على مدى العقود الماضية، تم تمديد عمر الإنسان، بسبب التحسينات في مستويات المعيشة والتقدم في العلوم الطبية. العمر هو أكبر عامل خطر للعديد من الأمراض التي تهدد الحياة، بما في ذلك الاضطرابات العصبية، مثل مرض الزهايمر وباركنسون وهنتنغتون. هنا، ونحن نبرهن على منهجيات استخدام بعض نماذج طريقة جديدة متعددة الاستخدامات، بما في ذلك فرط نشط أيون قناة الناجمة عن نخر ومجاميع البروتين يدفع السمية العصبية، لرصد وتشريح الآلية الجزيئية الخلوية من الضمور العصبي.
ذروة اليرقات صحية من جعل أربعة وجعل ثلاثة نيماتويد نيوتن على نعمة نمو لوحة وسائل الإعلام، غربلة مع E.Coli باستخدام تشريح المجهر ستيريو. مكان عشرة وأربعة الديدان الخيطية، لوحة الانزيم الطفيلية وتنمو لهم في درجة الحرارة القياسية، من 20 درجة مئوية. بعد خمسة أيام، وغسل لوحة مع 1 مل و 9 العازلة وجمع الحيوانات في أنبوب 1.5 مل.
جهاز طرد مركزي في 30،000 غرام لمدة 30 ثانية وإزالة فائقة. إضافة 0.5 مل من محلول الطلاء. يتم تخزين محلول الطلاء في درجة حرارة الغرفة.
دوامة ومراقبة دورية حتى أنها قد حلت جميع. تجنب الطلاء لفترات أطول من خمس دقائق. جهاز طرد مركزي في 10،000 غرام لمدة 30 ثانية وإزالة فائقة.
غسل مرتين لوحة مع 1 مل وتسعة مخازن. جهاز طرد مركزي في 10000 غرام لمدة 30 ثانية وإزالة فائقة. بعد الغسيل، resuspend البيض في 200 ميكروليترس M9 العازلة واحتضان لهم لمدة 25 دقيقة، في 34 درجة مئوية في حمام مائي.
الحفاظ على مجموعة منفصلة من البيض في 20 درجة مئوية. الماصات 100 ميكرولترات تحتوي على السيطرة أو الحرارة صدمة معالجة البيض ووضعها على غير المصنف 10 GN لوحة. كل لوحة تحتوي على ما لا يقل عن 100 إلى 200 بيضة.
احتضان البيض في 20 درجة مئوية حتى الفقس. استخدام و M9 العازلة لغسل لوحات وجمع الحياة L1 والنيماتودا في 1.5 مل أنبوب. جهاز طرد مركزي عند 10,000 غرام لمدة 30 ثانية.
إزالة ناظر والحفاظ على لوحة. إضافة 100 ميكرولترات من 20 ملليمولار M9 levangial العازلة ل التخدير من النيماتويدات. Pipette 10 ميكرولترات من M9 levangial العازلة، التي تحتوي على ساعة L1 وجبل لهم في 2٪ agar-ls مكان بقعة بلطف coverlip على الجزء العلوي من العينة.
مراقبة مشاهدة باستخدام المجهر DIC. مسح انحطاط من الخلايا العصبية مستقبلات 630 عن طريق عد الخلايا مع مظهر الظاهرية النموذجية المميزة التي تساعد على أن الديدان الخيطية. تزامن الديدان الخيطية عن طريق اختيار ونقل 15 إلى 20 يرقات L4 من كل في سلالة على البكتيريا أولا C ثم لوحات المعدلة وراثيا.
احتضان والسماح للنيماتودا أن تنمو في درجة حرارة قياسية من 20 درجة مئوية. أداء الشروط المسبقة اليومية لمدة 30 دقيقة عن طريق نقل لوحات في حاضنة تعيين في 34 درجة مئوية. ثم العودة الديدان الخيطية المسبقة مرة أخرى في درجة الحرارة القياسية من 20 درجة مئوية.
إضافة 10 ميكرولترات من 20 ملليمولار M9 levangial انخفاض العازلة في وسط بقعة أجار-ls. اختيار الديدان الخيطية المعدلة وراثيا كل منها ونقلها في M9 levangial قطرة. مكان 20 إلى 30 الديدان الخيطية لكل قطرة.
ضع زلة غطاء بلطف في الجزء العلوي من العينة. ختم زلة الغطاء مع طلاء الأظافر للحفاظ على الرطوبة طوال عملية التصوير. باستخدام مجهر الفلوريسين جنبا إلى جنب مع الكاميرا، والكشف عن والتقاط الصور دراستك من منطقة الرأس في 20 × التكبير.
رصد سبعة أيام من الديدان الخيطية المعدلة وراثيا للوفاة الخلايا العصبية الدوبامين. قياس المجاميع policul العصبية في المنطقة الرأس من الحيوانات المعدلة وراثيا أيام أربعة من العمر التعبير عن 240 الانصهار مع الناس الحية. موت الخلايا النخرية الناجمة عن القنوات الأيونية مفرطة النشاط هو الأكثر في الديدان الخيطية التي لديها البيض المسبق الصدمة الحرارية السابقة.
الصدمة الحرارية المسبقة، وتعزيز التنبؤ ضد ألفا سينوكلين الناجمة موت الخلايا في هيرمافروديت البالغ من العمر سبعة أيام ويقلل من المجاميع بروتين Q40 في المنطقة الرأس من البالغين من العمر أربعة أيام. الشيخوخة هو نتيجة للضرر الناجم عن انحطاط تدريجي للدوسط الخلوية والأنسجة. وبالتالي فهم التلاعب بالسن المرتبطة كسر الخلايا العصبية أسفل هي أعلى الأولويات الأماكن.
ويمكن أن تؤدي التقنيات المعروضة إلى جانب علم الوراثة والشاشات الدوائية إلى إخطار بمُنَحَّثات موت الخلايا الطبيعية ذات الاهتمام العلاجي المحتمل.
