מודל טרום קליני להעריך את ההתאוששות המוח לאחר שבץ חריף בחולדות

מחקר זה משתמש במודל מבוסס של בעלי חיים כדי לחקור את ההתאוששות ואת שלבי ההמשך של מכון המוח. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא יציבה, אמינה ופשוטה יחסית. התחל על ידי הנחת חולדה הרדמה על שולחן תיקון כירורגי.

לאורך כל הניתוח, לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדה ב 37 מעלות צלזיוס בתרמוסטט בעלי חיים קטן. חבר את הפה למסכת מכונת ההרדמה ואשר הרדמה עמוקה על ידי חוסר מתח בגפיים, רפלקסים בקרנית וכאב. תקן את גפי החולדה לשולחן הניתוחים באמצעות תחבושות נייר.

בעזרת מכונת גילוח חשמלית, הסירו את מעיל הצוואר ועקרו את הצוואר ב-75% אלכוהול. השתמש מספריים עיניים לחתוך שניים עד שלושה סנטימטרים לאורך הצורה האורך המרכזית של הצוואר. ואז עם מטלות עיניים, להפריד את השריר התת עורי.

השתמש מפשק תוצרת בית כדי לחשוף באופן מלא את שדה הראייה. יש לדאוג להציג טכניקה אספטית מתאימה לכל הליכי ההישרדות הכירורגיים. הטכניקה הממחירה מאוחר יותר בסרטון צריכה להיות מתורגלת לאורך כל ההליך.

השתמש במטחני המיקרו כדי לבודד את העורק הראשי המשותף, את העורק הראשי החיצוני ואת העורק הראשי הפנימי. עבודה תחת המיקרוסקופ, השתמש 8-0 תפרים כדי לקשור את העורק הראשי המשותף עם קשר קשה, עורק חיצוני רחוק מקצה הלב עם קשר קשה, עורק פנימי עם קשר רופף ולאחר מכן כדי קו העורק הראשי החיצוני ליד קצה הלב. בעזרת מיקרו מספריים, חותכים פתח קטן לעורק הראשי החיצוני ומכניסים בעדינות בורג חוט.

Ligate התפר של העורק הראשי החיצוני כי הוא קשר דק רופף לחתוך את העורק הראשי החיצוני. שחררו את הקשר הרופף של העורק הראשי הפנימי והמשיכו להכניס את בורג החוט לתחילת העורק המוחי האמצעי המסומן בתפר וחתכו את בורג החוט החשוף. לאחר שהזמן האיסכמי מגיע לאחר שעתיים עד שלוש שעות, לתקן את השבר של העורק הראשי החיצוני באמצעות מטלות מיקרו בעדינות לשלוף את בורג החוט עם מדפים מיקרו אחרים.

לאחר משיכת לחלוטין את הקצה הקדמי של בורג החוט מהעורק הראשי הפנימי, ligate העורק הראשי החיצוני כי כבר מרופד עם 8-0 תפר ולאחר מכן להסיר את הבורג חוט לחלוטין. לאחר שחרור העורק הראשי המשותף, טבול כ 50, 000 יחידות של אבקת נתרן פניצילין על פני השטח של הפצע כדי למנוע זיהום. השתמש בארבע תפרים לתפור שרירים תת עוריים ועור.

לאחר הנחת החולדה בחזרה לכלוב, השתמש במזרק מיליליטר אחד כדי לתת כ 0.2 מיליליטר של מים לחולדה דרך הפה כדי למנוע התייבשות לאחר הניתוח. בחר את בעלי החיים על פי הציון הארוך ביותר עבור כתמי TTC או מחקרים מוטוריים חושיים. לאחר הדגירה המוח מבודד עבור כתמים TTC במינוס 20 מעלות צלזיוס של 30 דקות, למקם אותו בתבנית פרוסת מוח עכברוש מקורר מראש.

בעזרת להב מקורר מראש, חותכים את המוח לשישה חלקים רצופים בעובי שני מילימטרים. מכתימים את החלקים ב-2%TTC בצלחת תרבות בת שש בארות ודגירה במשך 30 עד 60 דקות ב-37 מעלות צלזיוס תוך כדי רעידות. כל 10 דקות, להפוך את החלקים עד קשה במוח ואת האזורים שאינם מושפעים הם לבנים ואדומים בעליל.

מרווים את פרוסות המוח אנכית על הקרטון השחור לפי הסדר מהגב לחזית המוח באמצעות סרגל כדי להבטיח שהאורך הכולל של כל שורה יהיה זהה ויצלם. יבא את התמונה ובחר את פרוסות המוח. בחר קידמה שחורה והקלד Alt Delete כדי למלא את צבע הרקע ולאחר מכן שלוט D כדי לבטל את הבחירה.

לבסוף, שמור את התמונה בשולחן העבודה. כדי לנתח את אמצעי האחסון האוטם, פתח תחילה את התוכנה וייבא את התמונה. כדי לערוק משינוי, התאם את הבהירות באמצעות הכלי לשיפור הניגודיות כך שהרקע יהיה שחור.

במסנן, השתמש בכלי החציון כדי להסיר את אזורי האור. כדי לחשב את אזור המוח הנורמלי השמאלי, בחר צבע באמצעות פילוח והתאם את הערך של H, S ואני כדי להפריד את פרוסות המוח מהרקע השחור. חזור לגודל הספירה ולחץ על הספירה.

