Ao longo das últimas décadas, a vida humana é ampliada, devido a melhorias nos padrões de vida e avanços na ciência médica. A idade é o maior fator de risco para muitas doenças que ameaçam a vida, incluindo doenças neurodegenerativas, como Alzheimer, Parkinson e doença de Huntington. Aqui, demonstramos metodologias utilizando alguns modelos versáteis de novos métodos, incluindo necrose induzida por canais de íons hiperacoervas induzidos e agregados proteicos induzem neurotoxicidade, para monitorar e dissecar o mecanismo molecular celular da degeneração neural.
Pico de larvas saudáveis de fazer quatro e fazer três nematoides Newton em placa de mídia de crescimento nematoide, peneirando com E.Coli usando microscópio estéreo dissecando. Coloque dez e quatro nematoides, placa de enzima parasitária e plante-as na temperatura padrão, de 20 graus celsius. Cinco dias depois, lave a placa com 1 mL e 9 tampão e colete os animais em tubo de 1,5mL.
Centrifugar a 30.000 g por 30 segundos e remover o supernaspe. Adicione 0,5 mL de solução de revestimento. A solução de revestimento é armazenada à temperatura ambiente.
Vórtice e monitore periodicamente até que todos tenham dissolvido. Evite chapeamento por períodos superiores a cinco minutos. Centrifugar a 10.000 g por 30 segundos e remover o supernaspe.
Lave duas vezes a paleta com 1 mL e nove tampões. Centrifugar a 10000 g por 30 segundos e remover o supernatante. Após a lavagem, resuspenha os ovos em 200 microliters M9 tampão e incuba-os por 25 minutos, a 34 graus Celsius em um banho de água.
Mantenha um grupo separado de ovos a 20 graus Celsius. Pipeta 100 microliters contendo controle ou choque térmico ovos tratados e colocá-los em placa de 10 GN não semeada. Cada prato contém pelo menos 100 a 200 ovos.
Incubar os ovos a 20 graus celsius até eclodir. Use e tampão M9 para lavar placas e coletar vida L1 e nematoides em tubo de 1,5 ml. Centrífuga a 10.000 g por 30 segundos.
Remova o supernatante e mantenha a paleta. Adicione 100 microliters de 20 mililitros M9 tampão levangial para anestesiar os nematoides. Pipeta 10 microliters de tampão levangial M9, contendo relógio L1 e montá-los em 2%agar-ls spot colocar suavemente um deslizamento de tampa na parte superior da amostra.
Observe o relógio usando a microscopia DIC. Escaneando a degeneração dos 630 neurônios receptores contando células com uma aparência virtual característica desse nematode. Sincronizar nematoides selecionando e transferindo 15 a 20 larvas L4 de cada uma em cepa em primeira célula C e depois placas GM.
Incubar e deixar os nematoides crescerem à temperatura padrão de 20 graus Celsius. Realize o pré-condicionamento diário por 30 minutos transferindo as placas em uma incubadora fixada a 34 graus Celsius. Em seguida, devolva os nematoides pré-condicionados de volta à temperatura padrão de 20 graus Celsius.
Adicione 10 microliters de 20 mililitros M9 gota de tampão levangial no centro do ponto ágar-ls. Escolha os respectivos nematoides transgênicos e transfira-os em gota levangial M9. Coloque de 20 a 30 nematoides por gota.
Coloque suavemente o deslizamento de cobertura na parte superior da amostra. Sele o deslizamento da tampa com esmalte para preservar a umidade durante todo o processo de imagem. Usando um microscópio de fluorescência combinado com uma câmera, detecte e capture imagens de seu estudo da região da cabeça em 20 x ampliação.
Monitore sete dias de nematoides transgênicos para morte celular neuronal dopaminérgica. Medir os agregados neuronais do policul na região principal de quatro dias de animais transgênicos que expressam 240 fusão com pessoas vivas. A morte celular necrótica induzida por canais de íons hiperativos é a principal em nematoides que tem antigos ovos pré-condição de choque térmico.
Pré-condicionamento de choque térmico, promovendo uma previsão contra a morte celular induzida por alfa-sinucleína em hermafrodita adulta de sete dias de idade e diminui os agregados de proteína q40 na região principal de quatro idosos. O envelhecimento é consequência dos danos causados pela degeneração gradual da homeostase celular e tecidual. Assim, a compreensão da manipulação da quebra neuronal relacionada à idade são prioridades dos primeiros lugares.
As técnicas apresentadas combinadas com genética e telas farmacológicas poderiam levar a uma notificação de moduladores normais de morte celular com potencial interesse terapêutico.
