem Druck.
Zeichnen Sie für jede Ratte mit der Kamera auf, wie oft jede Vorderkklappe Kontakte und entfernt das Band innerhalb von fünf Minuten einschließlich nicht betroffener und betroffener Pfotenzeiten. Wiederholen Sie das Umwickeln und Die Aufzeichnen nach 30 Minuten, und berechnen Sie dann die Werte. Legen Sie die Ratte für den Gitterlauftest in die Mitte einer erhöhten Gitteroberflächenplattform mit 2,5 QuadratzentimeterÖffnungen.
Drücken Sie die Hüften der Ratte leicht, um sie zu ermutigen, sich über die Oberfläche zu bewegen. Zeichnen Sie mit der Kamera die Anzahl der Fußfehler auf, die von den rechten, nicht betroffenen und linken betroffenen Gliedmaßen und der Gesamtzahl der Schrittzahlen in einer Minute mit der Kamera gemacht wurden. Richten Sie für die Rotorstangenprüfung das Rattendrehstab-Ermüdungsgerät über einen Zeitraum von fünf Minuten mit der unterstützenden Software auf eine Geschwindigkeit von 13 Umdrehungen pro Minute ein.
Starten Sie das Computerprogramm und legen Sie die Ratte gleichzeitig auf die Rotorstangenringe. Beenden Sie die Testversion, wenn die Ratte vom Ring fällt oder nach fünf Minuten und notieren Sie die Rotierende Zeit. Lassen Sie die Ratte 30 Minuten ruhen, wiederholen Sie dann den Test noch zweimal und wählen Sie den Maximalwert als letzte Drehzeit aus.
Legen Sie das Hebeseilinstrument für die Hebeseilprüfung auf einen Schreibtisch. Lassen Sie die Ratte das Seil mit seinen Vorderbeinen greifen und hängen lassen. Zeichnen Sie die Zeit des Aufhängens auf und berechnen Sie die Partituren.
Als eine ischämische Hirnverletzung, die durch mittlere Hirnarterienverschluss und Reperfusion induziert wurde, untersucht wurde, erwiesen sich 300 Gramm Gewicht 3040 Fadenbolzen und drei Stunden Hirninfarktzeit als die am besten geeignete mit dem größten Hirninfarkt, der höchsten längsten Punktzahl und dem größten Modellerfolgsverhältnis. Dies wurde im Vergleich zur konventionellen Behandlung von 275 Gramm Gewicht, 2636 Gewindebolzen und zweistündiger Hirninfarktzeit deutlich verbessert. Um den Erholungsstatus der Gehirn-Ischämie zu untersuchen, wurde TTC-Färbung durchgeführt und es zeigte den Infarkt und Schrumpfvolumen bei 23,4% am ersten Tag nach der mittleren zerebralen Arterie okklusion und Reperfusion, 19,6% am 35. Tag, 16,1% am 60. und 15,7% am 90.
Nach einem Tag mittlerer Zerebrierungsverschluss und Reperfusion, sensorischer motorischer Verzerrung im bilateralen Assymemetrietest, Rasterlauffehlerzeiten im Gitterlauftest und Hebeseilpunktzahl im Hebeseiltest werden alle erhöht, während die Rotorstangenzeit im Rotorstabtest verringert wird, was auf die Bedeutung dieser Tests bei der Untersuchung akuter Hirnischämie hindeutet. Nur sensorische motorische Voreingenommenheit hielt große Funktionsstörungen mit einer zeitabhängigen Art und Weise nach 35, 60 und 90 Tagen mittlerer Zerebralpisse und Reperfusion aufrecht. Für den Grid Walking Test gab es signifikante Unterschiede bei den Fehlerzeiten des Gitters für 35 und 60 Tage.
Diese Ergebnisse deuteten darauf hin, dass diese beiden Tests geeignet sein könnten, um die Erholung bei Ratten zu testen. Um den Erfolg zu gewährleisten, sollte die Aktion sanft und die Bedienung sollte stabil sein. Andere Verhaltenstests wie die Gangerkennung sind möglicherweise auch für dieses Modell geeignet.
Die Entwicklung dieses Modells könnte den Weg für Forscher ebnen, um die Gehirn-Ischämie in den Erholungs- und Folgestadien zu erforschen.
