Это исследование использует установленную модель животных для исследования восстановления и sequelae этапов ишемии мозга. Основными преимуществами этой техники являются то, что она стабильна, надежна и относительно проста. Начните с размещения анестезированой крысы на хирургическом фиксировании стола.
На протяжении всей операции, поддерживать температуру тела крысы на 37 градусов по Цельсию в маленьком животном термостат. Подключите рот к анестезии машины маски и подтвердить глубокую анестезию отсутствием напряжения конечностей, роговицы рефлексы и боль. Зафиксите конечности крысы на операционном столе с помощью бумажных бинтов.
С электрической бритвой, удалить шею пальто и стерилизовать шею с 75% алкоголя. Используйте офтальмологические ножницы, чтобы сократить два-три сантиметра вдоль центральной продольной формы шеи. А потом с офтальмологическими типсами отделяем подкожные мышцы.
Используйте самодельный ретрактор, чтобы полностью разоблачить поле зрения. Необходимо позаботиться о том, чтобы представить соответствующую асептическую технику для всех хирургических процедур выживания. Техника, проиллюстрированная позже в видео, должна практиковаться на протяжении всей процедуры.
Используйте микро-типсы, чтобы изолировать общую сонную артерию, внешнюю сонную артерию и внутреннюю сонную артерию. Работая под микроскопом, используйте 8-0 швы, чтобы ligate общей сонной артерии с жесткий узел, внешняя сонная артерия далеко от сердца конца с жесткий узел, внутренняя сонная артерия с рыхлым узлом, а затем линии внешней сонной артерии вблизи конца сердца. Используя микро ножницы, вырежьте небольшое отверстие во внешней сонной артерии и аккуратно вставьте нить болт.
Лигат шва внешней сонной артерии, которая является тонким и свободным узлом и отрезать внешнюю сонную артерию. Ослабить свободный узел внутренней сонной артерии и продолжать вставлять болт нити к началу средней мозговой артерии отмечены швом и отрезать открытый болт нити. После того, как ишемическое время будет достигнуто через два-три часа, исправить перелом внешней сонной артерии с помощью микро типсов и осторожно вытащить нить болт с другой микро типсов.
После полного снятия передней части нити болт из внутренней сонной артерии, ligate внешней сонной артерии, которая была выложена с 8-0 шва, а затем удалить нить болт полностью. После ослабления общей сонной артерии, мазок около 50000 единиц пенициллина натрия порошок на поверхности раны, чтобы предотвратить инфекцию. Используйте четыре шва для швов подкожных мышц и кожи.
После размещения крысы обратно в клетку, использовать один миллилитр шприц, чтобы дать примерно 0,2 миллилитров воды крысы устно, чтобы предотвратить послеоперационное обезвоживание. Выберите животных в соответствии с самой длинной оценкой для Окрашивания ТТК или сенсорных моторных исследований. После инкубации мозга изолированы для ТТК окрашивания при температуре минус 20 градусов по Цельсию 30 минут, поместите его в предварительно охлажденой крысы мозга ломтик плесени.
Используя предварительно охлажденое лезвие, разрежьте мозг на шесть двухмиллиметровых толстых последовательных секций. Пятно разделов с 2%TTC в шесть хорошо культуры пластины и инкубировать в течение 30 до 60 минут при 37 градусов по Цельсию во время встряхивания. Каждые 10 минут переворачивать секции до тех пор, пока ишемия мозга и неафектированы области заметно белый и красный.
Линия мозга ломтиками вертикально на черном картоне для того, чтобы от спины к передней части мозга с помощью линейки, чтобы убедиться, что общая длина каждой линии одинакова и сфотографировать. Импорт фото и выбрать ломтики мозга. Выберите черный передний план и ввените Alt Delete, чтобы заполнить цвет фона, а затем управление D для выбора.
Наконец, сохраните изображение на рабочем столе. Чтобы проанализировать объем инфаркта, сначала откройте программное обеспечение и импортируйте фотографию. Чтобы изменить дефект, отрегулируйте яркость с помощью инструмента повышения контрастности так, чтобы фон был черным.
В фильтре используйте медианный инструмент для удаления основных моментов. Чтобы вычислить левую нормальную область мозга, выберите цвет с помощью сегментации и отрегулируйте значение H, S и I, чтобы отделить ломтики мозга от черного фона. Вернитесь, чтобы подсчитать размер и нажмите на счет.
