زراعة جزيرة هي واحدة من أكثر الطرق الواعدة لعلاج مرض السكري من النوع الأول. والبحث عن موقع مناسب لزرع الجزيرة مستمر. زرع جزيرة إلى الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الإربي هو طريقة بسيطة ولكنها فعالة التي قد يكون لها آثار سريرية.
قد يؤدي استقراء هذا الإجراء إلى العيادة إلى تطوير علاج لمرضى السكري من النوع الأول. هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في زرع الجزر السريرية كما تم تحديد اللغات لتكون ليست موقعا مثاليا لengraftment الجزرية. من المهم أن تتبع بعناية كل خطوة من هذا الإجراء، وخاصة الخطوات الرئيسية، مثل هضم البنكرياس.
سوف مظاهرة البصرية مساعدة الباحثين الجدد على هذه التقنية لتحديد أفضل كيفية تنفيذ عزل الجزر والتبدل. لحصاد جزيرة، رش أولا الفراء من 10 أسابيع من العمر C57 الأسود ستة ماوس مع 75٪ الإيثانول، وملء حقنة خمسة ملليلتر مع حل الكولاجين الطازجة. تجهيز حقنة مع 32 قياس الانحناء حادة وأشار إبرة التسريب، ووضع الماوس في موقف supine على كيس الثلج.
استخدام مقص العيون مدببة مباشرة لجعل فتحة عرضية في الجلد من منطقة العانة، وتمديد شق نحو رأس الحيوان. فتح البطن تماما عن طريق شق V من منطقة العانة لعملية xiphoid، وتحريك الكبد لفضح المرارة وطول القناة الصفراوية المشتركة. ثم استخدم المشبك الوعائي لإغلاق فتحة الاثنيين القناة الصفراوية المشتركة وقطع فتحة صغيرة في المرارة.
Cannulate القناة الصفراوية المشتركة من خلال فتح مع إبرة القذف المعدة مسبقا، وحقن ما يقرب من مليلتر من محلول الكولاجيناز في البنكرياس. عندما يتم تسليم جميع الكولاجيناز، استخدم زوجين من ملاقط صغيرة غير الباضعة لفصل البنكرياس المتغلغل من الأمعاء والمعدة والطحال، ووضع البنكرياس في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر على الجليد. عندما تم جمع جميع العينات، إضافة 100 ميكرولترات من الحمض النووي الأول لكل بنكرياس إلى أنابيب 50 ملليلتر ويهز بقوة كل أنبوب حوالي 40 مرة على مدى فترة 10 ثانية قبل وضع الأنسجة في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة ثلاث إلى خمس دقائق مع اهتزاز معتدل.
في نهاية الحضانة، إضافة إلى حجم النهائي من 50 ملليلتر من وقف الحل لوقف الهضم. ونبض الطرد المركزي الأنابيب إلى سرعة 750 مرات G في أربع درجات مئوية قبل إيقاف بسرعة الطرد المركزي. بعد التخلص من المواد الخارقة، وغسل الكريات مرتين في 15 إلى 25 ملليلتر من وقف الحل في غسل تحت نفس ظروف الطرد المركزي كما أظهرت للتو.
بعد الغسيل الثاني، تجمع ثلاث كريات لكل أنبوب في أنابيب مخروطية جديدة 50 ملليلتر. و resuspend خلايا البنكرياس في حجم إجمالي قدره عشرة ملليلتر من 1119 هيستوبليت. المقبل بعناية إضافة خمسة ملليلتر من 1077 هستوبليت أسفل الجانب من كل أنبوب، تليها خمسة ملليلتر من HBSS.
فصل الخلايا بواسطة الطرد المركزي واستخدام ماصة باستور خمسة ملليلتر لجمع الجزر من واجهة HBSS Histopaque 1077. تجمع الجزر في أنبوب مخروطي جديد 50 ملليلتر في حجم نهائي من 50 ملليلتر من Stop Solution للطرد المركزي للنبض، وتجاهل المابير. Resuspend بيليه في 30 ملليلتر من حل وقف جديدة لمدة دقيقة واحدة الطرد المركزي، وإعادة تعليق الجزر في 30 ملليلتر من المتوسطة الثقافة.
Decant الجزر في واحد 10 سنتيمتر ضوء ضيق طبق الثقافة في أنبوب. ووضع الطبق تحت المجهر ستيريو. باستخدام 200 نصائح ماصة هلام تحميل ميكرولتر، اختيار اليد الجزر الفروية البيضاء من الحل.
