يؤثر شكل الجسيمات النانوية على امتصاص الخلايا ، ولكن تم القيام بعمل محدود لتغيير شكل البوليمرات. يوضح هذا البروتوكول كيفية استطالة البوليمرات لتعزيز تطبيقات توصيل الأدوية. توفر هذه التقنية نهجا بسيطا يمكن أن يخلق العديد من الأشكال البوليمرية المختلفة ذات التطبيقات المحتملة في تسليم الأدوية أو الخلايا الزائفة أو الحقول الأخرى غير المستكشفة.
يمكن للبوليمرات الممدودة أن تقدم في وقت واحد أدوية مسعورة ومائية وبسهولة أكبر إلى الخلايا. يمكن أن تساعد هذه التقنية في نقل الأدوية عبر حاجز الدم في الدماغ ، ومعالجة التحدي الطبي الكبير. للبدء، حل 0.015 غرام من البوليستر مختارة في ملليلتر واحد من DMSO عن طريق الدوامة لمدة 15 دقيقة، وإعداد جهاز حقن المذيبات.
ضع لوحة البداية مباشرة أسفل مضخة الحقنة الرأسية، ثم ضع صفراء زجاجية من خمسة ملليلتر مع ملليلتر واحد من النوع الثاني من الماء المؤين في شريط نجم مصغر على لوحة التقليب. ضبط ارتفاع مضخات حقنة للسماح لطرف الإبرة لتكون مغمورة تماما في نوع اثنين من المياه deionized وتعيين معدل ضخ مضخة حقنة إلى خمسة ميكرولتر في الدقيقة الواحدة. قم بإجراء حقن المذيبات عن طريق رسم المذيبات العضوية وحل البوليستر في إبرة قياس 27.
ضع الإبرة في مضخة الحقن وتأكد من أنها آمنة. ضبط كتلة دفع للمس نهاية المكبس حقنة. بدء لوحة اثارة بحيث يتم الغزل الماء في 100 الثورات في الدقيقة الواحدة، ومن ثم بدء مضخة حقنة.
بمجرد أن غرست مضخة الحقنة بالكامل المذيب العضوي والبوليمر في الماء ، قم بإزالة شريط التقليب وسقف الزجاج الخسيس. لوصف البوليمر عن طريق تشتت الضوء الديناميكي أو DLS ، أضف ملليلتر واحد من الماء مع نسبة صغيرة من المذيبات العضوية والبوليمر إلى cuvette ملليلتر واحد. أداء DLS عن طريق وضع cuvette في النظام وإعداد تشغيل.
قراءة قطر البوليمرات كثافة مرجح ومؤشر تعدد الأضلاع أو PDI. بعد غسل غشاء غسيل الكلى كيلودالتون 300 وفقا للبروتوكولات التي تقدمها الشركة المصنعة، إضافة ملليلتر واحد من محلول البوليمر في خزان جهاز غسيل الكلى. ضع جهاز غسيل الكلى في كوب 250 ملليلتر مع 150 ملليلتر من النوع الثاني من الماء المنزوع الأيونات على لوحة تحريك.
تعيين لوحة اثارة لسرعة تسمح للحركة لطيف من جهاز غسيل الكلى وترك الأمر لتحريك بين عشية وضحاها. بعد الانتهاء من غسيل الكلى، استخراج محلول بوليمرسوم ملليلتر واحد من جهاز غسيل الكلى. إنشاء 150 ملليلتر من الملح المطلوب العازلة مع تركيز إما 50 أو 100 أو 200 ملليمولار من كلوريد الصوديوم على أساس خصائص البوليمرية المطلوب النهائي والحفاظ على حمولة جهاز غسيل الكلى في 150 ملليلتر من محلول الملح لمدة 18 ساعة للإثارة.
بعد تعديل الشكل، قم بإجراء قياسات DLS. إيلاء اهتمام خاص لقياسات PDI بالمقارنة مع البوليمرات الروحية كما يشير تغيير في PDI تغيير شكل فعال في البوليمرات. استخدم عناصر التحكم المناسبة للتصوير، وخاصة البوليمرات المعدلة غير الشكلية لضمان نجاح الطريقة.
تشير مراقبة TEM للبوليمرات المستندة إلى PEG-PLA إلى بنية كروية شاملة مع خط خارجي أكثر سمكا يدل على وجود غشاء. البوليمرات الحالية والهياكل المادية و SEM مع فرشاة مثل الطبقة الخارجية من PEG. أدى غسيل الكلى لمدة ساعة واحدة في الماء إلى نفس متوسط القطر العام مع إزالة المذيبات التي تقلل من قطر البوليمر.
عندما يتم استخدام تركيزات أولية أكبر من المذيبات العضوية ، من المتوقع انخفاض أكبر في القطر. في حين جعل البوليمرات PEG-PLA، ومن المتوقع تغييرات متواضعة في PDI، والتي قد تشير إلى تغيير في الشكل. عند dialyzing PEG-PLGA البوليمرات، والتي هي أكثر قليلا من البوليمرات مسعور PEG-PLA ضد الملح، وزيادة في PDI هو أكثر اتساقا مع استطالة مع جميع تدرجات الملح استكشاف مما يؤدي إلى زيادة في PDI.
وينبغي ملاحظة نتائج مماثلة عند استخدام 50 ميليمولار الملح الانحدار للتسبب في تغيير الشكل بغض النظر عن مسعور البوليستر. وفي الوقت نفسه، 100 و 200 ميليمولار كلوريد الصوديوم تدرجات الملح عرض الاتجاه المباشر الذي دلتا PDI يزيد مع زيادة البوليستر hydrophobicity. وأظهرت صور TEM من البوليمرات PEG-PLA dialyzed مع 50 مليون كلوريد الصوديوم أقل مع stomatocytes وقضبان ممدود.
كما زاد تركيز الملح إلى 100 ملليمولار، لوحظ زيادة عدد من قضبان تشكيل مع انخفاض عدد stomatocytes. غسيل الكلى ضد 200 البوليمرات ملليمولار أكثر اتساقا شكلت prolates مع نسب العرض إلى الارتفاع متواضعة. الجزء الأكثر تحديا من هذا البروتوكول هو جعل البوليمر باستمرار.
لذلك من المهم ممارسة الإجراء.
