Protokolümüz, fiziksel egzersizin organizma homeostazını nasıl desteklediği sorularını cevaplamaya yardımcı olur. Sistemler, beyin üzerindeki doğrudan mekanik etkileri, yürüyüş ve koşu gibi fiziksel aktivitelerin karmaşık sonuçlarından ayırmamıza izin verdi. Başlamak için, ivmeölçeri cerrahi bant kullanarak bir sıçanın başının üstüne sabitleyin.
Anesteziden tamamen kurtulduktan sonra, sıçanı koşu bandı makinesine yerleştirin. Koşu bandını dakikada 20 metrede orta bir hıza ayarlayın. Sıçan koşu bandını çalıştırırken X, Y ve Z ekseni boyunca dikey ivmelenmelerin büyüklüğünü ölçmek için uygulama yazılımını kullanın.
Yazılımdan elde edilen değerleri, PHM sistemindeki dikey ivme sıklığındaki büyüklükle eşleştirin. Platformun salınım genliğini ve pervane şeklindeki kamın dönme hızını önceden ayarlayın. Ardından, fareyi, kafası salınımlı ve vücudun geri kalanı statik platformlarda olacak şekilde eğilimli bir konuma getirin.
Platformu dikey olarak salınıma sokmak için motoru açın ve fareye PHM uygulayın. Şeffaf plastik kutuda, tüm alanı kaydetmek için video kamerayı 24 FPS kare hızında ayarlayın. Daha sonra, intraperitoneal olarak beş hidroksitriptofanı bir fareye uygulayın.
Fareyi şeffaf kafese yerleştirin ve 30 dakika boyunca kayda başlayın. Kaydedilen videoyu 0,5x hızında inceleyin ve kafa seğirmesini manuel olarak sayın. Fare beyninin kriyoseksiyonlarını slayt kutusundan alın.
Numuneler tamamen kuruyana kadar slaytları oda sıcaklığında temiz mendiller üzerinde bırakın. Kriyoseksiyonlu dokunun etrafına bir daire çizmek için sıvı bloker kalem kullanın. Ardından TBS-T çözümünü ekleyin.
Bir tepsinin altına, slaytlar için nemli bir ortam yaratmak üzere nemlendirilmiş mendiller yerleştirin. TBS-T ile permeablizasyondan sonra, bloke etmek için% 4 eşek serumu ekleyin ve bir saat boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. Slaytları beş dakika boyunca TBS-T'ye batırarak bir kez durulayın.
Daha sonra her slayta 100 mikrolitre uygun şekilde seyreltilmiş birincil antikor ve dappy karışımı uygulayın. Tepsiyi örtün ve gece boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. Kuluçkadan sonra, TBS-T ile her biri beş dakika boyunca üç kez durulayın.
Uygun şekilde seyreltilmiş türlerin 100 mikrolitresini floresan sekonder antikoru ile eşleştirin ve bir saat boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. TBS-T ile her biri beş dakika boyunca üç kez duruladıktan sonra, kızakları montaj ortamıyla monte edin ve slaytları kapak fişleriyle örtün. Montajdan sonra, numuneyi bir floresan mikroskobu altında görüntüleyin.
PHM sistemi, koşu bandı çalışması sırasında sıçanların kafalarına eşdeğer olan yaklaşık 1.0 kat G'de dikey ivme zirveleri üretecek şekilde ayarlandı. Farelere PHM uygulaması, prefrontal korteks nöronlarında PHM'nin 5-HT2A reseptör sinyallemesi üzerindeki baskılayıcı etkisini temsil eden kontrol farelerine kıyasla kafa seğirme tepkisini önemli ölçüde azaltmıştır. PHM'de çalışan koşu bandı, 5-HT2A reseptör içselleştirmesini ve fare prefrontal korteks nöronlarını önemli ölçüde geliştirdi.
İçselleştirilmiş ve membranla ilişkili 5-HT2A reseptör pozitif alanlarının yeni ve pozitif alana göre nicelleştirilmesi bu gözlemi doğruladı. 5-HT2A reseptörü pozitif nöronlarda c-Fos ekspresyonunun immünosstaining ve nicelleştirilmesi, PHM'de çalışan koşu bandının 5-HTP'yi aşağı regüle ettiğini gösterdi. Bu, 5-HT2A reseptör aktivasyonu ve fare PFC nöronlarının aşağı akış hücresel olayıdır.
Egzersiz etkilerinin mekanik yönlerini araştırmak için kafa dışındaki vücut kısımlarına mekanik müdahale uygulanabilir.
