يمكن استخدام هذا النظام التعريفي العصبي العضلي البشري للحث على تكوين مكونات ما قبل وما بعد التشابك ، بما في ذلك الخلايا العصبية الحركية والعضلات الهيكلية وخلايا Schwann. ليس فقط يمكن الحصول على بنية NMJ ناضجة ومعقدة في طبق ثقافة واحدة من خلية واحدة بدءا من السكان، ولكن NMJ الناتجة تمتلك أيضا القدرة على التعاقد. هذه الطريقة لديها إمكانية لدراسة الأمراض العصبية العضلية، مثل ضمور العضلات الشوكي، وفحص المركبات العلاجية.
إنّ الـ NMJ المُتمايزة نسيج سميك جداً ومعقد، ومن الصعب تصوره. من خلال إظهار الإجراء ، يمكننا إرشاد القراء كيفية تحديد هياكل محددة. غسل الخلايا مع ثلاثة ملليلتر من برنامج تلفزيوني قبل إضافة ملليلتر واحد من حل مفرزة الخلية إلى طبق بيتري.
بعد 10 دقائق في 37 درجة مئوية، إضافة ثلاثة ملليلترات من الرئيسيات الجنينية خلية جذعية متوسطة لكل بئر والماصات بلطف ثلاث مرات لفك الخلايا من الأغطية. بعد ذلك، قم بتجميع المناباتات الخارجية التي تحتوي على الخلايا الجذعية المنفصلة في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر للطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه الخلية الجذعية في ثلاث ملليلترات من الخلايا الجذعية الجنينية الطازجة ذات الخلايا الجنينية المتوسطة المكملة بمثبط 10 ميكرومولار Y-27632 ROCK للعد. ثم تمييع الخلايا إلى مرتين 10 إلى الخلايا الخمس لكل ملليلتر متوسطة مكملة بتركيز مثبطات روك وإرجاع ميليلترين من الخلايا إلى كل غطاء في كل بئر من لوحة الستة البئر المغلفة بالمصفوفة خارج الخلية.
بعد 24 ساعة، استبدل المابير في كل بئر بمليلترين من الخلايا الجذعية الجنينية الجديدة من الرئيسيات المتوسطة المكمّلة بم ميكروغرام واحد لكل ملليلتر من الداكسيسيكلين وإعادة الطبق إلى حاضنة ثقافة الخلية لمدة 24 ساعة. في نهاية الحضانة، استبدال supernatants مع مليلتر اثنين من التمايز المتوسطة تكمل مع دوكسيسيكلين في بئر وإعادة لوحة إلى حاضنة ثقافة الخلية لمدة 10 أيام. في نهاية الحضانة، استبدال زانات مع مليلتر اثنين من تمايز ميوجيني المتوسطة تكمل مع دوكسيسيكلين في بئر والعودة لوحة إلى الحاضنة ثقافة الخلية لمدة 10 أيام إضافية.
في نهاية الحضانة، استبدال المهاترات مع مليلترين من تقاطع عصبي عضلي المتوسطة في البئر وإعادة لوحة إلى حاضنة ثقافة الخلية لمدة 30 يوما. في نهاية الحضانة، تصور تقاطعات العصبية العضلية المختلفة بواسطة المجهرية المقلوبة. لتحريك تقلصات ميوتوب، إضافة 25 ملليمولر كلوريد الكالسيوم إلى كل بئر من خلايا تقاطع عصبي عضلي متمايزة.
وفي غضون دقيقة أو دقيقتين من العلاج، ضع الطبق على خشبة المجهر المقلوب. باستخدام المجهر الخلية الحية، تسجيل فيلم من تقلص ميوتوب لمدة 20 ثانية. في نهاية التسجيل، إضافة 300 نانوغرام لكل ملليلتر من كوراري إلى الوسط الثقافة وتسجيل الفيلم لمدة 20 ثانية أخرى قبل فتح ملف الفيلم في برنامج تحليل ناقلات الحركة المناسبة للتحليل.
يمكن إجراء تلطيخ مناعي للسفن العصبية العصبية ومستقبلات الأستيل كولين لتحديد الخلايا العصبية. يمكن تحديد الخلايا العصبية الحركية من قبل TUJ 1 و جزيرة 1 تلطيخ، في حين يمكن تحديد ميوتيوب ما بعد متشابك من قبل تلطيخ لسلسلة الثقيلة الميوسين. يمكن تسمية خلايا Schwann مع الأجسام المضادة S-100.
في هذه الصور المجهرية الإلكترونية المسح، يمكن ملاحظة مورفولوجيا الوصلات العصبية العضلية الناضجة مع تصور واضح لمحطات محور عصبي الموسعة، والمحاور، وألياف العضلات. يمكن استخدام المجهر الإلكتروني للإرسال لتصور البنية الفائقة الناضجة للمكونات العصبية العضلية، بما في ذلك محطة محور عصبي presynaptic مع الحوليات المتشابكة ومنطقة ما بعد التشابك، والتي يتم فصلها بواسطة الشق متشابك. طيات تقاطع علامة تقاطع بين الخلايا العصبية والألياف العضلية.
هنا، يتم عرض محطات محور عصبي ناضجة التي تحتوي على المحاصل العصبية. إذا أخذت هذه الخصائص المورفولوجية مجتمعة، تشير إلى أن المكونات العصبية العضلية كانت مستحثة بشكل جيد ونضجت. ويكشف التقييم الوظيفي للخلايا أن إشارات الحركة العصبية العضلية البارزة يمكن أن تستحثها كلوريد الكالسيوم وأن هذه الانقباضات يمكن أن تنقطع عن طريق تأكيد كوراري على أن إشارات الخلايا العصبية الحركية تنتقل عبر الوصلة العصبية العضلية لتحفيز تقلص العضلات.
كثافة البذر الخلية يؤثر على كفاءة تشكيل NMJ. ويمكن تعديله للتكيف مع البروتوكول، وفقا للأغراض التجريبية. تحتوي هذه الثقافة العصبية العضلية على أنواع خلايا متعددة، ويمكن استخدام هذه المكونات لدراسة التفاعلات بين هذه الخلايا أثناء تطور الوصلات العصبية العضلية أو استجابة لأمراض أمراض محددة.
