كلوريد الفينيل يفاقم تلف الكبد الناجم عن عوامل أخرى مثل النظام الغذائي في تركيزات أقل من القيود الحالية على السلامة. لذا، يجب إعادة تقييم معلمات الاستخدام بالنسبة للسكان العاديين. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تستخدم بروتوكول استنشاق مزمن وغير غازي يحاكي عن كثب تعرض الإنسان مع التسبب في الحد الأدنى من الإجهاد للحيوان.
إثبات الإجراء سيكون آنا لانغ، طبيبة ما بعد، وريجينا شنيغلبرغر، طالبة دراسات عليا، كلاهما من مختبري. قبل أسبوع واحد من بدء تجارب الاستنشاق ، وزن جميع الحيوانات التجريبية و وزن كمية الطعام الغذائي منخفض أو عالي الدهون التي سيتم إعطاؤها في القفص. توفير الغذاء والماء libitum الإعلانية، واستبدال الطعام العادية لكل مجموعة التعرض مع الطعام الغذائي منخفضة أو عالية الدهون، حسب الاقتضاء.
وزن ما تبقى من الغذاء في نهاية كل يوم تغذية ورصد الفئران طوال التجربة لضمان الحفاظ على صحة الحيوانات. لإقامة نظام التعرض لاستنشاق كلوريد الفينيل، تأكد من أن الهواء المصفي في كل من غرف التجارب والتحكم هو الهواء الجسيمات عالية الكفاءة والكربون المنشط تصفية، المجففة، والضغط المنظم قبل دخول أجهزة قياس التدفق المعنية. تأكد من أن درجة الحرارة والرطوبة النسبية يتم رصدها من داخل غرف التجارب والتحكم، وأن عوادم الغرفة يتم تمريرها من خلال مرشح HEPA، ومسبار ثاني أكسيد الكربون، ومرشح الكربون المنشط، قبل دخول منطقة العادم في غطاء السيارة الكيميائية للتأكد من أن الفئران تتلقى تهوية مقبولة.
يمكن استخدام البرنامج المخصص لتغيير ورصد وتسجيل المتغيرات البيئية ذات الاهتمام أثناء التعرض للاستنشاق. لإعداد الغرفة للتعرض للاستنشاق ، ابدأ بإيقاف جميع تدفقات الهواء في غرف الاختبار والتحكم. فتح كل باب غرفة ومكان ماصة مواد الفراش، ماصة الجانب حتى، على رأس عموم الفضلات.
ثم، الرطب المواد ماصة لتوفير مستوى الرطوبة مريحة من حوالي 40 إلى 60٪ الرطوبة النسبية طوال فترة التعرض وتعيين مستوى التعرض المطلوب من كلوريد الفينيل في غرفة التجريبية. عندما تكون الغرف جاهزة، قم بنقل الفئران إلى أقفاص فردية داخل رفوف قفص الغرفة المستنشقة، مع عشوائية وضع كل فأر داخل الرفوف يوميًا لضمان تعرض كل فأر بشكل متجانس داخل الغرف. ثم، ضع كل قفص رف في الغرفة الخاصة بها وإغلاق أبواب الغرفة.
لإجراء تجربة التعرض للاستنشاق، تأكد من أن صمام خزان غاز كلوريد الفينيل في وضعية مفتوحة وتعيين تدفق التلوين للغرفة التجريبية إلى 25 لترًا في الدقيقة. تأكد من أن العجل على غرفة التحكم يتم تعيينها إلى 25 لترا في الدقيقة والتحقق من أن جميع أجهزة الاستشعار تعمل بشكل صحيح وعرض النتائج المتوقعة في كل من غرف التجريبية والتحكم. طوال التعرض، ورصد وتسجيل وقت التعرض، وتدفق مسيل، وتدفق كلوريد الفينيل، ودرجة الحرارة والرطوبة، وضغط الغرفة، ومستوى ثاني أكسيد الكربون، والتركيز النظري كلوريد الفينيل في غرفة التجريبية.
تأكد من أن درجة الحرارة والرطوبة لغرفة التحكم يتم عرضها أيضًا، رسمها البيانية، وتسجيلها. في منتصف الطريق تقريبا من خلال كل التعرض، وكسر نصائح الزجاج على أنبوب كاشف كلوريد الفينيل وأنبوب ما قبل المعالجة وإرفاق نهاية تدفق من أنبوب الكشف كلوريد الفينيل إلى مضخة أنبوب كاشف. استخدام قطعة قصيرة من أنابيب لإرفاق تدفق في نهاية أنبوب للكشف كلوريد الفينيل إلى نهاية تدفق خارج أنبوب ما قبل المعالجة وإرفاق قطعة قصيرة من أنابيب إلى تدفق في نهاية المعالجة المسبقة.
