يسمح أسلوبنا لدراسة الأوعية الدموية الموجودة في الهياكل التي كان من الصعب على خلاف ذلك صورة في فيفو، مثل قرن آمون. لأن الأوعية الدموية تتم إزالتها من أنسجة الدماغ، يمكن دراسة الإشارة بين الشعيرات الدموية والشريين دون آثار خارج الهدف على الأنسجة المحيطة. لعزل قرن آمون، استخدم مقص تشريح صغير لقطع الجلد على طول خط الوسط في الجزء العلوي من رأس الماوس ونقل الجلد إلى الجانبين.
بدءا من الجانب السد من الجمجمة، وقطع الجمجمة على طول خط الوسط حتى يتم التوصل إلى المصابيح الشم وإزالة أجزاء من الجمجمة حتى يتعرض المخ. بدءا بالقرب من الأنف من الفأر، وإزالة ببطء الدماغ، وذلك باستخدام مقص لقطع من خلال المصابيح الشمية، والأعصاب الجمجمة، والحبل الشوكي. غمر الدماغ ، الجانب البطني إلى أسفل في MOPS Buffered ، في وسط لوحة تشريح ، ووضع اللوحة تحت مجهر تشريح.
عقد حافة حادة موازية لأدنى الطبق، واستخدام شفرة حلاقة لقطع الدماغ إلى النصف على طول الشق الطولي في ضربة واحدة. ضع نصف الكرة في وسط اللوحة مع خط الوسط الذي يواجه لأسفل ودفع شفرة الحلاقة مباشرة عبر الأنسجة على طول الشق عرضية لإزالة المخيخ والدماغ الجذعية. تدوير نصف الكرة بحيث الجانب الوسيط تواجه لأعلى واستخدام ملعقة لعقد الدماغ في مكان.
إدراج غيض من ملعقة ثانية تحت الكالاسوم الجسم، يغرف تحت الأنسجة لإزالة المهاد، الحاجز، وتحت المهاد من قرن آمون. وينبغي أن يكون قرن آمون الآن مرئية كهيكل منحني بالقرب من الجانب الخلفي من المخ. باستخدام ملعقة واحدة لعقد المخ في مكان، واستخدام ملعقة الثانية لمغرف الحصين من المخ.
ثم نقل فرس النهر إلى لوحة تشريح جديدة، مليئة حوالي منتصف الطريق مع حل موب الطازجة. بالنسبة لعزل شريان فرس النهر، ضع دبابيس صغيرة في كل طرف من الحصين لتأمين جانب شريان الحصين العينة. باستخدام ملقط حادة جدا، تمتد بلطف أجزاء صغيرة من قرن آمون لتخفيف الأنسجة المحيطة الشرايين.
والبحث من خلال أنسجة الحصين الظهرية لتحديد الشرايين العرضية الخارجية. عندما يكون الشريان قد تم تحديد موقعه، والاستيلاء على الشريان عرضية خارجية من قرن آمون وسحب ببطء بعيدا عن الأنسجة لجمع الشرايين والشعيرات الدموية. تتم إزالة الشريان من كل قرن آمون بشكل منفصل.
عندما لا يكون هناك المزيد من السفن التي يتعين إزالتها، ضع العينات على الجليد والتخلص من أنسجة فرس النهر المتبقية. لتكبيل الشرايين، وتحديد موقع والشرايين مع فرع الذي ينتهي مع الشعيرات الدموية ووضع الشريان في غرفة الجهاز. دفع بعناية غيض من القنية من خلال جدار الشريان تحت المنطقة المستهدفة لتركيب الأوعية الدموية.
ثم، حرك بعناية السفينة على القنياء حتى يكون هناك ما يكفي من الأنسجة التي لوضع التعادل. استخدام 12-0 خياطة النايلون لجعل عقدة فضفاضة من شأنها أن تناسب أكثر من الأوعية الدموية وقنية، واستخدام عقدة عقبة نصف لتأمين العلاقات، وسحب نهايات لتشد من عقدة لتأمين الشريان إلى القنية. تأمين ربطة عنق أخرى على الطرف الآخر من الشريان لختمه.
على الجانب الآخر من الغرفة، وخفض قنية ثانية حتى نقطة من دبابيس قنية أسفل ربطة عنق على نهاية الشريان. ثم استخدم قنية ثالثة لتثبيت فرع الشعيرات الدموية في الغطاء ، ووضع الطرف بالقرب من نهاية الفرع ، مع ترك نهايات الشعيرات الدموية مكشوفة. كما أن دوران الدماغ المجهري هش بشكل رائع ، تأكد من تقليل تمدد ومناولة الأوعية أثناء إجراء التكبيب لضمان بقاء الشرايين.
