A forma de nanopartículas influencia a absorção celular, mas trabalhos limitados foram feitos para mudar a forma dos polímeros. Este protocolo demonstra como alongar polímeros para aplicações aprimoradas de entrega de medicamentos. Esta técnica fornece uma abordagem simples que pode criar muitas formas polimeras diferentes com aplicações potenciais na entrega de drogas, pseudo células ou para outros campos inexplorados.
Polímeros alongados podem fornecer simultaneamente drogas hidrofóbicas e hidrofílicas e mais facilmente nas células. Esta técnica poderia ajudar a transportar drogas através da barreira hemencefálica, abordando um grande desafio médico. Para começar, dissolva 0,015 gramas de poliéster selecionado em um mililitro de DMSO por vórtice por 15 minutos e configure o aparelho de injeção de solvente.
Coloque a placa inicial logo abaixo da bomba de seringa vertical e coloque uma bile de vidro de cinco mililitros com um mililitro de água deionizada tipo dois em uma barra estelar em miniatura na placa de mexida. Ajuste a altura das bombas de seringa para permitir que a ponta da agulha esteja totalmente imersa na água desionizada tipo dois e ajuste a taxa de infusão da bomba de seringa para cinco microliters por minuto. Realize a injeção de solvente desenhando a solução de solvente orgânico e poliéster em uma agulha de calibre 27.
Coloque a agulha na bomba de seringa e certifique-se de que ela está segura. Ajuste o bloco de empurrador para tocar na extremidade do êmbolo da seringa. Inicie a placa de mexida para que a água esteja girando a 100 rotações por minuto e, em seguida, inicie a bomba de seringa.
Uma vez que a bomba de seringa tenha infundido totalmente o solvente orgânico e o polímero na água, remova a barra de agitação e tampa o vidro vil. Para caracterização do polímero através de dispersão dinâmica de luz ou DLS, adicione um mililitro de água com uma pequena porcentagem de solvente orgânico e polímero a um cuvette de um mililitro. Executei DLS colocando o cuvette no sistema e configurando a execução.
Leia o diâmetro ponderado de intensidade polímera e índice de polidispersidade ou PDI. Depois de lavar uma membrana de diálise de 300 kilodalton de acordo com os protocolos fornecidos pelo fabricante, adicione um mililitro de solução polímera no reservatório do dispositivo de diálise. Coloque o dispositivo de diálise no béquer de 250 mililitros com 150 mililitros de água deionizada tipo dois em uma placa de mexida.
Coloque a placa de mexida a uma velocidade que permita o movimento suave do dispositivo de diálise e deixe-a mexer durante a noite. Após a diálise concluída, extraia a solução de um mililitro polímero do dispositivo de diálise. Crie 150 mililitros de tampão de sal desejado com concentração de 50, 100 ou 200 mililitros de cloreto de sódio com base nas propriedades polimersomeas desejadas e mantenha a carga do dispositivo de diálise em 150 mililitros de solução de sal por 18 horas para mexer.
Após a modulação da forma, execute as medições de DLS. Preste especial atenção às medidas do PDI em comparação com os polímeros espirituais como uma mudança no PDI sugere uma mudança efetiva de forma nos polímeros. Use controles apropriados para imagens, especialmente polímeros modulados sem forma para garantir o sucesso do método.
A observação TEM dos polímeros baseados em PEG-PLA indicam uma estrutura esférica global com uma linha exterior mais espessa que é indicativa de uma membrana. Os polímeros apresentam-se como estruturas físicas e SEM com uma escova como camada exterior de PEG. Uma hora de diálise na água levou ao mesmo diâmetro médio global com a remoção do solvente diminuindo o diâmetro do polímero.
Quando são utilizadas concentrações iniciais maiores de solvente orgânico, são esperadas reduções de diâmetro maiores. Ao fazer os polímeros PEG-PLA, são esperadas mudanças modestas no PDI, o que pode indicar uma mudança de forma. Ao dialiser polímeros PEG-PLGA, que são ligeiramente mais hidrofóbicos do que polímeros PEG-PLA contra o sal, o aumento do PDI é mais consistente com o alongamento com todos os gradientes de sal explorados levando a um aumento do PDI.
Resultados semelhantes devem ser observados ao usar um gradiente de sal de 50 mililitros para causar uma mudança de forma, independentemente da hidrofóbica do poliéster. Enquanto isso, 100 e 200 milimônios de gradientes de sal de cloreto de sódio mostram a tendência direta de que o PDI delta aumenta com o aumento da hidrofóbica do poliéster. Imagens tem de polímeros PEG-PLA diariadas com 50 milhões de cloreto de sódio inferior mostraram com estomatócitos e hastes alongadas.
À medida que a concentração de sal aumentou para 100 milimilas, observou-se um aumento da formação de hastes com diminuição do número de estomatócitos. A diálise contra 200 polímeros milimilas formava prolatos mais consistentemente formados com proporções modestas. A parte mais desafiadora deste protocolo é fazer o polímero de forma consistente.
Por isso, é importante praticar o procedimento.