إزالة قابس من أحد منافذ أخذ العينات بالقرب من منطقة التنفس وإرفاق الأنابيب من التدفق في نهاية أنبوب ما قبل المعالجة إلى منفذ أخذ العينات. من كامل في الموقف، تمديد المقبض على مكبس مضخة أنبوب كاشف إلى موقف كامل من سحب 100 ملليلتر من الغاز العينة من الغرفة في أنبوب كاشف كلوريد الفينيل. بعد 90 ثانية، ادفع المقبض مرة أخرى.
بعد الحصول على آخر عينة غاز، قم بإزالة الأنبوب من ميناء أخذ العينات من الغرفة وإعادة إدخال المكونات في الميناء. فحص تغير اللون في أنبوب الكشف عن كلوريد الفينيل للتأكد من تركيز كلوريد الفينيل داخل الغرفة وتسجيل قراءة أنبوب الكاشف للمقارنة مع القيمة النظرية. إذا حدثت أي مشاكل أثناء التعرض، تعيين تدفق كلوريد الفينيل إلى الصفر وزيادة تدفق المذاق إلى قيمته القصوى لتطهير الغرفة بسرعة.
بمجرد الوصول إلى مدة التعرض ، سيقوم البرنامج تلقائيًا بإيقاف تدفق كلوريد الفينيل. ثم يبدأ جهاز ضبط الوقت السلامة لمدة 15 دقيقة في عد المدة إلى أسفل للغرفة التجريبية لمسح كلوريد الفينيل. مرة واحدة أنها آمنة لإزالة الحيوانات، انقر فوق موافق.
في نهاية فترة التعرض، تحويل صمام صهريج غاز كلوريد الفينيل stopcock إلى الموضع المغلق وإيقاف جميع تدفقات الهواء في غرفة التعرض. بدوره rotameter حتى لا يتدفق الهواء من خلال غرفة التحكم وإزالة الباب من كل غرفة. إزالة رفوف قفص من الغرف ونقل الفئران مرة أخرى إلى أقفاص وطنهم تحت غطاء محرك تدفق لارينار.
ثم، والتخلص من أي نفايات من عموم الفضلات وفقا للوائح الصحة والسلامة المؤسسية وتنظيف أبواب الغرفة، عموم، رفوف التعرض، والغرف. هنا، يتم عرض وزن الجسم الأسبوعي واستهلاك المواد الغذائية كل أسبوعين لتجربة 12 أسبوع. اكتسبت جميع الفئران الوزن طوال هذه الدراسة.
ومع ذلك ، في حين أن الفئران في مجموعات النظام الغذائي عالية الدهون اكتسبت وزنا أكبر مقارنة بالفئران في مجموعات النظام الغذائي قليلة الدسم ، فإن الفئران المعرضة لكلوريد الفينيل لم تكتسب وزنا أكبر من الفئران في مجموعات التحكم المعنية. كما أن استهلاك الأغذية لم يختلف بين المجموعات. في هذه الفنون المصورة من H & E ملطّخة أقسام الكبد، كلوريد الفينيل تسبب أي تغييرات الأمراض في مجموعة النظام الغذائي منخفض الدهون.
وقد تفاقم النظام الغذائي عالي الدهون تغذية زيادة كبيرة في ستاتوز، بسبب التعرض لكلوريد الفينيل. وعلاوة على ذلك، أدى التعرض كلوريد الفينيل في مجموعة النظام الغذائي عالية الدهون في بعض بؤر الالتهاب. في الحيوانات النظام الغذائي قليلة الدهون، لم كلوريد الفينيل زيادة مستويات الترانساميناس، في حين أن النظام الغذائي عالي الدهون وحده زيادة طفيفة التعبير ترانسميناز، مع تعزيز كبير لهذا التأثير لوحظ في مجموعة النظام الغذائي عالية الدهون المعرضة لكلوريد الفينيل.
علاوة على ذلك، فإن النظام الغذائي عالي الدهون زاد بشكل كبير من نسب وزن الكبد إلى الجسم، على الرغم من أن كلوريد الفينيل لم يؤثر بشكل كبير على هذا التأثير. عند تنفيذ هذا البروتوكول، دائماً الحرص على اتخاذ احتياطات السلامة المناسبة بحيث يتم تجنب التعرض غير المقصود لكلوريد الفينيل من قبل البشر. يمكن لهذا الإجراء الإجابة على أسئلة حول الآثار القصيرة الأجل والطويلة الأجل والتراكمية لتأثير التعرض لكلوريد الفينيل على صحة الحيوان ورفاهيته وتلفه.
تؤثر هذه الدراسات على مجال تقييم المخاطر البيئية والمهنية. على سبيل المثال، تدرس مجموعتنا الآن التفاعلات الآلية بين كلوريد الفينيل والنظام الغذائي.
