Le chlorure de vinyle exacerbe les dommages causés par le foie causés par d’autres facteurs tels que l’alimentation à des concentrations inférieures aux restrictions de sécurité actuelles. Ainsi, les paramètres d’utilisation des populations moyennes doivent être réévalués. Le principal avantage de cette technique est qu’elle utilise un protocole d’inhalation chronique et non invasive qui imite étroitement l’exposition humaine tout en causant un stress minimal à l’animal.
Anna Lang, post-doc, et Regina Schnegelberger, étudiante diplômée, de mon laboratoire, feront la démonstration de la procédure. Une semaine avant le début des expériences d’inhalation, pesez tous les animaux expérimentaux et pesez la quantité d’aliments diététiques faibles ou riches en graisses à donner par cage. Fournir de la nourriture et de l’eau ad libitum, en remplaçant le chow régulier pour chaque groupe d’exposition avec chow régime faible ou riche en graisses, le cas échéant.
Pesez le reste des aliments à la fin de chaque journée d’alimentation et surveillez les souris tout au long de l’expérience pour s’assurer que la santé des animaux est maintenue. Pour mettre en place le système d’exposition à l’inhalation de chlorure de vinyle, assurez-vous que l’air diluant dans les chambres expérimentales et de contrôle est de l’air particulaire à haut rendement et activé le carbone filtré, séché et réglé sous pression avant d’entrer dans les dispositifs respectifs de mesure du débit. Confirmer que la température et l’humidité relative sont surveillées à partir des chambres expérimentales et témoins, que l’échappement de la chambre passe par un filtre HEPA, une sonde de dioxyde de carbone et un filtre à carbone activé, avant d’entrer dans la zone d’échappement du capot chimique pour s’assurer que les souris reçoivent une ventilation acceptable.
Le logiciel personnalisé peut être utilisé pour modifier, surveiller et enregistrer les variables environnementales d’intérêt pendant les expositions par inhalation. Pour préparer la chambre à une exposition par inhalation, commencez par éteindre tous les flux d’air dans les chambres expérimentales et de contrôle. Ouvrez chaque porte de chambre et placez le matériel absorbant de literie, côté absorbant vers le haut, sur le dessus de la casserole d’excréments.
Ensuite, mouillez le matériau absorbant pour fournir un taux d’humidité confortable d’environ 40 à 60 % d’humidité relative tout au long de la période d’exposition et fixez le niveau d’exposition souhaité de chlorure de vinyle dans la chambre expérimentale. Lorsque les chambres sont prêtes, transférer les souris dans des cages individuelles dans les cages de la cage de chambre d’inhalation, en randomisant le placement de chaque souris dans les racks tous les jours pour s’assurer que chaque souris est exposée de manière homogène dans les chambres. Ensuite, placez chaque cage dans sa chambre respective et fermez les portes de la chambre.
Pour mener une expérience d’exposition par inhalation, confirmez que la vanne du réservoir de chlorure de vinyle est en position ouverte et réglez le débit diluant de la chambre expérimentale à 25 litres par minute. Confirmez que le rotameter de la chambre de commande est réglé à 25 litres par minute et vérifiez que tous les capteurs fonctionnent correctement et affichent les résultats attendus dans les chambres expérimentales et de contrôle. Tout au long de l’exposition, surveillez et enregistrez le temps d’exposition, le débit diluant, le débit de chlorure de vinyle, la température, l’humidité, la pression de chambre, le niveau de dioxyde de carbone et la concentration théorique de chlorure de vinyle dans la chambre expérimentale.
Confirmez que la température et l’humidité de la chambre de commande sont également affichées, graphées et enregistrées. Environ à mi-chemin de chaque exposition, casser les pointes de verre sur un tube détecteur de chlorure de vinyle et un tube de prétraitement et attacher l’écoulement de l’extrémité du tube détecteur de chlorure de vinyle à la pompe à tube détecteur. Utilisez un court morceau de tube pour fixer le débit à l’extrémité du tube détecteur de chlorure de vinyle à l’extrémité de l’écoulement du tube de prétraitement et fixer un court morceau de tube à l’écoulement à la fin du prétraitement.