Нажмите на разделенные объекты в редактировании, чтобы отделить мозг от средней линии, которая будет автоматически различать левые и правые области мозга. Чтобы вычислить правильную область мозга, импорт изображения, настроить фон, и удалить основные моменты, как это было сделано ранее. Выберите размер счета и нажмите на инструмент для редактирования объектов слияния.
Вручную выберите ишемическую область и нажмите кол для расчета ишемической области. Чтобы вычислить правильную здоровую область мозга, сначала импорт изображения, настроить фон, и удалить основные моменты, как это было сделано ранее. Выберите цвет с помощью сегментации и отрегулируйте значение H, S и I, чтобы отделить здоровые ломтики мозга от черного фона.
Вернитесь, чтобы подсчитать размер и нажмите на счет, чтобы вычислить эту область. Нажмите на разделенные объекты в редактировании, чтобы отделить мозг от средней линии, которая будет автоматически различать левые и правые области мозга. Возьмите крыс, выбранных для сенсорных исследований двигателя и для двустороннего теста ассиметрии и оберните бумажную ленту на сафеновой части каждого когтя три раза, используя равное давление.
Для каждой крысы, запись с камерой количество раз каждый передний коготь контактов и удаляет ленту в течение пяти минут, включая не влияет и пострадавших лапы раз. Повторите упаковку и запись через 30 минут, а затем вычислите значения. Для испытания сетки ходьба, поместите крысу в центре повышенной поверхности сетки платформы с 2,5 квадратных сантиметров отверстия.
Нажмите бедра крысы немного, чтобы побудить его двигаться по поверхности. Используя камеру, замечете количество неисправностей стопы, сделанных правой незатронутой и левой пораженными конечностями, и общее число шагов за одну минуту с помощью камеры. Для испытания роторного стержня, настроить крысы вращающейся бар усталости аппарата на скорости 13 об /мин в течение пяти минут с использованием вспомогательного программного обеспечения.
Запустите компьютерную программу и поместите крысу на кольца стержня ротора в то же время. Завершите испытание, если крыса упадет с ринга или через пять минут и завемите время вращения. Оставьте крысу на 30 минут, затем повторите тест еще дважды и выберите максимальное значение в качестве последнего вращающегося времени.
Для подъема веревки тест, поместите подъемный канат инструмент на стол. Пусть крыса схвятет веревку своими конечностями и позволит ей висеть. Завечите время повешения и рассчитайте баллы.
Когда была изучена ишемическая травма головного мозга, вызванная окклюзией и реперфузией средней мозговой артерии, 300 грамм веса 3040 нитей и трехчасовое время инфаркта мозга оказались наиболее подходящими с самым большим инфарктом головного мозга, самым высоким самым длинным показателем и наибольшим соотношением успеха модели. Это было значительно улучшено по сравнению с обычным лечением 275 грамм веса, 2636 нитей болт и два часа мозга инфаркт времени. Для изучения состояния восстановления ишемии мозга, ТТК окрашивание было выполнено, и он показал инфаркт и уменьшить объем на 23,4% в первый день после средней окклюзии мозговой артерии и реперфузии, 19,6% на 35-й день, 16,1% на 60-м и 15,7% на 90-й.
После одного дня средней мозговой артерии окклюзии и reperfusion, сенсорный двигатель смещения в двустороннем тесте ассиметрии, сетки ходьбе ошибка раз в сетке ходьбе тест и подъем веревки оценка в подъемной веревки тест все увеличивается в то время как время ротора стержня в тесте ротора стержня снизилась, указывая на важность этих тестов в изучении острой ишемии мозга. Только сенсорный двигатель смещения поддерживается большие функциональные расстройства с зависимым от времени образом после 35, 60 и 90 дней средней мозговой артерии окклюзии и reperfusion. Для теста сетки ходьбы, были значительные различия сетки ходьбе время ошибки в течение 35 и 60 дней.
Эти результаты показали, что эти два теста могут быть пригодны для тестирования восстановления у крыс. Для того, чтобы обеспечить успех, действие должно быть мягким и операция должна быть стабильной. Другие поведенческие тесты, такие как обнаружение походки, также могут подходить для этой модели.
Разработка этой модели может проложить путь для исследователей, чтобы исследовать ишемию мозга в восстановлении и sequelae этапов.