لتحليل التصوير المقطعي الضغط، نقل الغرفة إلى مرحلة المجهر الخفيفة مع برنامج تسجيل وتوصيل تدفق وتدفق أنابيب إلى الغرفة للغزارة. بدء الوفرة مع 37 درجة مئوية السائل النخاعي الاصطناعي في أربعة ملليلتر في معدل تدفق دقيقة، وإرفاق كانولا الضغط إلى مضخة ال peristaltic يقترن محول الضغط. جلب الضغط الداخلي إلى 20 ملليمتر من الزئبق وبدء برنامج التسجيل.
ضبط المجهر وإعدادات الصورة لتحقيق أوضح صورة ممكنة. واستخدام برنامج الكشف عن الحافة للتحقق من أن الشريان حوالي 15 إلى 30 ميكرومتر في القطر عندما يتم توسيعها بالكامل. بمجرد أن يتم تحسين الإعدادات ، ابدأ التسجيل وزيادة الضغط داخل الأوعية الدموية في الوعاء حتى 40 ملليمترًا من الزئبق ، مع تسجيل قطر الشريان مع برنامج الكشف عن الحافة.
ثم افر واغف الغرفة لمدة 15 إلى 20 دقيقة لغسل حل MOP. لاختبار صلاحية الوعاء، وتطبيق محلول NS309 ميكرومولار واحد على الزبرة الحمام، وينبغي أن تمدد الجزء الشرياني، مما يدل على 30 إلى 40٪ ميوجيني. مرة واحدة وقد تم تحديد لهجة خط الأساس للشريان، واستخدام جرة الزجاج لجعل قنيات مع نقطة غرامة في نهاية واحدة، واستخدام ملقط لكسر غيض من كل قن، بحيث يمكن أن تتدفق المخدرات ذات الفائدة بسلاسة من خلال طرف في خمسة أرطال من الضغط لكل بوصة مربعة.
ملء القنيولا مع المخدرات من الفائدة. وتحميل القنية على جهاز ميكرومانيبولاتور ثلاثي المحاور متصل بالمجهر ربط الأنابيب من نظام طرد الضغط إلى القنية، وخفض ببطء القنية في الحمام بالقرب من الشعيرات الدموية، مع الحرص على عدم ضرب أي جزء من السفينة أو الغرفة.
لتحفيز الشعيرات الدموية، خفض القنية إلى غطاء فقط بجوار الشعيرات الدموية وتنشيط نظام طرد الضغط مع الوقت المطلوب طرد. في نهاية التحفيز، ورفع قنية قليلا لتجنب مزيد من التحفيز. لتأكيد أن الشعيرات الدموية فقط يجري تحفيز، وملء كانولا جديدة مع ميكرومولار واحد من الحل NS309 وتحفيز الشعيرات الدموية كما هو مبين.
ثم الحصول على توسع الأوعية القصوى عن طريق الاستحمام إعداد مع محلول خال من الكالسيوم. تطبيق حمام واحد micromolar NS309 يسبب تمدد شبه القصوى من الشريان بسبب قنوات البوتاسيوم الحساسة للكالسيوم في endothelium. ومع ذلك، تفتقر الخلايا البطانية الشعرية قنوات تسيير وسيطة وصغيرة ولا hyperpolarize استجابة للذيذ، ونتيجة لذلك، تحفيز ينتهي الشعرية مع NS309، لا يسبب تمدد الشرايين المنبع، وهذا يشير إلى أن NS309 لم تصل إلى الشريان، ويمكن استخدامها كتحكم للوصول إلى تقييد spacial من المجمع المطبق على الشعيرات الدموية عن طريق الضغط.
باستخدام إعداد الشريان الشعري قرن آمان parenchymal كما هو موضح، وتطبيق السائل النخاعي الاصطناعي تكمل مع البوتاسيوم 10 ملليمولار إلى نهايات شعرية، والنتائج في تمدد الشريان المنبع التي لا تختلف بين الاستعدادات من الفئران الذكور والإناث. علاوة على ذلك ، فإن إضافة مثبطات Kir2 ML 133 ، تلغي تقريبًا تمدد الشريان الشعري المستحث ، استجابةً لـ 10 ملليمولار بوتاسيوم في الاستعدادات من كل من الفئران الذكور والإناث. عند تركيب فيسل الدم، والحد من التفاعلات المباشرة مع الأوعية الدموية لتقليل الضرر، وزيادة صلاحية السفينة.
مرة واحدة وقد تم عزل الأوعية الدموية، يمكن اختبار مركبات المخدرات المختلفة أو يمكن معالجة الأوعية الدموية مزيد من لعلم الأحياء الأوليكومي، الكيمياء المناعية، أو دراسات الفيزيولوجيا الكهربائية.
