التزجيج البويضات وإجراءات الاحترار ضرورية للحفاظ على الخصوبة. اتباع هذا البروتوكول كما هو موضح يسمح للمستخدم لتحقيق أقصى قدر من فعالية هذه الإجراءات. الحفاظ على الخصوبة لتزجيج البويضات هو اليوم نهج راسخ ومقبول أخلاقيا.
فهي تسمح بتحقيق نتائج سريرية فعالة ومتسقة والتغلب على القيود الأخلاقية والقانونية المرتبطة بالتبريد الجنيني. لتحقيق الكفاءة في عملية التزجيج ، من المهم أن تصبح على دراية بجميع النقاط الحرجة للبروتوكول ، مع إيلاء اهتمام خاص لوقت تعرض العينات لمضادات البروتين المبرد. في غضون 38 ساعة من الاسترجاع وبعد التكفير مباشرة، قم بتسمية جميع الإمدادات البلاستيكية باسم المريض وهويه ونوع محلوله، واطلب من الشاهد تأكيد معلومات المريض على جهاز التبريد.
عندما تم تسمية جميع الإمدادات ، عكس بعناية كل قارورة من البويضات عدة مرات لخلط ووضع قطرة 30 ميكرولتر من HEPES العازلة المتوسطة تكملها الألبومين المصل البشري و30 ميكرولتر قطرة مجاورة من محلول الاعتدال على طبق بتري. استخدام ماصة متجرد لوضع البويضات في أول قطرة وإنشاء جسر متوسط إلى قطرة 30 ميكرولتر من محلول التوازن للحصول على زيادة تدريجية في تركيز المبردات. بعد ثلاث دقائق، إضافة ثانية 30 ميكرولتر قطرة من محلول التوازن إلى لوحة واستخدام ماصة لإنشاء جسر متوسط بين قطرات من الحل.
في حين أن البويضات هي equilibrating، إضافة قطرة واحدة 30 ميكرولتر من محلول التوازن لكل جهاز التبريد لاستخدامها على لوحة. بعد ثلاث دقائق، قم بتحريك البويضات إلى محلول التوازن النقي لمدة ست إلى تسع دقائق للسماح للبويضات بالعودة إلى حجمها الأولي. عندما تتعافى البويضات، قم بإعداد طبق التلقيح الاصطناعي المركزي الذي يحتوي على ملليلتر واحد من محلول التزجيج.
نقل البويضات إلى الطبق في أقل قدر ممكن من المتوسطة ونقلها بعناية لإزالة أي حل التوازن الزائد. قبل حوالي 10 ثوان من نهاية الحضانة ، ضع جهازا بالتبريد يحمل معلومات المريض تحت المجهر وضبط التركيز على طرف جهاز التبريد. ضع البويضات على جهاز cryo بجانب الطرف في الحد الأدنى من محلول التزجيج ونقل ماصة التعري بعيدا عن البويضات لإزالة أي محلول تزجيج زائد ، تاركا البويضات مغطاة بطبقة رقيقة من الوسط.
يغرق بسرعة جهاز التبريد في النيتروجين السائل ويهز الجهاز بسرعة لإزالة أي فقاعات الهواء من سطحه. عقد الغطاء الواقي لجهاز التبريد مع ملاقط، وملء الغطاء مع النيتروجين السائل قبل إدراج الجهاز في الغطاء مع الحفاظ على شرائط البروبيلين في النيتروجين السائل. ثم تخزين جهاز التبريد في visotube المسمى مع معلومات المريض وتحديث ورقة المختبر.
لارتفاع درجة حرارة البويضات، عكس بعناية كل قارورة من ذوبان، تمييع، وغسل حل تسخينها إلى درجة حرارة الغرفة، وإضافة ملليلتر واحد من محلول ذوبان إلى البئر المركزي للطبق بتري لمدة ساعة واحدة على الأقل حضانة في 37 درجة مئوية. قم بتسمية جميع الإمدادات البلاستيكية باسم المريض وهوية ونوع المحلول، واطلب من الشاهد تأكيد معلومات المريض على جهاز التبريد. لكل جهاز ليتم تسخينه، إضافة 200 ميكرولتر من محلول التخفيف إلى البئر الأول من لوحة بئر ستة وإضافة حجم متساو من محلول الغسيل إلى الآبار الثانية والثالثة من لوحة.