وضع الجزر في طبق ثقافة الخلايا غير المعالجة التي تحتوي على 10 ملليلتر من المتوسطة الثقافة كما يتم حصادها. تحقق من نقاء الجزر التي التقطت باليد بواسطة تلطيخ dithizone تحت مجهر خفيف. وكشف جدوى الجزر بواسطة الفلوريسين diacetate البرووديوم يلطخ تحت المجهر فلوريسنت.
ثم زراعة الجزر المعزولة في وسط الثقافة الطازجة في 37 درجة مئوية في الهواء 95٪ وثاني أكسيد الكربون 5٪ حتى زرع. ابتداء من أيام ثلاثة وأربعة بعد تحريض مرض السكري، ثقب الوريد السد من كل ستيبتوزولوتوسين حقن ثمانية أسابيع الذكور من العمر C57 أسود ستة ماوس حوالي 10:00 .m لجمع عينة دم من كل المتلقي.
استخدم أداة أساسية لمراقبة الجلوكوز في الدم لتحديد مستوى السكر في الدم غير الصيام لكل فأرة ثم أضف الدم إلى شرائط الاختبار الفردية. عندما أظهر مستوى السكر في الدم لا يقل عن 20 ملليمول لكل لتر يومين على التوالي، تزن وتؤشر على الماوس المتلقي وتؤكد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الحيوانات المُذنَع. ضع aliquot من الهيدرجيل من ناقص 20 درجة مئوية التخزين على الجليد للذوبان.
ونقل 450 إلى 500 مكافئ جزيرة لكل مستلم إلى أنبوب طرد مركزي معقمة 1.5 ملليلتر يحتوي على 200 ميكرولترات متوسطة لكل أنبوب على الجليد. مسحة المنطقة الأربية اليسرى من المتلقي مع الإيثانول 75٪ووضع الماوس في موقف سوبين. إصلاح أطرافه مع الشريط الجراحي، واستخدام مقصات لإزالة الشعر حول موقع الجراحة.
مسحة المنطقة الجراحية مع يودوفور وجعل شق عمودي في الجلد المطهر. تحديد الشريان السفلي والشردي داخل ISWAT وخلق جيب صغير فوق الأوعية. رواسب الجزر عن طريق الطرد المركزي وإزالة أكبر قدر ممكن من عظمى.
إضافة 20 ميكرولترات من هيدروجيل المذاب إلى كل أنبوب، وإعادة بلطف الجزر، مع الحرص على تجنب الفقاعات. عندما تم الحصول على تعليق متجانس، استخدم 200 ميكرولتر ماصة تلميح لتسليم بعناية كامل خليط هيدروجيل جزيرة من أنبوب واحد في الجيب. عندما هيدروجيل قد توطدت تماما، إضافة 20 ميكرولترات من السيفالوسبورين إلى موقع زرع، وإغلاق العضلات والجلد مع خياطة جراحية مستمرة 5-0.
ثم ضع المتلقي في قفص نظيف على لوحة حرارية مع المراقبة حتى إعادة شغل الوظائف بالكامل. بعد معالجة جزيرة مورين كما هو موضح، ستكون جزر المورين المعزولة نقية بما فيه الكفاية للزرع. وينبغي أن تستخدم فقط الجزر المعزولة ذات الجدوى العالية للزراعة.
بعد خلط شامل من الطعوم جزيرة مع هيدروجيل، يمكن زرع الكسب غير المشروع في موقع ISWAT. بعد حوالي شهر واحد من زرع في ISWAT، والطعوم الجزر عكس ارتفاع السكر في الدم في حين أن وزن الجسم من الفئران المتلقي يزيد تدريجيا. في 100 يوما بعد زرع, إزالة الطعوم يؤدي إلى زيادة فورية في 10:00 .m.
مستوى السكر في الدم غير الصيام. التحليل النسيجي في هذه المرحلة الزمنية، يكشف أن الطعوم في الجزيرة ظلت سليمة. والأنسولين وصبغة الغلوكاتون المناعية تشير إلى أن الجزر المزروعة تعمل أيضا في 100 يوم بعد زرع.
يجب الحرص على عدم هز خلايا البنكرياس profused بقوة جدا أو آخر سوف تكون للخطر قدرة الجزر التي تم الحصول عليها. يمكن زرع الجزر المعزولة تحت الكبسولة الكلوية كتحكم في مقارنة آثار الزرع المعزول في الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الإربية في الموقع. وسوف تضيف هذه العملية بدء التجارب السريرية لزرع جزيرة إلى مواقع أخرى إلى جانب الكبد.
