تشريح المبيض المستوي للتحليل الهيكلي وتلطيخ الأجسام المضادة

الهدف من هذه الطريقة هو تشريح المبايض من Schmidtea mediterranea المستوي للتحليل الخلوي وتحت الخلوي لبيولوجيا البويضة مع TEM أو تلطيخ الأجسام المضادة. يستخدم هذا البروتوكول خطوة تثبيت قصيرة لتسهيل توطين وتشريح المبايض المستوية ، والتي ستوفر عمق التصوير وجودته التي لم يكن من الممكن الوصول إليها من قبل. سيكون أكبر صراع لشخص لم يقم بهذه التقنية من قبل هو توطين المبايض بعد التثبيت.

سيكون التعرف على تشريح المستويين الجنسيين قبل التجربة مفيدا. استعد للتجربة عن طريق إطعام المستويين الجنسيين بمعجون الكبد العضوي مرتين في الأسبوع لتحقيق النضج الجنسي. عالج الديدان الناضجة جنسيا باستخدام 5٪ N-acetyl-L-cysteine ، أو NAC ، في طبق في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق.

استبدل NAC ب 10 ملليلتر من 4٪ بارافورمالدهيد الطازج ، وثبت الديدان لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع الاهتزاز العرضي. ابدأ التشريح بعد 10 دقائق من إضافة 4٪ بارافورمالدهيد حيث يتم إصلاح الديدان. راقب التصبغ الظهاري لتحديد موقع الحبال العصبية البطنية ، والتي تظهر على شكل خطين مع تصبغ أخف يمتد من العقد الرأسية الأمامية باتجاه الذيل.

حدد موقع المبايض المفترضة من خلال مراقبة التصبغ والتحقق من صحة موضعها. باستخدام سكاكين جراحية ، قم بعمل جروح خلفية وأمام المبيضين لإزالة شظايا الدودة الأمامية والخلفية تماما. استخدم سكينا واحدا لتثبيت الدودة والسكين الآخر للتشريح.

نظف السكين المستخدم لعمل الجروح. لفصل المبيضين ، اقطع الخط الأوسط لجزء المبيض ، ثم اقلب الجانب البطني للجزء لأسفل. استخدم زوجين من الملقط المدبب من النوع 5-SA لتقشير الأنسجة الظهرية لكشف القناة الهضمية.

قم بإزالة فروع الأمعاء الموجودة فوق الأنسجة البطنية برفق باستخدام طرف الملقط أو فرشاة ناعمة لكشف المبيض. إزالة الأنسجة المحيطة لإخراج المبيض. أخرجي المبايض وانقليها إلى أنبوب سعة 1.5 ملليلتر لغسلها ب 1 ملليلتر من برنامج تلفزيوني.

تم استخدام أنماط التصبغ الظهرية والبطنية لتحديد موضع المبايض. تم قطع الأنسجة الزائدة بطريقة خطوة بخطوة. بمجرد تعرض المبيض ، تم قطع الأنسجة المحيطة.

تم استخدام المبايض التي تحتوي على أنواع متعددة من الخلايا الجسدية لكل من التحليل البنيوي الفائق وتلطيخ التألق المناعي. تسمح المبايض المشرحة بتصوير عالي الجودة للتشريح الخلوي ودون الخلوي للبويضات. يجب أن يسمح هذا الإجراء لتجارب تداخل الحمض النووي الريبي بفحص اللوائح الجزيئية لبيولوجيا البويضة.

أدت هذه التقنية إلى اكتشاف ظاهرة جديدة في بويضات الدودة المفلطحة أن الغلاف النووي يتحلل إلى حويصلات تغلف البروتينات النووية بدلا من البقاء سليمة ، ويعرف أيضا باسم الانقسام المغلق ، أو يتكسر إلى قطع ، ويعرف أيضا باسم الانقسام المفتوح.