Bu çalışma, beyin iskemisinin iyileşmesini ve sekeli evrelerini araştırmak için yerleşik bir hayvan modeli kullanmaktadır. Bu tekniğin başlıca avantajları istikrarlı, güvenilir ve nispeten basit olmasıdır. Bir cerrahi sabitleme masasına anestezili bir sıçan yerleştirerek başlayın.
Ameliyat boyunca, küçük bir hayvan termostatında 37 santigrat derecede sıçanın vücut ısısını koruyun. Anestezi makinesi maskesi ağız bağlayın ve ekstremite gerginlik, kornea refleksleri ve ağrı eksikliği ile derin anestezi onaylamak. Kağıt bandajlar kullanarak farenin uzuvlarını ameliyat masasına sabitle.
Elektrikli tıraş ile boyun katını çıkarın ve boynu %75 alkolle sterilize edin. Boynun merkezi uzunlamasına şekli boyunca 2-3 santimetre kesmek için oftalmik makas kullanın. Ve sonra oftalmik büşonlar ile, deri altı kas ayırın.
Tamamen görme alanı ortaya çıkarmak için ev yapımı retraktör kullanın. Tüm sağkalım cerrahisi için uygun aseptik tekniğin sunulması için özen sağlanmalıdır. Videoda daha sonra gösterilen teknik tüm yordam boyunca uygulanmalıdır.
Ortak karotis arter izole etmek için mikro forceps kullanın, dış karotis arter ve internal karotis arter. Mikroskop altında çalışmak, 8-0 kullanın sert düğüm ile ortak karotis arter ligate için dikişler, sert düğüm ile kalp ucundan uzak dış karotid arter, gevşek düğüm ile iç karotis arter ve daha sonra kalp ucuna yakın dış karotid arter hattı. Mikro makas kullanarak, dış karotis arter küçük bir açıklık kesmek ve yavaşça bir iplik cıvata takın.
İnce ve gevşek düğüm ve dış karotis arter kesilmiş dış karotis arter dikiş ligate. Internal karotis arter gevşek düğüm gevşetin ve orta serebral arter ucuta ile işaretlenmiş başına iplik cıvata eklemeye devam ve maruz iplik cıvata kesti. Iskemik zaman iki ila üç saat sonra ulaşıldıktan sonra, mikro forceps kullanarak dış karotis arter kırığı düzeltmek ve yavaşça başka bir mikro forceps ile iplik cıvata çekin.
İplik cıvatasının ön ucunu internal karotis arterden tamamen çektikten sonra, 8-0 ile kaplı olan dış karotis arteri sıvılaştırmak dikiş ve sonra iplik cıvata tamamen çıkarın. Ortak karotis arter gevşetilmesinden sonra, enfeksiyon önlemek için yara yüzeyinde penisilin sodyum tozu yaklaşık 50, 000 adet dab. Deri altı kasları ve cildi dikmek için dört dikiş kullanın.
Fareyi kafese geri yerleştirdikten sonra, ameliyat sonrası dehidratasyondan korunmak için fareye yaklaşık 0,2 mililitre su vermek için bir mililitrelik şırınga kullanın. TTC boyama veya duyusal motor çalışmaları için en uzun skora göre hayvanları seçin. 30 dakika eksi 20 santigrat derece ttc boyama için izole beyin kuluçka sonra, önceden soğutulmuş sıçan beyin dilim kalıp yerleştirin.
Önceden soğutulmuş bir bıçak kullanarak, beyni arka arkaya altı tane iki milimetre kalınlığında kes. Altı kuyulu bir kültür plakasında %2 TTC ile kesitleri lekeleyin ve sallayarak 37 derecede 30 ila 60 dakika kuluçkaya yatırın. Her 10 dakikada bir, beyin iskemi ve etkilenmemiş alanlar gözle görülür beyaz ve kırmızı olana kadar bölümleri çevirin.
Her satırın toplam uzunluğu aynı olduğundan emin olmak ve fotoğraf çekmek için bir cetvel kullanarak beynin arkasından öne doğru sırayla siyah karton üzerinde dikey beyin dilimleri hattı. Fotoğrafı al ve beyin dilimlerini seç. Arka plan rengini doldurmak için siyah ön plan ve Alt Delete yazın ve ardından seçip dolmasını denetlemek için D'yi denetle'yi seçin.
Son olarak, görüntüyü masaüstüne kaydedin. Enfarktüs hacmini analiz etmek için önce yazılımı açın ve fotoğrafı içe aktarın. Değişikliği hata yapmak için, arka planın siyah olması için kontrast geliştirme aracıyla parlaklığı ayarlayın.
Filtrede, vurguları kaldırmak için ortanca aracı kullanın. Sol normal beyin alanını hesaplamak için, segmentasyon kullanarak renk seçin ve siyah arka plan dan beyin dilimleri ayırmak için H, S ve Ben değerini ayarlayın. Boyutu saymak için geri dönün ve sayım'a tıklayın.
