Vinil klorür mevcut güvenlik kısıtlamaları altında konsantrasyonlarda diyet gibi diğer faktörlerin neden olduğu karaciğer hasarı şiddetlendirir. Bu nedenle, ortalama popülasyonlar için kullanım parametreleri yeniden değerlendirilmelidir. Bu tekniğin en büyük avantajı, hayvana en az strese neden olurken insan maruziyetini yakından taklit eden kronik, non-invaziv bir inhalasyon protokolü kullanmasıdır.
Prosedürü gösteren anna Lang, bir post-doc, ve Regina Schnegelberger, yüksek lisans öğrencisi, her ikisi de benim laboratuvar dan olacaktır. Teneffüs denemelerinin başlamasından bir hafta önce, tüm deneysel hayvanları tartın ve kafes başına verilecek düşük veya yüksek yağlı diyet gıda miktarını tartın. Uygun olduğu gibi, düşük veya yüksek yağlı diyet chow ile her maruz kalma grubu için düzenli yemek yerine, gıda ve su reklam libitum sağlayın.
Her beslenme gününün sonunda kalan gıdatartın ve hayvanların sağlığının korunmasını sağlamak için deney boyunca fareleri izleyin. Vinil klorür inhalasyon maruziyet sistemini kurmak için, hem deney hem de kontrol odalarındaki dilüent havanın yüksek verimli partikül havası olduğundan ve ilgili akış ölçüm cihazlarına girmeden önce aktif karbon filtrelenmiş, kurutulmuş ve basınçla düzenlenmiş olduğundan emin olun. Sıcaklık ve bağıl nem deneysel ve kontrol odaları içinde izlenir onaylayın, oda egzoz bir HEPA filtre geçer, karbondioksit prob, ve aktif karbon filtresi, fareler kabul edilebilir havalandırma alıyorsanız emin olmak için kimyasal başlık egzoz alanına girmeden önce.
Özel yazılım, teneffüs pozlama sırasında ilgi çevresel değişkenleri değiştirmek, izlemek ve kaydetmek için kullanılabilir. Odayı teneffüse çıkmaya hazırlamak için, deney ve kontrol odalarındaki tüm hava akışlarını kapatarak başlayın. Her oda nın kapısını açın ve emici yatak malzemesi yerleştirin, emici tarafı yukarı, atılım tavasının üstüne.
Daha sonra, pozlama süresi boyunca yaklaşık % 40-60 bağıl nem rahat bir nem seviyesi sağlamak için emici malzeme ıslak ve deneysel odasında vinil klorür istenilen pozlama düzeyini ayarlayın. Odalar hazır olduğunda, fareleri teneffüs odası kafes rafları içinde tek tek kafeslere aktarın ve her farenin raflar içindeki yerleşimini rastgele yerleştirerek her farenin odaların içinde homojen bir şekilde maruz kalmasını sağlayın. Daha sonra, her kafes rafını kendi odasına yerleştirin ve oda kapılarını kapatın.
Bir teneffüs pozlama deneyi yapmak için, vinil klorür gaz tankı için vananın açık konumda olduğunu doğrulayın ve deney odası için dilüent akışını dakikada 25 litreye ayarlayın. Kontrol odasındaki rotametrenin dakikada 25 litreye ayarlı olduğunu doğrulayın ve tüm sensörlerin doğru çalışıp çalışmadığını ve beklenen sonuçları hem deney hem de kontrol odalarında görüntüleyip görüntülemediğini kontrol edin. Pozlama boyunca, monitör ve kayıt pozlama süresi, dilüent akışı, vinil klorür akışı, sıcaklık, nem, oda basıncı, karbondioksit seviyesi, ve deneysel odasında teorik vinil klorür konsantrasyonu.
Kontrol odasının sıcaklığının ve neminin de görüntülendiğini, grafiklendiğini ve kaydedildiğini doğrulayın. Her pozlama nın yaklaşık yarısında, bir vinil klorür dedektör tüpü ve bir pretreat tüp üzerinde cam ipuçları kırmak ve dedektör tüp pompavinil klorür dedektör tüpünün sonuna akış eklemek. Vinil klorür dedektör tüpünün sonundaki akışı pretreat tüpünün ucuna bağlamak için kısa bir boru parçası kullanın ve sapkının sonundaki akışa kısa bir boru parçası ekleyin.
