卵母細胞のガラス化および温暖化のプロシージャは、不妊治療の保存に不可欠である。このプロトコルに従って、ユーザーはこれらの手順の有効性を最大限に引き出すことを可能にします。卵母細胞ガラス化のための不妊治療の保存は、今日確立され、倫理的に受け入れられるアプローチです。
これは、効果的かつ一貫した臨床結果を達成し、胚凍結保存に関連する道徳的および法的限界を克服することを可能にする。ガラス化プロセスの習熟度を達成するためには、凍結保護剤へのサンプルの暴露時間に特に注意を払って、プロトコルのすべての重要な点に精通することが重要です。検索から38時間以内、脱分後すぐに、患者の名前、ID、および溶液の種類を持つプラスチック用品のすべてにラベルを付け、証人にクライオデバイス上の患者の情報を確認してもらいます。
すべての供給がラベル付けされたら、慎重に数回卵母細胞の各バイアルを反転し、人間の血清アルブミンと30マイクロリットルの平衡溶液をペトリ皿に補充したHEPES緩衝培地の30マイクロリットルの滴を混合して配置する。最初のドロップに卵母細胞を配置し、凍結保護剤の濃度の徐々に増加を得るために平衡溶液の30マイクロリットルのドロップに媒体の橋を作成するためにストリッパーピペットを使用してください。3分後、プレートに2番目の30マイクロリットルの平衡溶液を加え、ピペットを使用して溶液滴間にミディアムブリッジを作成します。
卵母細胞が平衡している間に、プレートに使用される各クライオデバイスに対して平衡溶液の1つの30マイクロリットルの滴を加える。3分後、卵母細胞を純粋な平衡溶液に6〜9分間移動させ、卵母細胞を初期サイズに戻します。卵母細胞が回復したら、1ミリリットルのガラス化溶液を含む中央ウェルIVF皿を調製する。
卵母細胞をできるだけ少ない媒体で皿に移し、余分な平衡溶液を取り除くために慎重に動かします。インキュベーション終了の約10秒前に、患者の情報を示すクライオ装置を顕微鏡下に置き、クライオ装置の先端に焦点を合わせます。ガラス化液の最小量で先端の横にあるクライオ装置に卵母細胞を置き、ストライパーピペットを卵母細胞から離して余分なガラス化溶液を取り除き、卵母細胞を薄い層の培地で覆ったままにします。
すぐに液体窒素にクライオデバイスを突っ込み、急速にその表面から任意の気泡を除去するためにデバイスを振ります。クライオ装置の保護キャップをピンセットで保持し、プロピレンストリップを液体窒素に保ちながらキャップに挿入する前に、キャップに液体窒素を充填します。次に、患者の情報がラベル付けされたビソチューブにクライオデバイスを保存し、検査シートを更新します。
卵母細胞の温暖化のために、室温に温めた解凍、希釈、洗浄液の各バイアルを慎重に反転させ、37°Cで少なくとも1時間のシャーレの中央井戸に解凍液を1ミリリットル加えます。すべてのプラスチック製の電源に患者の名前とIDと溶液の種類をラベル付けし、cryoデバイス上の患者の情報を確認するために証人に依頼します。各デバイスを温めるには、6つのウェルプレートの最初のウェルに200マイクロリットルの希釈液を加え、プレートの2番目と3番目のウェルに等量の洗浄液を加えます。
溶液の蒸発を防ぐために、井戸の外側の領域にPBSを追加します。解解凍液の皿をステレオ顕微鏡の下に置き、皿の中心に焦点を合わせます。プロピレンストリップを液体窒素に保ちながら、クライオ装置の保護キャップを取り除き、凍結装置をできるだけ早く解凍液に移し、脱窒のリスクを回避します。
1分後、クライオデバイスの先端に焦点を当てて卵母細胞を見つけ、最終的にはストリッパーピペットを使用してデバイスから卵母細胞を穏やかに放出します。直径170ミクロンのストリッパーピペットを使用して、6つのウェルプレートの最初のウェルで卵母細胞と少量の解凍溶液を希釈液に移します。3分後、卵母細胞を洗浄液の最初の井戸に5分間移動します。
インキュベーションの終わりに、卵母細胞を洗浄液の第2ウェルに移し、37°Cで1分間インキュベートしてから、卵母細胞を適切な量の所定のIVF培養液に1時間移管し、実験室のシートを更新する。12年間にわたり、285人の女性が収集された成熟した卵のコホート全体のガラス化を伴う少なくとも1つの卵母細胞検索を受けた。これらの女性のほとんどは、単一の検索を受けました。
35は複数の検索を受けました。卵ガラス化のための卵母細胞の検索を受ける理由は、一般的に癌以外の医療として特徴付けられていた, 癌, 非医学的, その他.卵ガラス化の医学的理由を有する患者および癌のために生殖能力の保存を受けている患者は若く、非医学的または他の理由を有する患者よりも高い凝結濾胞数を示した。
しかし、平均成熟率が患者の医学的理由でわずかに低かったため、平均してガラス化された卵母細胞の数は群間で類似していた。癌以外の医学的理由を持つ患者の約半数、および卵ガラス化の他の理由を持つ患者の大半は、実際に温暖化のために戻ってきました。逆に、癌または非医学的理由で不妊治療を受けた患者はごくわずかで、IVFにガラス化卵母細胞を使用した。
ガラス化と温暖化の間の時間差にもかかわらず、卵母細胞の生存率は患者群間で類似しており、卵母細胞ガラス化および温暖化プロトコルの有効性および安全性を確認した。さらに、生存率は、ガラス化および温暖化オペレータの経験とは無関係であった。結果の一貫性に影響を与える可能性のある最も重要なステップは、温暖化に関連するステップです。
そのため、解凍液の体積と温度を慎重に制御することが本当に重要です。卵巣組織凍結保存思春期前患者のための選択肢として現在調査中の唯一の戦略。有望ですが、このアプローチには、そのアプリケーションを制限する重要な制限があります。
