毛里岛皮下白脂肪组织（ISWAT）移植模型

岛移植是治疗一型糖尿病最有前途的方法之一。目前正在寻找合适的小岛移植地点。对皮下脂肪组织的岛体移植是一种简单而有效的方法，可能具有临床意义。

将这个程序推断到诊所可能导致一种治疗一型糖尿病患者的治疗方法的发展。这种方法可以提供临床小岛移植的见解，因为语言已被确定不是一个理想的地点，为小岛移植。必须仔细遵循程序的每一步，特别是关键步骤，如胰腺消化。

视觉演示将帮助研究人员对这项技术进行新的研究，以更好地确定如何执行小岛隔离和转换。对于小岛收获，首先用75%乙醇喷洒10周老的C57黑色六鼠的皮毛，然后用新鲜准备的胶原酶溶液填充5毫升注射器。用 32 量弯曲钝尖灌注针为注射器，将鼠标放在冰袋上的超活位置。

使用直尖眼科剪刀在阴区皮肤上做一个横向开口，并向动物头部伸出切口。通过 V 切口完全打开腹部，从阴区到西腓体过程，并移动肝脏暴露胆囊和普通胆管的整个长度。然后使用血管夹关闭普通胆管的十二指肠开口，并在胆囊中切开一个小开口。

用先前准备的灌注针将普通胆汁导管通过开口，将大约两毫升胶原酶溶液注射到胰腺中。当所有的胶原蛋白酶已经交付，使用两对非侵入性微型钳子，将充满的胰腺从肠道、胃和脾脏分离，并将胰腺放入50毫升的圆锥形管中。收集完所有样本后，每胰腺加入100微升Dnase I，并在10秒内用力摇动每根管子约40次，然后将组织放入37摄氏度的水浴中，进行3至5分钟的中度摇晃。

在孵育结束时，加起来50毫升的停止溶液，以停止消化的最终体积。脉冲离心管在4摄氏度时以750倍G的速度离心，然后迅速停止离心机。丢弃超钠后，在相同离心条件下，每次洗涤的止损溶液为 15 至 25 毫升，洗涤两次。

第二次洗涤后，将每管三粒颗粒放入新的50毫升锥形管中。并重新暂停胰腺细胞在总体积为10毫升的Stopaque1119。接下来，在每个管的侧面小心地添加五毫升的 Histopaque 1077，然后是五毫升的 HBSS。

通过离心分离细胞，并使用五毫升巴斯德移液器从HSSS Histopaque 1077接口收集小岛。将小岛汇集到新的 50 毫升锥形管中，最终体积为 50 毫升停止溶液，用于脉冲离心，并丢弃上流水线。将颗粒重新在 30 毫升新鲜停止溶液中，进行一分钟的离心，并在 30 毫升培养培养的培养中重新供应小岛。

将小岛放入每管一个 10 厘米的光紧培养盘中。把盘子放在立体显微镜下。使用 200 微升凝胶加载移液器尖端，从溶液中手动挑选白色球形小岛。

将小岛放入未经处理的细胞培养皿中，在收获时含有10毫升培养培养剂。在光学显微镜下通过二染色检查手工采摘的小岛纯度。并在荧光显微镜下通过荧光素二甲酸酯丙酸丙酸酯染色来检测小岛的可行性。

然后在95%的空气和5%的二氧化碳中培养新鲜培养基的孤立小岛，直到移植。从糖尿病诱导后的第三天和第四天开始，穿刺每个链球菌素注射8周男性C57黑色六只小鼠的骨静脉.m大约10:00左右，从每个接受动物采集血液样本。

使用基本的血糖监测仪器确定每只小鼠的不禁食血糖水平，然后将血液添加到单独的测试条上。当动物连续两天表现出每升至少20毫摩尔的血糖水平时，称重并标记受助小鼠，并确认麻醉动物对踏板反射缺乏反应。将零下20摄氏度的西气凝胶储存在冰上进行解冻。

将每个接受者450至500个小岛当量转移到无菌的1.5毫升离心管中，每管含有200微升的介质。用75%乙醇擦拭接受者的左内，将鼠标放在上角位置。用手术胶带固定四肢，并使用剪子去除手术地点周围的毛发。

用碘磷擦拭手术区域，在消毒的皮肤中进行垂直切口。识别 ISWAT 内的劣质胃动脉和静脉，并在容器上方创建一个小口袋。通过离心沉淀小岛，并尽可能去除上流液。

在每个管中加入20微升解冻水凝胶，轻轻重新暂停小岛，注意避免气泡。获得均匀悬浮液后，使用 200 微升移液器尖端小心地将整个小岛水凝胶混合物从一根管中放入口袋。当水凝胶完全凝固后，在移植现场加入20微升头孢菌素，用5-0连续手术缝合关闭肌肉和皮肤。

然后将接收者放入热垫上的清洁笼中，进行监控，直至完全恢复。如证明，经过穆林岛处理后，分离的穆林岛将足够纯正，适合移植。只有具有高生存能力的孤立小岛才应用于移植。

将小岛嫁接物与水凝胶彻底混合后，可将嫁接物植入 ISWAT 站点。在移植到 ISWAT 约一个月后，小岛移植逆转高血糖，同时接受小鼠的体重逐渐增加。移植后100天，移植物的切除导致10:00的10:00.m。

非禁食血糖水平。组织学分析此时点，发现小岛嫁接一直完好无损。胰岛素和胰高血糖系统免疫荧光染色表明，移植的胰岛在移植后100天也发挥作用。

小心不要太有力地摇动蛋白胰腺细胞，否则获得的胰岛的能力将受到损害。分离的小岛可以在肾胶囊下移植作为控制，以比较分离移植到地位下皮下白脂肪组织中的影响。该程序将增加小岛移植的临床试验的开始到除肝脏以外的其他地点。