La vitrification des ovocytes et les procédures de réchauffement sont essentielles à la préservation de la fertilité. Le respect de ce protocole tel que démontré permet à un utilisateur de maximiser l’efficacité de ces procédures. La préservation de la fertilité pour la vitrification des ovocytes est aujourd’hui une approche établie et éthiquement acceptable.
Il permet d’obtenir des résultats cliniques efficaces et cohérents et de surmonter les limites morales et juridiques associées à la cryoconservation des embryons. Pour maîtriser le processus de vitrification, il est important de se familiariser avec tous les points critiques du protocole, en accordant une attention particulière au temps d’exposition des échantillons aux cryoprotecteurs. Dans les 38 heures suivant la récupération et immédiatement après la dénudation, étiquetez toutes les fournitures en plastique avec le nom, la pièce d’identité et le type de solution du patient, et demandez à un témoin de confirmer les informations du patient sur le dispositif cryogénique.
Lorsque toutes les fournitures ont été étiquetées, inverser soigneusement chaque flacon d’ovocytes plusieurs fois pour mélanger et placer une goutte de 30 microlitres de milieu tampon HEPES complétée par de l’albumine sérique humaine et une goutte adjacente de 30 microlitres de solution d’équilibrage sur une boîte de Pétri. Utilisez la pipette décapante pour placer les ovocytes dans la première goutte et créer un pont de milieu à une goutte de 30 microlitres de solution d’équilibrage pour obtenir une augmentation progressive de la concentration des cryoprotecteurs. Après trois minutes, ajoutez une deuxième goutte de 30 microlitres de solution d’équilibrage à la plaque et utilisez la pipette pour créer un pont moyen entre les gouttes de solution.
Pendant que les ovocytes s’équilibrent, ajoutez une goutte de 30 microlitres de solution d’équilibrage pour chaque dispositif cryogénique à utiliser sur la plaque. Après trois minutes, déplacez les ovocytes dans la solution d’équilibrage pure pendant six à neuf minutes pour permettre aux ovocytes de retrouver leur taille initiale. Lorsque les ovocytes se sont rétablis, préparez un plat de FIV de puits central contenant un millilitre de solution de vitrification.
Transférer les ovocytes dans le plat dans le moins de milieu possible et les déplacer soigneusement pour éliminer tout excès de solution d’équilibrage. Environ 10 secondes avant la fin de l’incubation, placez un dispositif cryogénique étiqueté avec les informations du patient sous le microscope et ajustez la mise au point sur la pointe du dispositif cryogénique. Placez les ovocytes sur le dispositif cryogénique à côté de la pointe dans la quantité minimale de solution de vitrification et éloignez la pipette du décapant des ovocytes pour éliminer tout excès de solution de vitrification, laissant les ovocytes recouverts d’une fine couche de milieu.
Plongez rapidement le dispositif cryogénique dans de l’azote liquide et secouez rapidement l’appareil pour éliminer les bulles d’air de sa surface. En tenant le capuchon protecteur du dispositif cryogénique avec une pince à épiler, remplissez le bouchon d’azote liquide avant d’insérer le dispositif dans le bouchon tout en gardant les bandes de propylène dans l’azote liquide. Ensuite, stockez le dispositif cryogénique dans un visotube étiqueté avec les informations du patient et mettez à jour la fiche de laboratoire.
Pour le réchauffement des ovocytes, inverser soigneusement chaque flacon de décongelation, de dilution et de solution de lavage réchauffé à température ambiante, et ajouter un millilitre de solution de décongélation au puits central d’une boîte de Pétri pour une incubation d’au moins une heure à 37 degrés Celsius. Étiquetez toutes les fournitures en plastique avec le nom et la pièce d’identité du patient et le type de solution, et demandez à un témoin de confirmer les informations du patient sur le dispositif cryogénique. Pour chaque dispositif à réchauffer, ajouter 200 microlitres de solution de dilution au premier puits d’une plaque de six puits et ajouter un volume égal de solution de lavage aux deuxième et troisième puits de la plaque.
Ajouter le PBS à la zone située à l’extérieur des puits pour éviter l’évaporation de la solution. Placez la boîte de solution de décongélation sous le stéréomicroscope et ajustez la mise au point au centre de la parabole. Tournez soigneusement pour retirer le capuchon protecteur d’un dispositif cryogénique tout en maintenant les bandes de propylène dans de l’azote liquide et transférez le dispositif cryogénique de l’azote liquide dans la solution de décongélation le plus rapidement possible pour éviter le risque de dévitrification.
Après une minute, concentrez-vous sur la pointe du dispositif cryogénique pour localiser les ovocytes et éventuellement utilisez une pipette décapante pour libérer doucement les ovocytes de l’appareil. Utilisez une pipette décapante de 170 microns de diamètre pour transférer les ovocytes et un petit volume de solution de décongélation dans la solution de dilution dans le premier puits de la plaque de six puits. Après trois minutes, déplacez les ovocytes dans le premier puits de la solution de lavage pendant cinq minutes.
À la fin de l’incubation, transférer les ovocytes dans le deuxième puits de la solution de lavage et incuber à 37 degrés Celsius pendant une minute avant de transférer les ovocytes dans un volume approprié de milieu de culture de FIV préébibli pendant une heure et de mettre à jour la feuille de laboratoire. Sur une période de 12 ans, 285 femmes ont subi au moins un prélèvement d’ovocytes impliquant la vitrification de toute la cohorte d’ovules matures collectés. La plupart de ces femmes ont subi une seule récupération.
35 ont subi de multiples récupérations. Les raisons du prélèvement d’ovocytes pour la vitrification des ovules étaient généralement caractérisées comme médicales autres que le cancer, le cancer, les produits non médicaux et autres. Les patients ayant une raison médicale pour la vitrification des ovules et les patients subissant une préservation de la fertilité en raison d’un cancer étaient plus jeunes et présentaient un nombre folliculaire antral plus élevé que les patients ayant des raisons non médicales ou autres.
Cependant, comme les taux de maturation moyens étaient légèrement inférieurs chez les patients pour raisons médicales, le nombre d’ovocytes vitrifiés en moyenne était similaire entre les groupes. Environ la moitié des patients ayant des raisons médicales autres que le cancer, et la majorité des patients ayant d’autres raisons de vitrification des œufs sont en fait revenus pour se réchauffer. Inversement, très peu de patients qui ont subi une préservation de la fertilité pour des raisons cancéreuses ou non médicamenteuses ont utilisé leurs ovocytes vitrifiés pour la FIV.
Malgré les différences dans le temps écoulé entre la vitrification et le réchauffement, le taux de survie des ovocytes était similaire entre les groupes de patients, confirmant l’efficacité et l’innocuité des protocoles de vitrification et de réchauffement des ovocytes. De plus, le taux de survie était indépendant de l’expérience de l’opérateur de vitrification et de réchauffement. Les étapes les plus cruciales qui peuvent affecter la cohérence des résultats sont celles liées au réchauffement.
Par conséquent, il est vraiment important de contrôler soigneusement le volume et la température des solutions de décongélation. La cryoconservation du tissu ovarien est la seule stratégie actuellement à l’étude en tant qu’option pour les patientes pré-pubères. Bien que prometteuse, cette approche présente d’importantes limites qui ont limité son application.