Beyni otomatik olarak sol ve sağ beyin alanlarını ayırt edecek orta hattan ayırmak için düzendeki bölünmüş nesneleri tıklatın. Sağ enfarktüs beyin alanını hesaplamak için görüntüyü içe aktarın, arka planı ayarlayın ve daha önce yapıldığı gibi vurguları kaldırın. Sayım boyutunu seçin ve düzenlemede birleştirme nesneleri aracını birleştir'e tıklayın.
Iskemik alanı el ile seçin ve iskemik alanı hesaplamak için saymayı tıklatın. Doğru sağlıklı beyin alanını hesaplamak için, önce görüntüyü aktarın, arka planı ayarlayın ve daha önce yapılan vurguları kaldırın. Segmentasyon kullanarak renk seçin ve siyah arka plan sağlıklı beyin dilimleri ayırmak için H, S ve Ben değerini ayarlayın.
Boyutu saymak için geri dönün ve bu alanı hesaplamak için sayım'ı tıklatın. Beyni otomatik olarak sol ve sağ beyin alanlarını ayırt edecek orta hattan ayırmak için düzendeki bölünmüş nesneleri tıklatın. Duyusal motor çalışmalar ve ikili assymetry testi için seçilen sıçanları alın ve eşit basınç kullanarak her bir ön pençenin safenöz kısmına kağıt bant sarın.
Her sıçan için, her bir ön pençe kontağını kaç kez kameraya kaydedin ve etkilenmemiş ve etkilenen pençe süreleri de dahil olmak üzere beş dakika içinde bandı kaldırır. 30 dakika sonra sarma ve kaydı tekrarlayın ve sonra değerleri hesaplayın. Izgara yürüyüş testi için, 2,5 santimetre kare açıklıklar ile yüksek bir ızgara yüzey platformunun ortasına sıçan yerleştirin.
Farenin kalçalarını hafifçe itin ve yüzeyde hareket etmesini teşvik edin. Kamerayı kullanarak, sağ dan etkilenmemiş ve sol etkilenen uzuvların yaptığı ayak hatalarının sayısını ve toplam adım numarasını kamerayla bir dakikada kaydedin. Rotor çubuk testi için, destek leyici yazılımı kullanarak beş dakikalık bir süre içinde fare döner çubuk yorulma cihazını beş dakikalık bir süre içinde 13 RPM hıza ayarlayın.
Bilgisayar programını başlatın ve aynı anda rotor çubuk halkaları üzerinde sıçan yerleştirin. Fare halkadan düşerse veya beş dakika sonra denemeyi sonlandırın ve dönen süreyi kaydedin. Fareyi 30 dakika dinlenmeye bırakın, testi iki kez daha tekrarlayın ve son dönen zaman olarak maksimum değeri seçin.
Halat testi kaldırmak için kaldırma halatı aletini bir masaya yerleştirin. Farenin ipi ön ayaklarıyla tutup asmasına izin versin. Asılı kalma süresini kaydedin ve puanları hesaplayın.
Orta serebral arter oklüzyonu ve reperfüzyonu ile indüklenen beyin iskemik hasarı incelendiğinde, 300 gram ağırlık 3040 iplik cıvata ve üç saatlik beyin enfarktüsü süresi en büyük serebral enfarktüs, en yüksek en yüksek skor ve en büyük model başarı oranı ile en uygun olduğu kanıtlanmıştır. Bu önemli ölçüde 275 gram ağırlık, 2636 iplik cıvata ve iki saatlik beyin enfarktüs süresi konvansiyonel tedavi ile karşılaştırıldığında geliştirilmiştir. Beyin iskemisinin iyileşme durumunu incelemek için TTC boyama yapıldı ve orta serebral arter oklüzyonu ve reperfüzyonu sonrası ilk gün %23.4, 35.günde %19.6, 60.günde %16.1 ve 90.'da %15.7 enfarktüs ve küçültme hacmi saptandı.
Orta serebral arter oklüzyonu ve reperfüzyonu bir gün sonra, bilateral assymetri testinde duyusal motor sapma, ızgara yürüme testinde ızgara yürüme hata süreleri ve kaldırma iptestinde kaldırma ipi skoru artarken, rotor çubuk testinde rotor çubuk süresi akut beyin iskemisinin incelenmesinde bu testlerin önemini gösteren azalmıştır. Sadece duyusal motor sapma orta serebral arter oklüzyonu ve reperfüzyon 35, 60 ve 90 gün sonra zamana bağlı bir şekilde büyük fonksiyonel bozukluklar muhafaza. Izgara yürüyüş testi için, 35 ve 60 gün boyunca ızgara yürüme hata süreleri önemli farklılıklar vardı.
Bu sonuçlar, bu iki testin sıçanlarda iyileşmeyi test etmek için uygun olabileceğini göstermiştir. Başarıyı sağlamak için, eylem nazik olmalı ve işlem kararlı olmalıdır. Yürüyüş algılama gibi diğer davranışsal testler de bu model için uygun olabilir.
Bu modelin geliştirilmesi araştırmacılar ın iyileşme ve sekel aşamalarında beyin iskemi keşfetmek için önünü açabilir.