إضافة برنامج تلفزيوني إلى المنطقة على السطح الخارجي للأبار لمنع تبخر الحل. ضع طبق محلول الذوبان تحت مجهر الاستريو وضبط التركيز على وسط الطبق. تطور بعناية لإزالة الغطاء الواقي لجهاز التبريد مع الحفاظ على شرائط البروبيلين في النيتروجين السائل ونقل جهاز التبريد من النيتروجين السائل إلى محلول الذوبان في أسرع وقت ممكن لتجنب خطر التخلص.
بعد دقيقة واحدة، والتركيز على غيض من جهاز التبريد لتحديد موقع البويضات واستخدام ماصة متجرد في نهاية المطاف للافراج بلطف البويضات من الجهاز. استخدام ماصة متجرد قطرها 170 ميكرون لنقل البويضات وحجم صغير من محلول ذوبان الجليد في محلول التخفيف في البئر الأول من لوحة البئر الستة. بعد ثلاث دقائق، نقل البويضات إلى البئر الأول من محلول الغسيل لمدة خمس دقائق.
في نهاية الحضانة، نقل البويضات إلى البئر الثاني من محلول الغسيل واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة قبل نقل البويضات إلى حجم مناسب من المتوسط ثقافة التلقيح الاصطناعي قبل متساوية لمدة ساعة واحدة وتحديث ورقة المختبر. وعلى مدى فترة 12 عاما، خضعت 285 امرأة لاسترجاع بويضات واحدة على الأقل، مما استتبع تزجيج مجموعة كاملة من البويضات الناضجة التي تم جمعها. وخضع معظم هؤلاء النساء لعملية استرجاع واحدة.
خضع 35 استرجاع متعددة. كانت أسباب الخضوع لاسترجاع البويضات لتزجيج البويضات توصف بشكل عام بأنها طبية بخلاف السرطان والسرطان وغير الطبي وغيرها. كان المرضى الذين يعانون من سبب طبي لتزجيج البويضات والمرضى الذين يخضعون للحفاظ على الخصوبة بسبب السرطان أصغر سنا وأظهروا عددا أكبر من الجريبات النملية من المرضى الذين يعانون من أسباب غير طبية أو أسباب أخرى.
ومع ذلك ، حيث كانت معدلات النضج المتوسطة أقل قليلا في الأسباب الطبية للمرضى ، كان عدد البويضات المهزوم في المتوسط متشابها بين المجموعات. ما يقرب من نصف المرضى الذين يعانون من أسباب طبية أخرى غير السرطان، وغالبية المرضى الذين يعانون من أسباب أخرى لتزجيج البيض عاد فعلا لارتفاع درجة الحرارة. وعلى العكس من ذلك، فإن عددا قليلا جدا من المرضى الذين خضعوا للحفاظ على الخصوبة لأسباب السرطان أو غير الطبية استخدموا البويضات الزفيرة للتلقيح الاصطناعي.
على الرغم من الاختلافات في الوقت المنقضي بين التزجيج والاحترار ، كان معدل بقاء البويضات متشابها بين مجموعات المرضى ، مما يؤكد فعالية وسلامة بروتوكولات تزجيج البويضات والاحترار. وعلاوة على ذلك، فإن معدل البقاء على قيد الحياة مستقل عن تجربة المشغل في التزجيج والاحترار. وأهم الخطوات التي قد تؤثر على اتساق النتائج هي تلك المتعلقة بالاحترار.
لذلك ، من المهم حقا التحكم بعناية في حجم ودرجة حرارة حلول الذوبان. أنسجة المبيض cryopreservation الاستراتيجية الوحيدة قيد التحقيق حاليا كخيار لمرضى ما قبل البلوغ. ورغم أن هذا النهج يبشر بالخير، فإن له حدودا هامة تحد من تطبيقه.
