يساعد بروتوكولنا في الإجابة عن الأسئلة المتعلقة بكيفية دعم التمارين البدنية لتوازن الكائن الحي. سمحت لنا الأنظمة بتشريح التأثيرات الميكانيكية المباشرة على الدماغ من العواقب المعقدة للأنشطة البدنية مثل المشي والركض. للبدء ، قم بتثبيت مقياس التسارع أعلى رأس الفئران باستخدام شريط جراحي.
بعد الشفاء التام من التخدير ، ضع الجرذ في جهاز المشي. اضبط جهاز المشي بسرعة معتدلة بسرعة 20 مترا في الدقيقة. استخدم البرنامج التطبيقي لقياس حجم التسارع الرأسي على طول المحور X و Y و Z عندما يقوم الجرذ بتشغيل جهاز المشي.
قم بمطابقة القيم التي تم الحصول عليها من البرنامج مع حجم تردد التسارع الرأسي في نظام PHM. اضبط مسبقا سعة تذبذب المنصة وسرعة دوران الكاميرا على شكل المروحة. ثم ضع الماوس في وضع الانبطاح مع وضع الرأس على التذبذب وبقية الجسم على المنصات الثابتة.
قم بتشغيل المحرك لتذبذب المنصة عموديا وتطبيق PHM على الماوس. في العلبة البلاستيكية الشفافة ، قم بإعداد كاميرا الفيديو بمعدل إطارات 24 إطارا في الثانية لتسجيل المساحة بأكملها. بعد ذلك ، قم بإدارة خمسة هيدروكسيتريبتوفان داخل الصفاق إلى الماوس.
ضع الماوس في القفص الشفاف وابدأ التسجيل لمدة 30 دقيقة. راجع الفيديو المسجل بسرعة 0.5x واحسب ارتعاش الرأس يدويا. استرجع عمليات التشريح البردي لدماغ الفأر من صندوق الشريحة.
اترك الشرائح على مناديل نظيفة في درجة حرارة الغرفة حتى تجف العينات تماما. استخدم قلم مانع السوائل لرسم دائرة حول الأنسجة المقطعة بالتبريد. ثم أضف حل TBS-T.
في الجزء السفلي من الدرج ، ضع مناديل مبللة لخلق بيئة رطبة للشرائح. بعد النفاذية باستخدام TBS-T ، أضف 4٪ مصل حمير للحجب واحتضانه في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. شطف الشرائح مرة واحدة عن طريق الغمر في TBS-T لمدة خمس دقائق.
ثم ضع 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية المخففة بشكل مناسب ومزيج dappy على كل شريحة. غطي الصينية واحتضنها في درجة حرارة الغرفة طوال الليل. بعد الحضانة ، شطف مع TBS-T ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منهما.
ضع 100 ميكرولتر من الأنواع المخففة بشكل مناسب مع الأجسام المضادة الثانوية الفلورية المتطابقة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. بعد الشطف باستخدام TBS-T ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منهما ، قم بتركيب الشرائح بوسيط التثبيت وقم بتغطية الشرائح بزلات الغطاء. بعد التركيب ، اعرض العينة تحت مجهر مضان.
تم تعديل نظام PHM لإنتاج قمم تسارع عمودية عند حوالي 1.0 مرة G وهو ما يعادل رؤوس الفئران أثناء تشغيل جهاز المشي. أدى تطبيق PHM على الفئران إلى تخفيف استجابة ارتعاش الرأس بشكل كبير مقارنة بالفئران الضابطة التي تمثل تأثيرا قمعيا ل PHM على إشارات مستقبلات 5-HT2A في الخلايا العصبية لقشرة الفص الجبهي. جهاز المشي الذي يعمل في PHM عزز بشكل كبير استيعاب مستقبلات 5-HT2A والخلايا العصبية لقشرة الفص الجبهي للفأر.
أكد القياس الكمي للمناطق الإيجابية لمستقبلات 5-HT2A الداخلية والمرتبطة بالغشاء بالنسبة للمنطقة الجديدة والإيجابية هذه الملاحظة. أظهر التلطيخ المناعي والقياس الكمي لتعبير c-Fos في الخلايا العصبية الإيجابية لمستقبلات 5-HT2A أن جهاز المشي الذي يعمل في PHM منخفض التنظيم 5-HTP الناجم عن تعبير c-Fos. هذا هو الحدث الخلوي المصب لتنشيط مستقبلات 5-HT2A والخلايا العصبية PFC للفأر.
يمكن تطبيق التدخل الميكانيكي على أجزاء الجسم بخلاف الرأس للتحقيق في الجوانب الميكانيكية لتأثيرات التمرين.