Retirez une prise de l’un des ports d’échantillonnage près de la zone de respiration et fixez le tube de l’écoulement à l’extrémité du tube de prétraitement au port d’échantillonnage. De la position pleine, étendre la poignée sur le piston de la pompe à tube détecteur à la position complète pour tirer 100 millilitres de gaz échantillonné de la chambre dans le tube détecteur de chlorure de vinyle. Après 90 secondes, poussez la poignée.
Une fois le dernier échantillon de gaz obtenu, retirez le tube du port d’échantillonnage de la chambre et réinsérez la fiche dans le port. Inspecter le changement de couleur dans le tube détecteur de chlorure de vinyle pour vérifier la concentration de chlorure de vinyle dans la chambre et enregistrer la lecture du tube détecteur pour la comparaison avec la valeur théorique. En cas de problème pendant l’exposition, réglez le flux de chlorure de vinyle à zéro et augmentez le flux diluant à sa valeur maximale pour purger rapidement la chambre.
Une fois que la durée d’exposition a été atteinte, le logiciel désactivera automatiquement le flux de chlorure de vinyle. La minuterie de sécurité de 15 minutes commencera alors à compter la durée pendant la chambre expérimentale pour dégager le chlorure de vinyle. Une fois qu’il est sécuritaire d’enlever les animaux, cliquez sur ok.
À la fin de la période d’exposition, tournez le robinet du réservoir de chlorure de vinyle à la position fermée et éteignez tous les flux d’air dans la chambre d’exposition. Tournez le rotameter jusqu’à ce qu’aucun air ne circule à travers la chambre de commande et retirez la porte de chaque chambre. Retirez les supports de cage des chambres et transférez les souris dans leurs cages d’origine sous un capot d’écoulement laminaire.
Ensuite, éliminez les déchets de la poêle excrétée conformément aux règlements institutionnels en matière de santé et de sécurité et nettoyez les portes de chambre, la casserole, les supports d’exposition et les chambres. Ici, le poids corporel hebdomadaire et la consommation alimentaire bihebdomad hebdomadaire d’une expérience de 12 semaines sont montrés. Toutes les souris ont pris du poids tout au long de cette étude.
Cependant, tandis que les souris dans les groupes de régime à haute teneur en graisses ont gagné plus de poids comparées aux souris dans les groupes de régime à faible teneur en graisses, les souris exposées au chlorure de vinyle n’ont pas gagné plus de poids que les souris dans les groupes témoins respectifs. La consommation alimentaire ne différait pas non plus d’un groupe à l’autre. Dans ces photomicrographes de représentants des sections tachées de foie H&E, le chlorure de vinyle n’a causé aucun changement pathologique clair dans le groupe de régime à faible teneur en graisses.
L’alimentation à haute teneur en graisses alimentant sensiblement augmenté la stéatose, a été encore exacerbée par l’exposition de chlorure de vinyle. En outre, l’exposition au chlorure de vinyle dans le groupe de régime riche en graisses a eu comme conséquence quelques foyers inflammatoires. Chez les animaux à faible teneur en gras, le chlorure de vinyle n’a pas augmenté les niveaux de transaminase, tandis que le régime riche en graisses seul légèrement augmenté l’expression transaminase, avec une amélioration significative de cet effet observé dans le groupe de régime riche en graisses exposés au chlorure de vinyle.
En outre, le régime riche en graisses a augmenté de manière significative les rapports de poids du foie au corps, bien que le chlorure de vinyle n’ait pas eu d’impact significatif sur cet effet. Lors de la mise en œuvre de ce protocole, toujours prendre soin que les précautions de sécurité appropriées sont prises afin que l’exposition accidentelle au chlorure de vinyle par les humains est évitée. Cette procédure peut répondre à des questions sur les effets à court terme, à long terme et cumulatifs de l’impact de l’exposition au chlorure de vinyle sur la santé animale, le bien-être et les dommages aux organes.
Ces études ont une incidence sur le domaine de notre évaluation des risques environnementaux et professionnels. Par exemple, notre groupe étudie maintenant les interactions mécanistes entre le chlorure de vinyle et l’alimentation.
