ナノ粒子形状は細胞の取り込みに影響を与えるが、ポリマーソームの形状を変える作業は限られている。このプロトコルは、強化された薬物送達用途のためにポリマーソームを伸びる方法を示す。この手法は、薬物送達、疑似細胞、またはその他の未踏の分野での潜在的な用途を持つ多くの異なるポリマー形状を作成できる簡単なアプローチを提供します。
細長いポリマーソームは、疎水性薬物と親水性薬物を同時に細胞に容易に送達することができる。この技術は、血液脳関門を越えて薬物をシャトルするのに役立ち、主要な医学的課題に対処する可能性があります。まず、1ミリリットルのDMSOに選択したポリエステル0.015グラムを15分間ボルテックスして溶解し、溶媒噴射装置を設置した。
スタートプレートを垂直シリンジポンプの真下に置き、2つの脱イオン水を1ミリリットルずつ持つ5ミリリットルのガラス胆汁を、攪拌プレートのミニチュアスターバーに入れます。注射器ポンプの高さを調整して、針の先端を2種類の脱イオン水に完全に浸漬し、シリンジポンプの注入速度を毎分5マイクロリットルに設定します。有機溶剤とポリエステル溶液を27ゲージ針に引き出して溶剤注入を行います。
注射器ポンプに針を入れ、しっかりと固定されていることを確認します。プッシャーブロックを調整して、シリンジプランジャーの端に触れます。1分間に100回転で水が回転するように攪拌プレートを開始し、シリンジポンプを開始します。
シリンジポンプが有機溶媒とポリマーを完全に水に注入したら、かき混ぜ棒を取り除き、ガラスの皮をキャップします。動的光散乱またはDLSによるポリマーの特性評価のために、少量の有機溶媒とポリマーを含む1ミリリットルの水を1ミリリットルのキュベットに加える。システムにキュヴェットを配置し、実行を設定することによって、DLSを実行しました。
重合強度加重径および多分散度指標またはPDIを読み取る。製造業者が提供するプロトコルに従って300キロダルトン透析膜を洗浄した後、1ミリリットルのポリマー溶液を透析装置の貯蔵所に加える。250ミリリットルビーカーに透析装置を入れ、2種類の脱イオン水を150ミリリットルの水で攪拌プレートに置きます。
攪拌板を透析装置の穏やかな動きを可能にする速度に設定し、一晩かき混ぜるためにそれを残します。透析が完了した後、透析装置から1ミリリットルのポリマー溶液を抽出する。最終的に望ましいポリマー特性に基づいて塩化ナトリウムの50、100または200ミリモル濃度のいずれかで所望の塩バッファーの150ミリリットルを作成し、150ミリリットルの塩溶液の透析装置の負荷を攪拌のために18時間維持します。
形状変調後、DLS測定を行います。PDIの変化がポリマーソームの効果的な形状変化を示唆するので、精神的なポリマーソームと比較してPDI測定に特に注意を払う。イメージング、特に非形状変調ポリマーに適したコントロールを使用して、メソッドの成功を確実にします。
PEG-PLAベースのポリマーソーマのTEM観察は、膜を示す厚い外装線を有する全体的な球形構造を示す。このポリマーは、PEGの外層のようなブラシを用いて物理構造およびSEMとして存在する。水中での1時間の透析は、ポリマー直径を減少させる溶媒除去と同じ全体的な平均直径につながった。
有機溶媒の初期濃度が大きくなると、大きな直径が減少することが予想されます。PEG-PLAポリマーソームを作る間、PDIの緩やかな変化が予想され、これは形の変化を示す可能性がある。塩に対するPEG-PLAポリマーよりもわずかに疎水性であるPEG-PLGAポリマーソームを透析する場合、PDIの増加は、PDIの増加につながるすべての探索された塩勾配との伸びとより一貫している。
ポリエステル疎水性に関係なく形状変化を引き起こすために50ミリモル塩勾配を使用する場合、同様の結果を観察する必要があります。一方、100および200ミリモルの塩化ナトリウム塩勾配は、ポリエステル疎水性の増加に伴ってデルタPDIが増加する直接的な傾向を示す。5,000万個の低塩化ナトリウムを透析したPEG-PLAポリマーソームのTEM画像は、トマトサイトおよび細長いロッドで示された。
塩濃度が100ミリモルに増加するにつれて、ストマト細胞の数が減少したロッド形成の増加が観察された。200ミリモルポリマーソームに対する透析は、より一貫して適度なアスペクト比でプロレート形成される。このプロトコルの最も困難な部分は、一貫してポリマーを作るです。
だから、手順を練習することが重要です。
