Son yıllarda, insan ömrü, yaşam standartlarındaki gelişmeler ve tıp bilimindeki gelişmeler nedeniyle uzatıldı. Yaş birçok hayatı tehdit eden hastalıklar için en büyük risk faktörüdür, nörodejeneratif bozukluklar da dahil olmak üzere, Alzheimer gibi, Parkinson ve Huntington hastalığı. Burada, nöral dejenerasyonun hücresel moleküler mekanizmasını izlemek ve incelemek için hiper-aktif iyon kanalı kaynaklı nekroz ve protein agregaları nörotoksisiteye neden olan çok yönlü yeni yöntem modellerini kullanan metodolojiler gösteriyoruz.
Tepe sağlıklı larvaları dört yapmak ve nematod büyüme medya plaka üzerine üç Newton nematod yapmak, e.Coli ile diseksiyon stereo mikroskop kullanarak eeving. On ve dört nematod yerleştirin, parazitik enzim plakave standart sıcaklıkta büyümek, 20 derece santigrat. Beş gün sonra, 1 mL ve 9 tampon ile plaka yıkayın ve 1.5mL tüp hayvanları toplamak.
30 saniye için 30, 000 g santrifüj ve supernatant kaldırın. 0,5 mL kaplama çözeltisi ekleyin. Kaplama çözeltisi oda sıcaklığında saklanır.
Girdap ve hepsi eriyene kadar periyodik olarak izleyin. Beş dakikadan uzun süreler için kaplama kaçının. 30 saniye için 10, 000 g santrifüj ve supernatant kaldırın.
Paletin iki katını 1 mL ve dokuz arabellekle yıkayın. 30 saniye için 10000 g santrifüj ve supernatant kaldırın. Yıkadıktan sonra, 200 mikrolitre M9 tampon yumurta resuspend ve 25 dakika kuluçka, bir su banyosunda 34 santigrat derece.
20 santigrat derece yumurta ayrı bir grup koruyun. Pipet kontrol veya ısı şoku ile tedavi yumurta içeren 100 mikrolitre ve tohumsuz 10 GN plaka üzerine yerleştirin. Her tabakta en az 100-200 yumurta var.
Yumurtaları yumurtadan çıkana kadar 20 derecede kuluçkaya yatırın. Plakaları yıkamak ve 1,5 ml tüp te L1 yaşam ve nematodları toplamak için kullanın ve M9 tampon. Santrifüj 10, 000 g 30 saniye.
Supernatant çıkarın ve palet tutun. Nematodları anestezik için 20 milimolar M9 levanjiyal tampon 100 mikrolitre ekleyin. Pipet 10 mikrolitre M9 levanjiyal tampon, L1 saat içeren ve 2% agar-ls nokta yerde yavaşça numunenin üstüne bir coverslip monte.
DIC mikroskopisini kullanarak saati gözlemleyin. 630 reseptör nöronlarının tarama dejenerasyonu bu nematod karakteristik bir sanal destekli görünüm ile hücreleri sayarak. Nematodları seçerek ve her biri 15-20 L4 larvaları ilk olarak C bakterisi sonra GM plakaları üzerinde süzünerek senkronize edin.
Kuluçka ve nematodlar 20 santigrat derece standart sıcaklıkta büyümeye izin. 34 santigrat derece ayarlanmış bir kuvöz plakaları aktararak 30 dakika boyunca günlük önkoşul gerçekleştirin. Daha sonra ön koşullu nematodları standart sıcaklıkta 20 santigrat derece geri getirin.
Agar-ls nokta merkezinde 20 milimolar M9 levanjiyal tampon damla 10 mikrolitre ekleyin. İlgili transgenik nematodları seçin ve M9 levanjiyal damla aktarın. Damla başına 20-30 nematod yerleştirin.
Numunenin üstüne hafifçe kapak yerleştirin. Görüntüleme işlemi boyunca nemi korumak için kapak fişini oje ile kapatın. Bir kamera ile birlikte bir floresan mikroskop kullanarak, tespit ve 20 x büyütme de kafa bölgesinin çalışma görüntüleri yakalamak.
Dopaminerjik nöronal hücre ölümü için yedi günlük transgenik nematodları izleyin. Canlı insanlarla 240 füzyon ifade dört günlük transgenik hayvanların baş bölgesinde nöronal polül agregaları ölçün. Hiperaktif iyon kanallarının neden olduğu nekrotik hücre ölümü, eski ısı şoku ön koşulu yumurtaları olan nematodların en büyük nedenidir.
Isı şoku önkoşullanma, yedi günlük yetişkin hermafrodit alfa-sinüklein indüklenen hücre ölümüne karşı bir tahmin teşvik ve dört günlük erişkinlerin baş bölgesinde Q40 protein agregaları azalır. Yaşlanma hücresel ve doku homeostazkademeli dejenerasyonu neden olduğu hasarın bir sonucudur. Bu nedenle yaşa bağlı nöronal kırılma manipüle anlayış üst yerlerde öncelikleri vardır.
Genetik ve farmakolojik ekranlar ile birlikte sunulan teknikler potansiyel terapötik ilgi ile normal hücre ölümü modülatörleri bir bildirim yol açabilir.