לחץ על אובייקטים מפוצלים בעריכה כדי להפריד את המוח מהקו האמצע אשר יבחין באופן אוטומטי באזורי המוח השמאליים והימין. כדי לחשב את אזור המוח האוטם הנכון, יבא את התמונה, התאם את הרקע והסר את אזורי האור כפי שנעשה קודם לכן. בחר גודל ספירה ולחץ על הכלי ציור אובייקטי מיזוג בעריכה.

בחר ידנית את האזור האיסכמי ולחץ על ספירה כדי לחשב את האזור האיסכמי. כדי לחשב את אזור המוח הבריא הנכון, ייבא תחילה את התמונה, התאם את הרקע והסר את אזורי האור כפי שנעשה קודם לכן. בחר צבע באמצעות פילוח והתאם את הערך של H, S ואני כדי להפריד את פרוסות המוח הבריאות מהרקע השחור.

חזור לגודל הספירה ולחץ על ספירה כדי לחשב אזור זה. לחץ על אובייקטים מפוצלים בעריכה כדי להפריד את המוח מהקו האמצע אשר יבחין באופן אוטומטי באזורי המוח השמאליים והימין. קח חולדות שנבחרו למחקרים מוטוריים חושיים ולמבחן א-סימטריה דו-צדדי ועטוף סרט נייר על החלק הפתי של כל טופר קם שלוש פעמים באמצעות לחץ שווה.

עבור כל חולדה, הקלט במצלמה את מספר הפעמים שכל טופר הקדמי יוצר קשר ומסיר את הקלטת תוך חמש דקות, כולל זמני כפות רגליים לא מושפעים ומושפעים. חזור על גלישה והקלטה לאחר 30 דקות ולאחר מכן חשב את הערכים. לבדיקת הליכה ברשת, מניחים את החולדה במרכז פלטפורמת משטח רשת מוגבהת עם פתחים של 2.5 ס"מ רבועים.

לדחוף את הירכיים של החולדה מעט כדי לעודד אותו לנוע על פני השטח. באמצעות המצלמה, להקליט את מספר תקלות ברגל שנעשו על ידי ימין מושפע שמאלה הגפיים המושפעות ואת מספר הצעד הכולל בדקה אחת עם המצלמה. לבדיקת מוט רוטור, הגדר את מנגנון עייפות הבר המסתובב של החולדה למהירות של 13 סל"ד על פני תקופה של חמש דקות באמצעות התוכנה התומכת.

הפעל את תוכנת המחשב והצב את החולדה על טבעות מוט הרוטור בו זמנית. סיים את המשפט אם החולדה נופלת מהטבעת או אחרי חמש דקות ותקליט את הזמן המסתובב. השאירו את החולדה לנוח במשך 30 דקות, ולאחר מכן לחזור על הבדיקה פעמיים נוספות ולבחור את הערך המרבי כמו הזמן המסתובב האחרון.

לבדיקת חבל הרמה, מניחים את כלי חבל ההרמה על שולחן. תן לחולדה לאחוז בחבל עם צלעותיו ולתת לו להיתלות. רשום את זמן התלייה וחשב את הציונים.

כאשר נחקרה פגיעה איסכמית במוח הנגרמת על ידי העורק המוחי האמצעי והתרשמות, 300 גרם משקל 3040 בורג חוט וזמן אוטם מוחי של שלוש שעות הוכיחו להיות המתאים ביותר עם אוטם מוחי הגדול ביותר, הציון הארוך ביותר, ואת יחס ההצלחה המודל הגדול ביותר. זה שופר באופן משמעותי בהשוואה לטיפול הקונבנציונלי של 275 גרם משקל, 2636 חוט בורג ותזמן אוטם מוחי של שעתיים. כדי לחקור את מצב ההחלמה של אצ'מיה במוח, התבצעה הכתמת TTC והיא חשפה את נפח אוטם וכיווץ ב 23.4% ביום הראשון לאחר העורק המוחי האמצעי ו reperfusion, 19.6% ביום ה -35, 16.1%על 60 ו 15.7% על 90.

לאחר יום אחד של העורק המוחי האמצעי occlusion ו reperfusion, הטיה מוטורית חושית במבחן א-סימטריה דו-צדדית, זמני שגיאת הליכה ברשת מבחן הליכה והרמת ציון חבל במבחן חבל הרמה כל גדל בעוד מוט הרוטור זמן במבחן מוט רוטור ירד המציין את החשיבות של בדיקות אלה בחקר אצ'מיה מוחית חריפה. רק הטיה מוטורית חושית שמרה על הפרעות תפקודיות גדולות באופן תלוי זמן לאחר 35, 60 ו -90 ימים של עורק עורק מוחי באמצע והשלכות. עבור מבחן הליכה ברשת, היו הבדלים משמעותיים של זמני שגיאת הליכה ברשת במשך 35 ו 60 ימים.

תוצאות אלו הצביעו על כך ששני הבדיקות הללו עשויות להתאים לבדיקת ההתאוששות בחולדות. על מנת להבטיח הצלחה, הפעולה צריכה להיות עדינה והניתוח צריך להיות יציב. בדיקות התנהגותיות אחרות כגון זיהוי הליכה עשויות להתאים גם הן למודל זה.

פיתוח מודל זה יכול לסלול את הדרך לחוקרים לחקור את מכון המוח בשלבי ההתאוששות וההמשך.