Solunum bölgesinin yakınındaki örnekleme bağlantı noktalarından birinden bir fişi çıkarın ve boruyu pretreat tüpünün sonundaki akıştan örnekleme portuna takın. Tam konumdan, dedektör tüp pompasının pistonunu tam çıkış pozisyonuna kadar genişleterek 100 mililitre numune alınan gazı odadan vinil klorür dedektör tüpüne çekin. 90 saniye sonra, tutamacı tekrar içeri itin.
Son gaz örneği alındıktan sonra tüpü haznenin numune alma portundan çıkarın ve fişi bağlantı noktasına yeniden yerleştirin. Oda içindeki vinil klorür konsantrasyonu tespit etmek ve teorik değeri ile karşılaştırıldığında dedektör tüp okuma kaydetmek için vinil klorür dedektör tüp renk değişikliği inceleyin. Maruz kalma sırasında herhangi bir sorun oluşursa, vinil klorür akışını sıfıra ayarlayın ve kurutkan akışı hızlı bir şekilde temizlemek için maksimum değerine artırın.
Pozlama süresine ulaşıldıktan sonra, yazılım vinil klorür akışını otomatik olarak kapatır. 15 dakikalık güvenlik zamanlayıcısı daha sonra vinil klorür temizlemek için deneysel oda için süre geri saymak başlayacaktır. Hayvanları çıkarmak güvenli olduktan sonra tamam'ı tıklatın.
Pozlama süresinin sonunda, vinil klorür gazı tankı vana sıyrıkını kapalı konuma getirin ve maruz kalma odasındaki tüm hava akışlarını kapatın. Kontrol odasından hava akmadan rotametreyi çevirin ve kapıyı her odadan çıkarın. Kafes raflarını odalardan çıkarın ve fareleri laminar akış başlığı altında ev kafeslerine geri aktarın.
Daha sonra, kurumsal sağlık ve güvenlik yönetmeliklerine göre dışkı pan herhangi bir atık bertaraf ve oda kapıları, tava, pozlama rafları ve odaları temizleyin. Burada, haftalık vücut ağırlığı ve 12 haftalık bir deney iki haftada bir gıda tüketimi gösterilir. Bu çalışma boyunca tüm fareler kilo aldı.
Ancak, yüksek yağlı diyet gruplarında fareler düşük yağlı diyet gruplarında farelere göre daha fazla kilo alırken, vinil klorüre maruz kalan fareler ilgili kontrol gruplarındaki farelerden daha fazla kilo almamaktadır. Gıda tüketimi de gruplar arasında farklılık yoktu. H & E lekeli karaciğer bölümleribu temsilcileri fotomikrograflar, vinil klorür düşük yağlı diyet grubunda hiçbir açık patolojik değişikliklere neden oldu.
Yüksek yağlı diyet beslenme önemli ölçüde artmış steatoz, daha fazla vinil klorür maruziyeti ile şiddetlendi. Ayrıca, yüksek yağlı diyet grubunda vinil klorür maruz bazı inflamatuar fosi sonuçlandı. Düşük yağlı diyet hayvanlarda, vinil klorür transaminaz düzeylerini artırmadı, yüksek yağlı diyet tek başına biraz transaminaz ekspresyonu arttı, bu etki önemli bir gelişme ile vinil klorür maruz yüksek yağlı diyet grubunda gözlenen.
Ayrıca, yüksek yağlı diyet önemli ölçüde vücut ağırlığı oranları karaciğer arttı, vinil klorür önemli ölçüde bu etkiyi etkilemedi rağmen. Bu protokolü uygularken, insanlar tarafından vinil klorüre yanlışlıkla maruz kalmaktan kaçınmak için her zaman uygun güvenlik önlemlerinin alınmasına dikkat edin. Bu prosedür, vinil klorür maruziyetinin hayvan sağlığı, refah ve organ hasarı üzerindeki kısa vadeli, uzun vadeli ve kümülatif etkileri hakkındaki soruları yanıtlayabilir.
Bu çalışmalar çevresel ve mesleki risk değerlendirme alanımızı etkilemez. Örneğin, grubumuz şimdi vinil klorür ve diyet arasındaki mekanistik etkileşimleri inceliyor.
